أفادت العديد من التقارير التي تقيم النظام الصفراوي خارج الكبد أنهم حصلوا على العينات ولكن ليس كيف حصلوا عليها ، مما أثار قضايا تتعلق بالمقارنة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن تشريح الجهاز الصفراوي خارج الكبد بأكمله ويمكن إزالة الخلايا الملوثة بشكل غير مؤلم. يمكن تطبيق بروتوكول التشريح الخاص بنا بشكل عام على الأساليب التجريبية التي تعمل على اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية للفئران ، بهدف تشريح الجهاز الصفراوي خارج الكبد.
قد تكون بعض ميزات البروتوكول ، على سبيل المثال ، ترك المعدة متصلة بالاثني عشر ، مفيدة في البحث عن رتق الاثني عشر للسماح بالتوجيه الصحيح للحليب المهضوم جزئيا الذي تعبر عنه المعدة. في البداية ، قد تتطلب التقنية بعض الوقت للتدريب. ستؤدي ممارسة واتباع النهج التدريجي إلى زيادة السرعة والنتيجة.
للبدء ، ضع الأدوات المطهرة والمعقمة على سطح معقم بجوار طاولة العمليات. بعد إجراء قطع في الصفاق ، قم بتوسيع القطع إلى موقع قطع الرأس ، باتباع الخط الإبطي الأمامي الأيسر. إزالة الجلد من اليسار إلى الجانب الأيمن مع ملقط غير مؤلم.
تحت المجهر ، أمسك الصفاق المحيط بالطحال. ارفعه برفق حتى يشبه الصفاق هيكلا يشبه الخيمة ، واقطع ثقبا بحجم ملليمتر واحد في الوسط. انتظر حتى تمتلئ الخيمة البريتونية بالهواء.
قطع الصفاق في نافذة مؤطرة من الأضلاع السفلية ، كل من مناطق البطن الجانبية ، ومنطقة المثانة السفلية. ضمان الوصول الكامل إلى الكبد ونظام القناة الصفراوية والمعدة والأمعاء الدقيقة والقولون. فحص المرارة والقنوات الصفراوية عن طريق سحب عملية الخنجري بعناية في وضع بطني الجمجمة.
تجنب تمزق الرباط المنجلي الذي يمكن أن يؤدي إلى تمزق المرارة من نظام القناة الصفراوية. ثم حرر سحب عملية الخنجري. اسحب الاثني عشر برفق لتحرير نظام القناة الصفراوية.
بعد ذلك ، قم بإجراء تعبئة En-bloc السفلية عن طريق تحديد حليمة الاثني عشر ، التي تربط نظام القناة الصفراوية بالاثني عشر. قطع من خلال الاثني عشر حوالي سنتيمترين إلى الجانب الجانبي الأيمن من الحليمة. ثم ، قطع من خلال منطقة البواب.
تأكد من وجود محتويات المعدة في منطقة البواب بين موقع القطع وحليمة الاثني عشر. لأداء تعبئة En-bloc العلوية ، اسحب عملية الخنجري برفق واحصل على إمكانية الوصول إلى الرباط المنجلي. قم بعمل قطع سنتيمتر واحد من خلال الرباط المنجلي بين المرارة وعلى مقربة من عملية الخنجري.
قطع الهياكل التي تربط بين الكبد والصدر ، مثل المريء ، والوريد الأجوف السفلي ، والشريان الأورطي الصدري ، وجميع الأربطة التي تحيط بالمنطقة العارية من الكبد. أيضا ، قطع جميع وصلات الأنسجة المتبقية ظهريا. تحت التكبير المجهري 20 مرة ، ضع عينة En-bloc على وسادة رغوية.
قم بتجميع العينة عن طريق إعادة تنظيمها في الموضع التشريحي الصحيح. باستخدام حركة لطيفة ، قم بتسطيح الجزء الفموي والفموي من الاثني عشر. باستخدام ملقط غير رضحي ، ابدأ حركة التسطيح في حليمة الاثني عشر واستمر في حواف القطع.
ثم ، قم بتنعيم محتويات اللب الأبيض للمعدة في الجزء الفموي من الاثني عشر. تحديد الجزء الفموي والجزء الفموي من الاثني عشر لاستبعاد دوران القناة الصفراوية المحتمل. قطع بقايا كبيرة من الأنسجة الكبدية قبل تشريح القناة الصفراوية.
بعد بضع حركات كشط ، انقل العينة إلى وضع أنظف على حصيرة الرغوة. استخدم أنسجة الكبد الأقل ضغطا في الخلفية لتحسين عرض التمايز بين EBDS والخلايا غير المرغوب فيها. قم بمعالجة الرباط الكبدي الاثني عشر حتى يبقى EBDS المعزول.
راقب الشريان الكبدي والوريد البابي الناشئين كخيوط بيضاء وحساسة للغاية ، على بعد حوالي ثلاثة إلى خمسة ملليمترات عن طريق الفم من حليمة الاثني عشر. بعناية ، قم بإزالة هذا الخيط الرقيق باستخدام سحب لطيف إلى الجانب الجانبي الأيسر. تأكد من أن حركات الكشط تبدأ من نظام القناة الصفراوية وتؤدي إلى حدود الكبد.
باستخدام هذا البروتوكول ، تم تشريح EBDS من حديثي الولادة الفئران البالغة من العمر تسعة أيام. كان طول EBDS المعزول من المرارة إلى حليمة الاثني عشر أقل من 10 ملليمترات ، وتراوح قطر القناة الصفراوية الحساسة من 0.05 إلى 0.2 ملم. تم إجراء تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين على القسم الطولي من EBDS مع تجويف مفتوح.
تم تحديد الخلايا الصفراوية المحيطة بالتجويف كطبقة أحادية وكانت مصبوغة باللون الداكن. يجب على الباحثين مشاركة وتوحيد تقنيات التشغيل مثل بروتوكولات التشريح والحقن لتحسين قابلية المقارنة وسهولة الاستخدام السريع لدراساتهم ونتائجهم. سيكون التشريح السابق مفيدا للنهج النسيجية والخلية الواحدة ، مثل عزل الخلايا الصفراوية داخل وخارج شبه النهر ، لأنه يؤدي إلى الحد من تلوث ثقافة الخلية.
