De nombreux rapports évaluant le système biliaire extrahépatique ont indiqué qu’ils avaient obtenu les échantillons, mais pas comment ils les avaient obtenus, ce qui soulevait des problèmes de comparabilité. Le principal avantage de cette technique est que l’ensemble du système biliaire extrahépatique peut être disséqué et que les cellules contaminantes peuvent être éliminées de manière atraumatique. Notre protocole de dissection peut être généralement appliqué à des approches expérimentales travaillant sur les troubles des canaux biliaires néonatals murins, visant la dissection du système biliaire extrahépatique.
Certaines caractéristiques du protocole, par exemple, laisser l’estomac attaché au duodénum, pourraient être utiles dans la recherche sur l’atrésie duodénale pour permettre une orientation correcte par le lait partiellement digéré exprimé par l’estomac. Au début, la technique peut nécessiter un certain temps pour l’entraînement. Pratiquer et suivre l’approche étape par étape augmentera la vitesse et les résultats.
Pour commencer, placez les instruments désinfectés et autoclavés sur une surface stérile à côté de la table d’opération. Après avoir fait une incision dans le péritoine, étendez la coupe à l’emplacement de la décapitation, en suivant la ligne axillaire frontale gauche. Retirez la peau de gauche à droite avec une pince atraumatique.
Au microscope, tenez le péritoine entourant la rate. Soulevez-le doucement jusqu’à ce que le péritoine ressemble à une structure en forme de tente et faites un trou d’un millimètre au centre. Attendez que la tente péritonéale soit remplie d’air.
Coupez le péritoine dans une fenêtre encadrée par les côtes inférieures, les deux régions abdominales latérales et la région inférieure de la vessie. Assurez-vous d’un accès complet au foie, au système des voies biliaires, à l’estomac, à l’intestin grêle et au côlon. Examinez la vésicule biliaire et les voies biliaires en tirant soigneusement le processus xiphoïde en position ventrale crânienne.
Évitez la déchirure du ligament falciforme qui peut entraîner une déchirure de la vésicule biliaire du système des voies biliaires. Ensuite, relâchez l’attraction du processus xiphoïde. Tirez doucement vers le bas le duodénum pour libérer le système des voies biliaires.
Ensuite, effectuez la mobilisation en bloc En-inférieur en identifiant la papille duodénale, qui relie le système des voies biliaires au duodénum. Coupez à travers le duodénum d’environ deux centimètres vers le côté latéral droit de la papille. Ensuite, coupez à travers la zone pylorique.
Assurez-vous que le contenu de l’estomac est présent dans la région pylorique entre le lieu de coupe et la papille duodénale. Pour effectuer la mobilisation En-bloc supérieure, tirez doucement sur le processus xiphoïde et accédez au ligament falciforme. Faites une coupe d’un centimètre à travers le ligament falciforme entre la vésicule biliaire et près du processus xiphoïde.
Couper à travers les structures de connexion entre le foie et le thorax, telles que l’œsophage, la veine cave inférieure, l’aorte thoracique et tous les ligaments qui entourent la zone nue du foie. En outre, coupez toutes les connexions tissulaires restantes dorsalement. Sous un grossissement microscopique de 20 fois, placer l’échantillon En-bloc sur un tampon en mousse.
Assemblez l’échantillon en le réorganisant dans la bonne position anatomique. En utilisant un mouvement doux, aplatir la partie buccale et aborale du duodénum. À l’aide d’une pince atraumatique, commencez le mouvement d’aplatissement au niveau de la papille duodénale et continuez jusqu’aux bords tranchants.
Ensuite, lissez le contenu pulpeux blanc de l’estomac dans la partie buccale du duodénum. Identifier la partie buccale et la partie aborale du duodénum pour exclure une rotation probable des voies biliaires. Coupez les gros restes de tissu hépatique avant de disséquer le canal biliaire.
Après quelques mouvements de grattage, transférer l’échantillon dans une position plus propre sur le tapis de mousse. Utilisez le tissu hépatique moins pressé en arrière-plan pour optimiser la vue de différenciation entre EBDS et cellules indésirables. Traiter le ligament hépatoduodénal jusqu’à ce qu’il reste le EBDS isolé.
Observez l’artère hépatique et la veine porte se présentant sous forme de filament blanc et très délicat, à environ trois à cinq millimètres par voie orale de la papille duodénale. Retirez soigneusement ce filament délicat en tirant doucement sur le côté latéral gauche. Assurez-vous que les mouvements de grattage commencent à partir du système des canaux biliaires et mènent aux limites du foie.
À l’aide de ce protocole, EBDS a été disséqué à partir de nouveau-nés murins âgés de neuf jours. La longueur de l’EBDS isolé de la vésicule biliaire à la papille duodénale était inférieure à 10 millimètres, et le diamètre du canal choledochus délicat variait de 0,05 à 0,2 millimètre. La coloration à l’hématoxyline éosine a été réalisée sur la coupe longitudinale de l’EBDS avec une lumière ouverte.
Les cholangiocytes ont été identifiés autour de la lumière comme une monocouche et ont été teints plus foncés. Les chercheurs devraient partager et normaliser les techniques opératoires telles que les protocoles de dissection et d’injection afin d’améliorer la comparabilité et la facilité d’utilisation rapide de leurs études et de leurs résultats. La dissection préalable sera avantageuse pour les approches histologiques et unicellulaires, telles que l’isolement des intra et extrapéri-cholangiocytes, car elle entraîne la réduction de la contamination par culture cellulaire.
