该手术的总体目标是证明以快速、安全和有效的方式手术切除小鼠睾丸和卵巢。小鼠睾丸切除术是通过在阴囊中切腹中线切口进行的,睾丸被隔离并切除,然后闭合皮肤切口。小鼠卵巢切除术是通过在腹部进行背外侧切口,在那里卵巢被隔离和切除,然后闭合皮肤切口,可以选择在另一侧重复此手术以进行双侧卵巢切除术。
要开始小鼠睾丸切除术,首先要记录雄性小鼠的体重,并准备按照您的机构指南使用适当的止痛药和麻醉剂。一旦鼠标处于麻醉状态,用润滑眼凝胶覆盖眼睛,以保护它们在手术过程中不会变干。在继续之前,通过执行脚趾捏反应测试,确保鼠标处于适当的麻醉平面。
接下来,剃掉鼠标的腹股沟和阴囊区域。使用棉签涂抹器,在手术部位和周围区域涂抹一层薄薄的脱毛膏。30 秒后,用干净的纱布海绵去除脱毛膏。
将鼠标转移到手术区域并确保有热源可用。使用柔软的胶带将鼠标的脚粘在手术垫上。如果睾丸已经上升到腹部,对腹部轻轻按压以帮助它们下降。
用Betadine溶液擦洗皮肤,从手术部位的中心开始,然后向外轻松向剃须区域的边缘工作。在Betadine磨砂之后,以类似的方式进行酒精磨砂。重复此过程三次以确保适当的皮肤消毒。
用手术单盖住小鼠。抓住皮肤,做一个长约 1 至 1 1/2 厘米的中线切口。抓住皮肤的切割边界,使用钝头器械将皮肤与下面的组织分开。
花点时间在切口的外侧、上缘和下缘上做这个。接下来,通过将皮肤切口滑动到直接顶部来隔离一个睾丸。用一把镊子抓住睾丸周围薄而透明的提肌。
正确组织的识别可以通过其透明度和独立于其内部的底层组织移动的能力来确认。接下来,通过在组织的顶端切开一个切口来切开提睾肌。将锁定夹放在切割的提骨肌的后缘上,以保持组织上的张力。
用一把镊子抓住睾丸并将其从其乳鞘中取出。睾丸取出后,将组织横向滚动,并将连接睾丸肌肉与睾丸和附睾的睾丸和附睾的 cremaster 插入点定位在睾丸后侧。夹住并撕裂此组织以切断此连接。
慢慢拉出腹股沟脂肪垫,使其外部化。在这样做时,请注意出血的迹象,并确保在此过程中不要伤害任何血管。接下来,使用一对锁定止血器夹住精索和血管。
在睾丸保持轻微张力的同时,烧灼止血钳夹远端的精索和血管。缓慢释放止血剂,确保组织残端止血良好,不会继续出血。对 cremaster 肌肉施加轻微的向外压力将使该组织残端缩回体腔。
将提睾肌的两侧并拢。使用 4-0 或 5-0 可吸收缝合线,放置缝合线以连接 cremaster 肌肉的两端。缝合完成后,将缝合材料的末端修剪成 1/2 厘米长。
通过将皮肤切口滑动到另一侧的顶部,对另一个睾丸重复此过程,并按照用于切除第一个睾丸的相同步骤进行操作。一旦两个睾丸都被切除,并且已经缝合了cremaster的两侧,将皮肤向上剥离,并准备在该区域使用伤口夹。确保缝合线末端不会卡在伤口夹中。
鼠标现在可以继续进行术后监测了。为了准备小鼠卵巢切除术,称量雌性小鼠的体重,并按照您的机构指南给予止痛药和麻醉。涂抹润滑眼凝胶并检查以确保鼠标没有脚趾捏合反应。
剃掉小鼠背部的背外侧区域以准备手术部位。使用棉签涂抹器,在剃须区域涂抹一层脱毛膏。30 秒后,用干净的纱布海绵去除乳霜。
将鼠标转移到手术垫上,并确保有热源可用。用Betadine溶液擦洗皮肤,从中心开始,然后向外向剃须区域的边缘涂抹。然后用类似方式涂抹 70% 酒精溶液擦洗皮肤。
重复此过程总共三次,以确保适当的皮肤消毒。按照书面方案中的详细说明计划手术切口。将手术单放在小鼠的手术部位上。
用镊子抓住皮肤,用一厘米的切口切开皮肤。使用钝头器械或普通止血剂将皮肤与下层组织分开。花点时间在切口的外侧、上缘和下缘上做这个。
抓住腹壁,切开 1/2 厘米的切口。使用一把镊子将卵巢定位在切口内,然后拉动以使其外部化。一旦确定了组织,使用一对止血剂夹住并压碎远端子宫角。
使用第二对止血剂或一把镊子夹住第一个夹子的远端。保持底部止血不动,将顶部夹向上拉并远离身体,以对远端子宫角进行挤压和撕裂。慢慢释放止血剂并观察以确保手术部位没有过多出血。
将腹壁的两侧放在一起,并使用带有 4-0 可吸收缝合材料的单条缝合线缝合切口。缝合线固定后,将缝合线材料的末端修剪成 1/2 厘米长。将皮肤的两侧重新组合在一起,并准备放置伤口夹。
在剥离皮肤的同时,在切口部位放置一个伤口夹。鼠标现在可以继续进行术后监测了。根据您的机构指南记录手术日期和时间以及镇痛药给药。
一旦小鼠接受了手术睾丸切除术或卵巢切除术,将它们转移到干净、加热的笼子里。一旦小鼠恢复胸骨卧位,将它们放在干净的笼子里,并提供湿润的食物和水。在恢复期间,经常检查小鼠的手术部位,寻找任何感染或出血的迹象。
为防止损坏伤口夹,请在手术后一周内从卵巢切除小鼠的笼子中移除任何啮齿动物冰屋栖息地。14 天后,从鼠标皮肤上取下伤口夹。演示的方案详细说明了如何在小鼠中进行睾丸切除术和卵巢切除术以生成性激素耗尽模型。
这包括通过阴囊中的中线切口切除睾丸,然后将睾丸外化并切断血管中的精索,从而切除睾丸、附睾和腹股沟脂肪垫。手术卵巢切除术可以通过背侧切口进入背部并在卵巢、输卵管和子宫角远端外侧进行。随后切断远端子宫角,导致卵巢和输卵管切除。
仔细的手术技术和适当的术后护理将使手术部位愈合良好。这些外科手术可以通过在睾丸切除术后一周分析小鼠血清样本中的激素水平来进一步验证。卵巢切除术可以通过观察卵巢切除后的子宫萎缩来确认。
该协议能够快速有效地从小鼠身上切除卵巢和睾丸,以产生性激素耗尽模型。这可以有很多用途来研究这些激素的消耗如何影响各种器官和生理过程。