In-vivo-Strukturbewertungen von Augenerkrankungen in Nagetiermodellen mittels optischer Kohärenztomographie

Zusammenfassung

Hier beschreiben wir die Verwendung der spektralen optischen Kohärenztomographie (SD-OCT) zur Visualisierung von Netzhaut- und Augenstrukturen in vivo in Modellen der Netzhautdegeneration, des Glaukoms, der diabetischen Retinopathie und der Myopie.

Zusammenfassung

Die optische Kohärenztomographie im Spektralbereich (SD-OCT) ist nützlich, um Netzhaut- und Augenstrukturen in vivo sichtbar zu machen. In der Forschung ist SD-OCT ein wertvolles Werkzeug, um Veränderungen in einer Vielzahl von Netzhaut- und Augenerkrankungs- und Verletzungsmodellen zu bewerten und zu charakterisieren. In lichtinduzierten Netzhautdegenerationsmodellen kann SD-OCT verwendet werden, um die Ausdünnung der Photorezeptorschicht im Laufe der Zeit zu verfolgen. In Glaukommodellen kann SD-OCT verwendet werden, um die verminderte retinale Nervenfaserschicht und die gesamte Netzhautdicke zu überwachen und das Schröpfen des Sehnervs nach Induktion einer okulären Hypertonie zu beobachten. Bei diabetischen Nagetieren hat SD-OCT den Forschern geholfen, eine verringerte Gesamtdicke der Netzhaut sowie eine verringerte Dicke bestimmter Netzhautschichten, insbesondere der Nervenfaserschicht der Netzhaut, mit fortschreitender Krankheit zu beobachten. In Mausmodellen der Myopie kann SD-OCT verwendet werden, um axiale Parameter, wie z.B. axiale Längenänderungen, zu bewerten. Zu den Vorteilen von SD-OCT gehören die In-vivo-Bildgebung von Augenstrukturen, die Fähigkeit, Änderungen der Augenabmessungen im Laufe der Zeit quantitativ zu verfolgen, sowie die schnelle Scangeschwindigkeit und die hohe Auflösung. Hier beschreiben wir die Methoden der SD-OCT und zeigen Beispiele für ihre Anwendung in unserem Labor in Modellen der Netzhautdegeneration, des Glaukoms, der diabetischen Retinopathie und der Myopie. Zu den Methoden gehören Anästhesie, SD-OCT-Bildgebung und Verarbeitung der Bilder für Dickenmessungen.

Einleitung

Die spektrale optische Kohärenztomographie (SD-OCT) ist eine präzise, hochauflösende Bildgebungsmodalität, die es Klinikern und Forschern ermöglicht, Augenstrukturen nichtinvasiv zu untersuchen. Dieses bildgebende Verfahren basiert auf der Interferometrie, um dreidimensionale Netzhautbilder in vivo auf einer Mikrometerskala ^1,2 zu erfassen. Es hat sich zu einer der am häufigsten verwendeten bildgebenden Verfahren in der Sehforschung und in der Klinik entwickelt, da pathologische Merkmale wie strukturelle Defekte und/oder Ausdünnung der Netzhautschichten und der subretinalen Flüssigkeit leicht erkannt und genau erkannt werden^{können 3}. In der Forschung unter Verwendung von Tiermodellen für Sehstörungen hat SD-OCT wesentliche nichtinvasive Analysen der Beziehungen zwischen Struktur und Funktion und ihrer histopathologischen Ursprünge geliefert⁴. Aufgrund seiner Auflösung (bis zu 2-3 Mikrometer, abhängig von der Tiefe in das Auge⁵) ist SD-OCT in der Lage, auch kleine Veränderungen in der Dicke der Netzhautschicht zu erkennen. Diese Art der Analyse kann wichtige Informationen für das Fortschreiten der Erkrankung liefern und die Wirksamkeit neuroprotektiver Methoden und Behandlungen für Sehstörungen beurteilen.

