Ekstrahepatik biliyer sistemi değerlendiren birçok rapor, örnekleri elde ettiklerini, ancak bunları nasıl elde ettiklerini değil, karşılaştırılabilirlikle ilgili sorunları gündeme getirdiğini bildirmiştir. Bu tekniğin temel avantajı, tüm ekstrahepatik biliyer sistemin diseke edilebilmesi ve kirletici hücrelerin atravmatik olarak çıkarılabilmesidir. Diseksiyon protokolümüz genel olarak murin neonatal safra kanalı bozuklukları üzerinde çalışan ve ekstrahepatik safra yollarının diseksiyonunu amaçlayan deneysel yaklaşımlara uygulanabilir.
Protokolün bazı özellikleri, örneğin, mideyi duodenuma bağlı bırakmak, mide tarafından ifade edilen kısmen sindirilmiş sütün doğru yönlendirilmesine izin vermek için duodenal atrezi araştırmalarında yararlı olabilir. Başlangıçta, teknik eğitim için biraz zaman gerektirebilir. Adım adım yaklaşımı uygulamak ve takip etmek hızı ve sonucu artıracaktır.
Başlamak için, dezenfekte edilmiş ve otoklavlanmış aletleri ameliyat masasının yanındaki steril bir yüzeye yerleştirin. Peritonda bir kesim yaptıktan sonra, sol frontal aksiller çizgiyi takip ederek kesimi dekapitasyonun bulunduğu yere genişletin. Cildi atravmatik forseps ile soldan sağ tarafa doğru çıkarın.
Bir mikroskop altında, dalağı çevreleyen periton tutun. Periton çadır benzeri bir yapıya benzeyene kadar yavaşça kaldırın ve merkezde bir milimetrelik bir delik açın. Peritoneal çadırın hava ile dolmasını bekleyin.
Peritonu, alt kaburgalar, hem lateral karın bölgeleri hem de alt mesane bölgesi tarafından çerçevelenmiş bir pencerede kesin. Karaciğere, safra kanalı sistemine, mideye, ince bağırsaklara ve kolona tam erişim sağlayın. Safra kesesi ve safra kanallarını, ksifoid süreci kraniyal ventral pozisyonda dikkatlice çekerek inceleyin.
Safra kesesinin safra kanalı sisteminden yırtılmasına yol açabilecek falsiform ligamentin yırtılmasından kaçının. Ardından, ksifoid işlemin çekişini serbest bırakın. Safra kanalı sistemini serbest bırakmak için duodenumu yavaşça aşağı çekin.
Daha sonra, safra kanalı sistemini duodenuma bağlayan duodenal papillayı tanımlayarak alt En-blok mobilizasyonunu gerçekleştirin. Duodenumdan papillanın sağ yanal tarafına yaklaşık iki santimetre kesin. Ardından, pilor bölgesinden kesin.
Mide içeriğinin, kesme yeri ile duodenal papilla arasındaki pilorik bölgede bulunduğundan emin olun. Üst En-blok mobilizasyonunu gerçekleştirmek için, ksifoid işlemi yavaşça çekin ve falsiform ligamente erişin. Safra kesesi arasındaki falsiform bağdan bir santimetre kesinti yapın ve ksifoid sürece yakın.
Yemek borusu, inferior vena kava, torasik aort ve karaciğerin çıplak alanını çevreleyen tüm bağlar gibi karaciğer ve toraks arasındaki bağlantı yapılarını kesin. Ayrıca, dorsal olarak kalan tüm doku bağlantılarını kesin. 20 kat mikroskobik büyütmenin altında, En-bloc numunesini bir köpük ped üzerine yerleştirin.
Numuneyi doğru anatomik konumda yeniden düzenleyerek birleştirin. Nazik bir hareket kullanarak, duodenumun oral ve aboral kısmını düzleştirin. Atravmatik forseps kullanarak, duodenal papillada düzleştirme hareketini başlatın ve kesici kenarlara devam edin.
Daha sonra, duodenumun oral kısmındaki midenin beyaz hamurlu içeriğini yumuşatın. Olası safra kanalı rotasyonunu dışlamak için duodenumun oral ve aboral kısmını tanımlayın. Safra kanalını diseke etmeden önce büyük karaciğer dokusu kalıntılarını kesin.
Birkaç kazıma hareketinden sonra, numuneyi köpük paspas üzerinde daha temiz bir konuma aktarın. EBDS ve istenmeyen hücreler arasındaki farklılaşma görünümünü optimize etmek için arka planda daha az sıkılmış karaciğer dokusunu kullanın. İzole EBDS kalana kadar hepatoduodenal ligamenti işleyin.
Duodenal papilladan oral olarak yaklaşık üç ila beş milimetre uzakta beyaz ve çok hassas filament olarak ortaya çıkan hepatik arter ve portal veni gözlemleyin. Dikkatlice, sol yanal tarafa yumuşak bir çekme kullanarak bu hassas filamenti çıkarın. Kazıma hareketlerinin safra kanalı sisteminden başlayıp karaciğer sınırlarına yol açtığından emin olun.
Bu protokol kullanılarak EBDS, dokuz günlük murin yenidoğanlarından diseke edildi. Safra kesesinden duodenal papillaya izole EBDS'nin uzunluğu 10 milimetreden azdı ve hassas duktus koledochusun çapı 0.05 ila 0.2 milimetre arasında değişiyordu. EBDS'nin uzunlamasına kesitine açık lümen ile hematoksilin eozin boyama yapıldı.
Kolanjiyositler lümeni tek katmanlı olarak çevrelemiş ve daha koyu boyanmıştır. Araştırmacılar, çalışmalarının ve sonuçlarının karşılaştırılabilirliğini ve hızlı kullanılabilirliğini artırmak için diseksiyon ve enjeksiyon protokolleri gibi çalışma tekniklerini paylaşmalı ve standartlaştırmalıdır. Önceki diseksiyon, intra ve ekstraperi-kolanjiyositlerin izolasyonu gibi histolojik ve tek hücreli yaklaşımlar için avantajlı olacaktır, çünkü hücre kültürü kontaminasyonunun azalmasına neden olur.
