L’objectif global de cette procédure est de démontrer l’ablation chirurgicale des testicules et des ovaires murins de manière rapide, sûre et efficace. L’orchidectomie murine est réalisée par une incision de la ligne médiane ventrale dans le sac scrotal, où les testicules sont isolés et retirés, suivie de la fermeture de l’incision cutanée. L’ovariectomie murine est réalisée par une incision dorsolatérale dans l’abdomen où l’ovaire est isolé et retiré, suivie d’une fermeture de l’incision cutanée, avec la possibilité de répéter cette procédure de l’autre côté pour effectuer une ovariectomie bilatérale.
Pour commencer l’orchidectomie murine, commencez d’abord par enregistrer le poids d’une souris mâle et préparez-vous à administrer les analgésiques et les anesthésiques appropriés conformément aux directives de votre établissement. Une fois que la souris est sous anesthésie, couvrez les yeux avec un gel lubrifiant pour les yeux pour les protéger du dessèchement pendant la procédure. Avant de continuer, assurez-vous que la souris est à un niveau d’anesthésie approprié en effectuant un test de réponse au pincement de l’orteil.
Ensuite, rasez les zones inguinale et scrotale de la souris. À l’aide d’un applicateur à embout cotonneux, appliquez une fine couche de crème dépilatoire dépilatoire sur le site chirurgical et les zones environnantes. Après 30 secondes, retirez la crème dépilatoire avec l’éponge de gaze propre.
Transférez la souris dans une zone chirurgicale et assurez-vous qu’une source de chaleur est disponible. Utilisez du ruban adhésif souple pour faire adhérer les pattes de la souris au tapis chirurgical. Si les testicules sont montés dans l’abdomen, exercez une légère pression sur l’abdomen pour les aider à descendre.
Frottez la peau avec une solution de bétadine, en commençant par le centre sur le site chirurgical et en travaillant facilement vers l’extérieur vers le bord de la zone rasée. Faites suivre le gommage à la bétadine d’un gommage à l’alcool effectué de la même manière. Répétez ce processus trois fois pour assurer une bonne désinfection de la peau.
Couvrez la souris avec le champ chirurgical. Saisissez la peau et faites une incision médiane d’environ 1 à 1 1/2 centimètre de longueur. En saisissant le bord coupé de la peau, utilisez un instrument à bout émoussé pour séparer la peau du tissu sous-jacent.
Prenez le temps de le faire sur les bords latéraux, supérieurs et inférieurs de l’incision. Ensuite, isolez un testicule en faisant glisser l’incision cutanée pour qu’elle soit directement au-dessus. Utilisez une paire de pinces pour saisir le muscle crémaster mince et transparent qui entoure le testicule.
L’identification du bon tissu peut être confirmée par sa transparence et sa capacité à se déplacer indépendamment des tissus sous-jacents qu’il renferme. Ensuite, incisez le muscle crémaster en faisant une incision dans l’apex du tissu. Placez une pince de verrouillage sur le bord postérieur du muscle crémaster coupé pour maintenir la tension sur le tissu.
Utilisez une paire de pinces pour saisir le testicule et l’extérioriser de sa gaine crémaster. Une fois le testicule sorti, roulez le tissu latéralement et localisez le point d’insertion du crémaster qui relie le muscle crémaster au testicule et à l’épididyme sur la face postérieure du testicule. Serrez et déchirez ce tissu pour rompre cette connexion.
Extériorisez le coussinet adipeux inguinal en le tirant lentement. Ce faisant, surveillez les signes de saignement et assurez-vous de ne pas endommager les vaisseaux sanguins dans le processus. Ensuite, utilisez une paire d’hémostatiques verrouillables pour serrer le cordon spermatique et les vaisseaux sanguins.
Tout en maintenant une légère tension sur le testicule, cautériser le cordon spermatique et les vaisseaux sanguins distaux à la pince hémostatique. Relâchez lentement l’hémostatique et assurez-vous que le moignon tissulaire a une bonne hémostase et ne continue pas à saigner. L’application d’une légère pression vers l’extérieur sur le muscle crémaster permettra à ce moignon de tissu de se rétracter dans la cavité corporelle.
Rapprochez les deux côtés du muscle crémaster. À l’aide de sutures résorbables 4-0 ou 5-0, placez une suture pour joindre les deux extrémités du muscle crémaster. Une fois la suture terminée, coupez les extrémités du matériau de suture pour qu’elles aient une longueur de 1/2 centimètre.
Répétez ce processus pour l’autre testicule en faisant glisser l’incision cutanée pour qu’elle soit au-dessus de l’autre côté et suivez les mêmes étapes que celles utilisées pour retirer le premier testicule. Une fois que les deux testicules ont été retirés et que les deux côtés du crémaster ont été suturés, inversez la peau vers le haut et préparez-vous à appliquer un clip sur la plaie. Assurez-vous que les extrémités de la suture ne seront pas coincées dans le clip de la plaie.
