El objetivo general de este procedimiento es demostrar la extirpación quirúrgica de testículos y ovarios murinos de una manera rápida, segura y eficaz. La orquiectomía murina se realiza mediante una incisión ventral en la línea media en el saco escrotal, donde se aíslan y extirpan los testículos, seguido del cierre de la incisión en la piel. La ovariectomía murina se realiza mediante una incisión dorsolateral en el abdomen donde se aísla y extirpa el ovario, seguida del cierre de la incisión cutánea, con la opción de repetir este procedimiento en el otro lado para realizar una ovariectomía bilateral.
Para comenzar la orquiectomía murina, primero comience registrando el peso de un ratón macho y prepárese para administrar los analgésicos y anestésicos adecuados según sus pautas institucionales. Una vez que el ratón esté bajo anestesia, cubra los ojos con un gel lubricante para los ojos para evitar que se sequen durante el procedimiento. Antes de continuar, asegúrese de que el ratón esté en un plano adecuado de anestesia realizando una prueba de respuesta de pellizco de los dedos de los pies.
A continuación, afeita las zonas inguinal y escrotal del ratón. Con un aplicador con punta de algodón, aplique una capa delgada de crema depilatoria depilatoria en el sitio quirúrgico y las áreas circundantes. Después de 30 segundos, retire la crema depilatoria con la esponja de gasa limpia.
Transfiera el ratón a un área quirúrgica y asegúrese de que haya una fuente de calor disponible. Utilice cinta adhesiva suave para adherir las patas del ratón a la alfombrilla quirúrgica. Si los testículos han ascendido hacia el abdomen, ejerza una presión suave sobre el abdomen para ayudarlos a descender.
Frote la piel con la solución de Betadine, comenzando en el centro sobre el sitio quirúrgico y trabajando fácilmente hacia afuera hacia el borde del área afeitada. Siga el exfoliante de Betadine con un exfoliante con alcohol realizado de manera similar. Repita este proceso tres veces para garantizar una desinfección adecuada de la piel.
Cubra el ratón con el paño quirúrgico. Agarre la piel y haga una incisión en la línea media de aproximadamente 1 a 1 1/2 centímetros de largo. Agarrando el borde cortado de la piel, use un instrumento de punta roma para separar la piel del tejido subyacente.
Tómese el tiempo para hacer esto en los bordes lateral, superior e inferior de la incisión. A continuación, aísle un testículo deslizando la incisión en la piel para que quede directamente encima de él. Use un par de fórceps para agarrar el músculo cremaster delgado y transparente que rodea el testículo.
La identificación del tejido correcto puede confirmarse por su transparencia y su capacidad para moverse independientemente de los tejidos subyacentes encerrados en él. A continuación, haga una incisión en el músculo cremaster haciendo una incisión en el ápice del tejido. Coloque una pinza de bloqueo en el borde posterior del músculo cremaster cortado para mantener la tensión en el tejido.
Use un par de fórceps para agarrar el testículo y exteriorizarlo de su vaina cremaster. Una vez que el testículo esté fuera, enrolle el tejido lateralmente y localice el punto de inserción cremaster que conecta el músculo cremaster con el testículo y el epidídimo en el lado posterior del testículo. Sujeta y rasga este tejido para cortar esta conexión.
Exteriorice la almohadilla de grasa inguinal tirando lentamente de ella. Mientras hace esto, esté atento a los signos de sangrado y asegúrese de no dañar ninguno de los vasos sanguíneos en el proceso. A continuación, use un par de hemostáticos de bloqueo para sujetar el cordón espermático y los vasos sanguíneos.
Mientras mantiene una ligera tensión en el testículo, cauterice el cordón espermático y los vasos sanguíneos distales a la pinza del hemostático. Suelte lentamente el hemostático y asegúrese de que el muñón de tejido tenga una buena hemostasia y no continúe sangrando. La aplicación de una ligera presión hacia afuera sobre el músculo cremaster permitirá que este muñón de tejido se retraiga hacia la cavidad corporal.
Une los dos lados del músculo cremaster. Usando suturas absorbibles 4-0 o 5-0, coloque una sutura para unir los dos extremos del músculo cremaster. Una vez terminada la sutura, recorte los extremos del material de sutura para que tengan 1/2 centímetro de longitud.
Repita este proceso para el otro testículo deslizando la incisión en la piel para que quede encima del otro lado y siga los mismos pasos utilizados para extirpar el primer testículo. Una vez que se hayan extirpado ambos testículos y se hayan suturado ambos lados del cremaster, everte la piel hacia arriba y prepárate para aplicar un clip para heridas en el área. Asegúrese de que los extremos de la sutura no queden atrapados en el clip de la herida.