SD-OCT ist eine nicht-invasive Alternative zur histologischen Strukturuntersuchung, und es wurde gezeigt, dass die beiden korrelieren⁶. Während SD-OCT keine zelluläre Auflösung erreicht, ermöglicht es Längsschnittstudien an Tieren. Dies ist von Vorteil, da das Fortschreiten der Krankheit bei einzelnen Tieren im Laufe der Zeit verfolgt werden kann, anstatt Tiere zu bestimmten Zeitpunkten einschläfern zu müssen. Mit der kontinuierlichen Verbesserung der bildgebenden Verfahren wird auch die SD-OCT-Technologie weiterentwickelt und bietet eine verbesserte Bildqualität sowie die Möglichkeit, biologische Prozesse wie die Funktion der retinalen Blutgefäße detailliert zu beurteilen. Seit ihrer Einführung im Jahr 1991 hat die SD-OCT-Technologie enorme Fortschritte in Bezug auf Auflösung, Geschwindigkeit und Empfindlichkeit gemacht⁷.

Die vorliegende Studie verwendet ein SD-OCT-System zur Quantifizierung von Veränderungen der Netzhautschichten in Nagetiermodellen für Netzhautdegeneration, Glaukom und diabetische Retinopathie. Das hier verwendete SD-OCT-System ist ein Fourier-Domain-OCT-System, das energiesparendes Nahinfrarotlicht nutzt, um tiefenaufgelöste Bilder in Echtzeit zu erfassen, zu verarbeiten und zu speichern. Das SD-OCT-System verfügt über erweiterte Tiefenbildgebungsfunktionen im Wellenlängenbereich von 800 nm und bietet eine Tiefe von 8 mm und eine Auflösung von 4 μm. Bei der Fourier-Domänendetektion wird das Interferenzsignal zwischen Streulicht aus dem Gewebe und einem Referenzpfad Fourier-transformiert, um axiale Abtastungen und/oder axiale Tiefenprofile der Streuintensität⁸ zu konstruieren. Für die Untersuchungen hier wird der OCT-Strahl über die gewünschte Netzhautstruktur gescannt, während serielle axiale Scans aufgenommen werden. In der Regel erfasst ein Scanmuster das zweidimensionale Raster (B-Scans) als eine Sammlung linearer eindimensionaler Scanlinien (A-Scans), die 2D-Querschnittsbildern entsprechen, die ein Rasterscanmuster verwenden. Für Studien, die sich auf Myopie bei Mäusen konzentrieren, wird dieses System auch verwendet, um die Dimensionen von Augenstrukturen zu messen (z. B. Hornhautdicke, Linsendicke, Glaskammertiefe und axiale Länge).

Das aktuelle System ermöglicht es Benutzern, ihre eigenen Protokolle zu entwerfen und Scans zu erstellen, die basierend auf den interessierenden Augenstrukturen angepasst und ausgewählt werden können. Die wichtigsten Scans, die in diesen benutzerdefinierten Protokollen enthalten sind, machen diese Bildgebungstechnik benutzerfreundlich. Für Bildanalysen haben wir eine maßgeschneiderte Programmierung in einem mathematischen Modellierungsprogramm entwickelt. SD-OCT ist ein leistungsfähiges Werkzeug zur nicht-invasiven Identifizierung und Quantifizierung pathomorphologischer Veränderungen in Augenstrukturen und zur Überwachung des sehbedingten Krankheitsverlaufs.

Protokoll

Alle beschriebenen Verfahren wurden vom Atlanta Veterans Affairs Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt und entsprachen dem Leitfaden der National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Labortieren (NIH Publications, 8^. Auflage, aktualisiert 2011).

HINWEIS: Das SD-OCT-System, das zur Entwicklung des Protokolls verwendet wurde, ist in der nachstehenden Materialtabelle beschrieben. Während einige der Verfahren für dieses spezielle System spezifisch sind, kann der Gesamtansatz für andere ÜLG-Produkte und Tiermodelle angepasst werden. Darüber hinaus werden diese Protokolle in unserem Labor häufig bei Mäusen und Ratten verwendet. Der Gesamtansatz kann jedoch auf verschiedene Tiermodelle und SD-OCT-Geräte angewendet werden, vorausgesetzt, eine Person verfügt über das richtige Objektiv und die richtigen Fähigkeiten auf ihrem Gerät.

