يوفر بروتوكولنا خرائط 2D مفصلة لعمر الفسفرة وتركيز الأكسجين في الأجسام العيانية ، وخاصة الأنسجة الحيوانية الحية والحيوانات الكاملة ، عن طريق مجسات مخصصة ومواد الاستشعار. هذه المعلومات مهمة للعديد من مجالات البحث. يستخدم بروتوكولنا وحدة تصوير متكاملة ومدمجة تعمل في وضع TCSPC وتوفر تصورا سهلا ودقيقا لتوزيع العمر والأكسجين في العينات البيولوجية المعقدة ، مثل أنسجة الحياة.
خذ محول الكريكيت وافحصه من جوانب مختلفة. قم بإزالة محول C-mount الأمامي لإظهار مكثف Photonis PP0360EF الموجود في لعبة الكريكيت ، ثم أعد محول C-mount مرة أخرى. قم بإزالة محول C-mount الأمامي للكريكيت وأدخل مرشح الانبعاثات 650 زائد / ناقص 50 نانومتر.
قم بإصلاحه عن طريق إعادة C-mount. بعد ذلك ، قم بتوصيل وحدة الكاميرا ثلاثية الكاميرات TPX بالجانب الخلفي من وحدة الكريكيت عبر محولات الحلقة الخاصة بهم. قم بتوصيل العدسة بالجانب الأمامي من وحدة الكريكيت عبر محول C-mount.
قم بتوصيل مؤشر LED بمصدر طاقة ومولد نبض. الآن ، قم بتركيب مؤشر LED فائق السطوع 390 نانومتر على عمود متصل بلوح تجارب داخل الصندوق الأسود. قم بتشغيل LED وركزه لضمان إثارة فعالة وموحدة للعينة التي يتم تصويرها.
قم بتركيب مجموعة الكاميرا أعلى الصندوق الأسود البصري متجها لأسفل نحو المرحلة التي سيتم تصوير العينات فيها. قم بتوصيل الكاميرا و LED بمولدات ثنائية النبضات وراسم الذبذبات رباعي القنوات. باستخدام الإعدادات على راسم الذبذبات ومولدات النبض ، قم بمزامنة النبضات المرسلة إلى الكاميرا ومؤشر LED.
استخدم الكابل والمقبس الخاصين على وحدة الكريكيت لتوصيل المكثف بمصدر طاقة قياسي وضبط الكسب على 2.7 فولت. ضع العينة أمام عدسة الكاميرا. ثم قم بتشغيل الكاميرا وجميع الوحدات الكهربائية ، باستثناء المكثف.
قم بتنشيط برنامج SOFI لضبط المعلمات التشغيلية ، مثل التركيز ومحاذاة العينة. في الوحدات ، اضبط تعرض الإطار على 0.01 ثانية. حدد إطارات لانهائية واضبط وضع تشغيل البكسل على الوقت فوق الحد.
ثم انتقل إلى معاينة وحدد الوحدة النشطة لفتح نافذة إطارات Medipix / Timepix. في الخطوة التالية ، بعد بدء التسجيل ، اضبط مقياس الألوان وقم بتدوير الصورة إلى الاتجاه المطلوب. بعد ذلك ، أطفئ الأنوار في الغرفة وقم بتشغيل المكثف.
ركز بصريات الكاميرا على مرحلة العينة باستخدام إمكانات التركيز البؤري للعدسة ومحول الكريكيت لإنشاء صور واضحة للعينات ذات تباين وسطوع جيدين. بمجرد اكتمال التركيز ، أغلق برنامج SOFI. بعد ذلك ، انتقل إلى الجهاز ، وقم بتنفيذ أوامر برنامج التصميم المخصص للحصول على البيانات الأولية بالتنسيق الثنائي وإغلاق الجهاز.
افتح محطة طرفية جديدة لمعالجة البيانات المكتسبة. قم بتحميل ملف البيانات وتشغيل مخفض البيانات. قم بتحليل بيانات ما بعد العملية باستخدام برنامج مخصص مكتوب بلغة C والذي سيكتب البيانات في ملف صورة ICS.
بعد ذلك ، افتح ملفات صور ICS باستخدام برنامج Time Resolve Imaging المتاح مجانا ، واستخدم وظيفتين أسيتين لتناسب اضمحلال الفسفرة. أخيرا ، افتح ملف مجهز. ملفات صور ICS مع برنامج تحليل الصور المتاح.
قم بإنشاء صور فسفورية مدى الحياة باستخدام جداول البحث وقم بترميزها بمقياس ألوان زائف. استخدم وظيفة القياس لحساب متوسط قيم العمر للصورة بأكملها أو مناطق الاهتمام. يتم عرض صور مجهرية لشدة الفسفرة والتصوير مدى الحياة للفسفور لبقعة مستشعر صبغة البلاتين ثماني إيثيل بورفيرين في الحالات المؤكسجة وغير المؤكسجة.
تأكد من تركيب مرشح الانبعاثات الصحيح داخل لعبة الكريكيت واستخدام مؤشر LED الصحيح وتوصيلات الكابلات وإعدادات النبض. حاليا ، يقتصر هذا البروتوكول على النماذج الحيوانية ، ولكن من المحتمل أن يتم تطبيقه لتشخيص وعلاج الحالات المرضية المرتبطة بنقص الأكسجة في الأنسجة ، مثل السرطان والسكتة الدماغية والالتهابات.