El ratón ya está listo para continuar con la monitorización postoperatoria. Para prepararse para la ovariectomía murina, pesa un ratón hembra y administra analgésicos y anestesia según las pautas institucionales. Administre gel lubricante para los ojos y verifique que el mouse no tenga una respuesta de pellizco de los dedos de los pies.
Afeita las regiones dorsolaterales de la espalda del ratón para preparar el sitio quirúrgico. Con un aplicador con punta de algodón, aplique una capa de crema depilatoria depilatoria en el área afeitada. Después de 30 segundos, retire la crema con una esponja de gasa limpia.
Transfiera el mouse a una alfombrilla quirúrgica y asegúrese de que haya una fuente de calor disponible. Frote la piel con la solución de Betadine, comenzando en el centro y trabajando fácilmente hacia afuera hacia el borde del área afeitada. A continuación, frote la piel con una solución de alcohol al 70% aplicada de manera similar.
Repita este proceso un total de tres veces para garantizar una desinfección adecuada de la piel. Planifique la incisión quirúrgica como se detalla en el protocolo escrito. Coloque un paño quirúrgico sobre el sitio quirúrgico del ratón.
Agarre la piel con pinzas e incida la piel con una incisión de un centímetro. Use un instrumento de punta roma o un par de hemostáticos simples para separar la piel del tejido subyacente. Tómese el tiempo para hacer esto en los bordes lateral, superior e inferior de la incisión.
Agarre la pared abdominal e incida con una incisión de 1/2 centímetro. Use un par de fórceps para ubicar el ovario dentro de la incisión y tire para exteriorizarlo. Una vez que se hayan identificado los tejidos, use un par de hemostáticos para sujetar y aplastar el asta uterina distal.
Use un segundo par de hemostáticos o un par de pinzas para pinzar justo distal a la primera pinza. Manteniendo el hemostático inferior quieto, tire de la pinza superior hacia arriba y lejos del cuerpo para realizar un aplastamiento y desgarro del cuerno uterino distal. Suelte lentamente el hemostático y observe para asegurarse de que no haya sangrado excesivo proveniente del sitio quirúrgico.
Junte los dos lados de la pared abdominal y suture la incisión para cerrarla, utilizando una sola sutura con material de sutura absorbible 4-0. Una vez que la sutura esté asegurada, recorte los extremos del material de sutura para que tengan 1/2 centímetro de largo. Vuelva a juntar los dos lados de la piel y prepárese para colocar un clip para heridas.
Mientras everte la piel, coloque una pinza para heridas sobre el sitio de la incisión. El ratón ya está listo para continuar con la monitorización postoperatoria. Documente la fecha y hora del procedimiento y la administración de analgésicos según sus pautas institucionales.
Una vez que un ratón se haya sometido a una orquiectomía u ovariectomía quirúrgica, transfiéralo a una jaula limpia y con calefacción. Una vez que un ratón haya recuperado la decúbito esternal, colóquelo en una jaula limpia y proporciónele comida húmeda y agua. Durante su recuperación, revise con frecuencia el sitio quirúrgico del ratón y busque cualquier signo de infección o sangrado.
Para evitar daños en la pinza de la herida, retire cualquier hábitat de iglú de roedores de la jaula de un ratón de ovariectomía durante una semana después de la cirugía. Después de 14 días, retire las pinzas de la piel del ratón. El protocolo demostrado detalla cómo realizar una orquiectomía y una ovariectomía en un ratón para generar un modelo con agotamiento de hormonas sexuales.
Esto implica la extirpación de los testículos a través de una incisión en la línea media del escroto, seguida de la exteriorización de los testículos y el corte del cordón espermático en los vasos sanguíneos, lo que resulta en la extirpación del testículo, el epidídimo y las almohadillas de grasa inguinal. La ovariectomía quirúrgica se puede realizar mediante una incisión dorsolateral en el dorso y la exteriorización del ovario, el oviducto y el asta uterina distal. A continuación, se corta el asta uterina distal, lo que lleva a la extirpación del ovario y el oviducto.
Una técnica quirúrgica cuidadosa y un cuidado postoperatorio adecuado darán como resultado sitios quirúrgicos bien curados. Estos procedimientos quirúrgicos pueden validarse aún más mediante el análisis de los niveles hormonales en muestras de suero de ratón una semana después de la orquiectomía. La ovariectomía puede confirmarse mediante la observación de la atrofia uterina tras la extirpación de los ovarios.
Este protocolo permite la extirpación quirúrgica rápida y eficaz de ovarios y testículos de ratones para generar un modelo con agotamiento de hormonas sexuales. Esto puede tener muchos usos para estudiar cómo el agotamiento de estas hormonas afecta a varios órganos y procesos fisiológicos.
