心内注射人前列腺癌细胞以创建骨转移异种移植小鼠模型

该方法可以帮助产生一个理想的模型，该模型密切模拟体内前列腺癌细胞骨转移的自然进展。该技术具有骨转移的优点，并且代表了前列腺癌细胞在体内的自然骨转移过程。该技术有利于探索前列腺癌骨转移的分子机制和体内治疗效果的研究。

在注射当天，取在10厘米细胞培养皿中培养的80至90%融合荧光素酶标记的PC3细胞，并通过用冷无菌PBS洗涤两次开始准备注射细胞。用1.5毫升0.25%胰蛋白酶消化洗涤的细胞三分钟，然后通过加入6毫升含有10%血清的F12培养基来淬灭胰蛋白酶，并将细胞收集到15毫升离心管中。将20微升收集的细胞悬液转移到细胞计数板中，并使用自动细胞计数器计算细胞浓度。

接下来，在室温下以800G离心细胞五分钟.使用移液管丢弃上清液并将细胞沉淀重悬于F12培养基中以达到所需的最终细胞密度。现在将细胞带到手术室并在两小时内进行细胞注射。将细胞保持在冰上直到注射。

要开始手术，将麻醉的小鼠置于仰卧位，并通过垂直拉伸它们远离中线来固定两个上肢。使用手术胶带，将鼠标从腹部向下固定，不要用力按压并移位内脏。使用70%乙醇棉签对胸部皮肤进行消毒。

接下来，触诊前胸壁的中间，将小鼠剑突定位在胸骨中部最低端的凹陷处。标记剑突的最下点。然后从前胸壁中间向上触诊，将小鼠颈静脉切口定位在手掌上缘的中央凹陷处，并标记颈静脉切迹的最下点。

现在找到并标记前两个标记之间的中点，稍微向右，正好在第三个肋间隙的心脏上方。这是注入点。在将200微升悬浮液装入装有26号针头的1毫升注射器中之前，彻底混合细胞悬液。

在柱塞和悬浮液之间的注射器中留出一些空气，以允许注射过程中脉动血液进入。要进行注射，请将针头垂直插入注射部位。如果针尖正确插入左心室，针尖中将可见鲜红色的脉动血液。

如果血脉动不可见或血液凝固，请重试注射。正确插入针头后，用稳定的手在 40 到 60 秒内非常缓慢地注射 100 微升细胞悬液。注射完成后，缩回针头，同时用干棉签对注射部位施加压力15秒，以确保止血。

将鼠标放回干净的笼子并监测动物，直到它从麻醉中完全恢复。将荧光素酶标记的PC3细胞注射到小鼠中24小时后进行的生物发光成像显示来自动物全身的信号表明体循环中存在癌细胞。注射两周后，转移性病变出现在小鼠的后肢。

随着时间的推移，转移性病变变大，并开始出现在其他部位。使用X射线成像进一步检测前列腺癌细胞诱导的骨骼转移性病变，该成像显示动物胫骨近端的骨破坏。显微CT扫描也证实了这一点。

通过血红素和伊红染色在石蜡包埋组织中进一步证实转移性病变。准确的注射部位对于保证该模型的成功率非常重要。这可以通过实践来实现。