La souris est maintenant prête à poursuivre la surveillance postopératoire. Pour vous préparer à l’ovariectomie murine, pesez une souris femelle et administrez-lui des analgésiques et une anesthésie conformément aux directives de votre établissement. Administrez un gel lubrifiant pour les yeux et assurez-vous que la souris n’a pas de réponse de pincement des orteils.
Rasez les régions dorsolatérales du dos de la souris pour préparer le site chirurgical. À l’aide d’un applicateur à embout de coton, appliquez une couche de crème dépilatoire dépilatoire sur la zone rasée. Après 30 secondes, retirez la crème avec une éponge de gaze propre.
Transférez la souris sur un tapis chirurgical et assurez-vous qu’une source de chaleur est disponible. Frottez la peau avec la solution de bétadine, en commençant par le centre et en travaillant facilement vers l’extérieur vers le bord de la zone rasée. Ensuite, frottez la peau avec une solution d’alcool à 70% appliquée de la même manière.
Répétez ce processus trois fois au total pour assurer une bonne désinfection de la peau. Planifiez l’incision chirurgicale comme indiqué dans le protocole écrit. Placez un champ chirurgical sur le site chirurgical de la souris.
Saisissez la peau avec une pince et incisez la peau avec une incision d’un centimètre. Utilisez un instrument à bout émoussé ou une simple paire d’hémostatiques pour séparer la peau du tissu sous-jacent. Prenez le temps de le faire sur les bords latéraux, supérieurs et inférieurs de l’incision.
Saisissez la paroi abdominale et incisez avec une incision de 1/2 centimètre. Utilisez une paire de pinces pour localiser l’ovaire à l’intérieur de l’incision et tirez pour l’extérioriser. Une fois les tissus identifiés, utilisez une paire d’hémostatiques pour clamper et écraser la corne utérine distale.
Utilisez une deuxième paire d’hémostatiques ou une paire de pinces pour serrer juste à l’extérieur de la première pince. En maintenant l’hémostatique inférieur immobile, tirez la pince supérieure vers le haut et loin du corps pour effectuer un écrasement et une déchirure de la corne utérine distale. Relâchez lentement l’hémostatique et surveillez pour vous assurer qu’il n’y a pas de saignement excessif provenant du site chirurgical.
Rapprochez les deux côtés de la paroi abdominale et suturez l’incision fermée, à l’aide d’une seule suture avec un matériau de suture résorbable 4-0. Une fois la suture fixée, coupez les extrémités du matériau de suture pour qu’elles aient une longueur de 1/2 centimètre. Rapprochez les deux côtés de la peau et préparez-vous à placer un clip pour la plaie.
Tout en éversant la peau, placez une pince sur le site de l’incision. La souris est maintenant prête à poursuivre la surveillance postopératoire. Documentez la date et l’heure de l’intervention et l’administration d’analgésiques conformément aux directives de votre établissement.
Une fois qu’une souris a subi une orchidectomie chirurgicale ou une ovariectomie, transférez-la dans une cage propre et chauffée. Une fois qu’une souris a retrouvé sa position couchée sternale, placez-la dans une cage propre et donnez-lui de la nourriture humide et de l’eau. Pendant leur convalescence, vérifiez fréquemment le site chirurgical de la souris et recherchez tout signe d’infection ou de saignement.
Pour éviter d’endommager le clip de la plaie, retirez tous les habitats d’igloo pour rongeurs de la cage d’une souris ovariectomie pendant une semaine après la chirurgie. Après 14 jours, retirez les clips de la plaie de la peau de la souris. Le protocole démontré détaille comment effectuer une orchidectomie et une ovariectomie chez une souris pour générer un modèle appauvri en hormones sexuelles.
Cela implique l’ablation des testicules par une incision médiane dans le scrotum, suivie de l’extériorisation des testicules et de la section du cordon spermatique dans les vaisseaux sanguins, ce qui entraîne l’ablation du testicule, de l’épididyme et des coussinets adipeux inguinaux. L’ovariectomie chirurgicale peut être réalisée par une incision dorsolatérale dans le dos et l’extériorisation de l’ovaire, de l’oviducte et de la corne utérine distale. Ceci est suivi par la section de la corne utérine distale, conduisant à l’ablation de l’ovaire et de l’oviducte.
Une technique chirurgicale minutieuse et des soins postopératoires appropriés se traduiront par des sites chirurgicaux bien cicatrisés. Ces procédures chirurgicales peuvent être validées en analysant les niveaux d’hormones dans des échantillons de sérum de souris une semaine après l’orchidectomie. L’ovarectomie peut être confirmée par l’observation d’une atrophie utérine suite à l’ablation des ovaires.
Ce protocole permet l’ablation chirurgicale rapide et efficace des ovaires et des testicules de souris afin de générer un modèle appauvri en hormones sexuelles. Cela peut avoir de nombreuses utilisations pour étudier comment l’épuisement de ces hormones affecte divers organes et processus physiologiques.