1. Richten Sie den optischen Kohärenztomographen ein

1. Öffnen Sie die SD-OCT-Software (Materialverzeichnis).
2. Legen Sie fest, wer die OCT, die Studie und den Behandlungsarm (falls relevant) einnimmt. Benennen Sie diese Kategorien so, dass Forscher später während der Datenanalyse nach den gewünschten Scans suchen können.
   1. Klicken Sie auf der Registerkarte " Patient/Untersuchung " auf "Testprüfer". Wählen Sie den Namen des Prüfers aus. Verwenden Sie die Schaltfläche "Prüfer und Ärzte einrichten ", um neue Untersucher hinzuzufügen.
   2. Klicken Sie auf Studienname , um die Studie zu definieren. Klicken Sie auf die Registerkarte Studie, um eine neue Studie hinzuzufügen oder Behandlungen in einer vorhandenen Studie zu ändern. Klicken Sie rechts neben Behandlungsarm auswählen, um einen Behandlungsarm auszuwählen.
3. Klicken Sie auf die Schaltfläche Patient hinzufügen, mit der Sie einen neuen Zeitpunkt für eine ganze Gruppe hinzufügen können. Wenn das Fenster angezeigt wird, geben Sie ID-Nummer, Vorname und Nachname ein. Wählen Sie Männlich oder Weiblich aus. Geben Sie das Geburtsdatum ein.
4. Klicken Sie auf die Schaltfläche Prüfung hinzufügen , um die einzelnen Ratten hinzuzufügen. Um die Ratten zu identifizieren, klicken Sie auf eine Untersuchung. Klicken Sie auf Prüfung bearbeiten. Geben Sie die ID-Nummer in das Feld " Notizen eingeben" ein. Klicken Sie auf die Schaltfläche Änderungen speichern .
5. Schließen Sie das richtige Objektiv an das Gerät an (Abbildung 1B), wählen Sie die entsprechende Konfiguration in der Software aus, und wählen Sie die zugehörige Position des Referenzarms.
   HINWEIS: Das beschriebene SD-OCT-System verfügt über angepasste Linsen, voreingestellte Scanmuster und Referenzarmeinstellungen , die für die abgebildete Tierart und Augenregion (Netzhaut oder Hornhaut, Maus oder Ratte) spezifisch sind. Einige dieser Details sind spezifisch für das beschriebene SD-OCT-System (siehe Materialtabelle). Zum Beispiel bieten nicht alle Geräte eine manuelle Einstellung der Referenzarmweglänge .
6. Doppelklicken Sie auf der Registerkarte "Patient/Untersuchung" auf die markierte Untersuchung, um zur Registerkarte "Bildgebung" zu gelangen und mit der Bildgebung zu beginnen, oder klicken Sie einfach auf die Registerkarte "Bildgebung". Wenn ein Standard-Scan vorhanden ist, klicken Sie mit der rechten Maustaste, um ihn zu löschen.
7. Laden Sie ein voreingestelltes Scan-Protokoll, indem Sie auf die Schaltfläche Protokoll aus der Liste auswählen klicken. Alternativ können Sie einzelne Scans hinzufügen.
8. Für Rattenmodelle für Glaukom und diabetische Retinopathie und Mausmodelle für Netzhautdegeneration wählen Sie eine Voreinstellung, die aus vier Bildern besteht: 2 OD- und 2 OS-Scans. Wählen Sie für die Kurzsichtigkeit der Maus eine Voreinstellung, die aus 8 Bildern besteht: 4 OD- und 4 OS-Scans.
   HINWEIS: Die voreingestellte Bildgebung wird in Abschnitt 3 ausführlicher erläutert. Dies ist etwas, das jedes Labor für sich selbst oder mit dem Hersteller während der Installation vor Ort macht.

2. Betäuben Sie das Tier

1. Verabreichen Sie Anästhetika.
   1. Ratten werden mit Ketamin (60 mg/kg) und Xylazin (7,5 mg/kg) mittels intraperitonealer Injektion betäubt.
   2. Anästhesieren Sie Mäuse mit Ketamin (80 mg/kg) und Xylazin (16 mg/kg) mittels intraperitonealer Injektion.
   3. Warten Sie, bis die Tiere vollständig betäubt sind und reagieren Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen.
2. Verabreichung von Pupillenerweiterungstropfen (1% Tropicamid). Warten Sie, bis sich die Pupillen erweitert haben, bevor Sie mit der Bildgebung beginnen.
   HINWEIS: Die Erweiterung der Pupillen vergrößert das Sichtfeld, ist aber keine Voraussetzung. Lokalanästhesietropfen (0,5% Tetracain) zur Betäubung des Auges sollten auch verwendet werden, wenn etwas das Auge berührt (z. B. beim Anlegen von Kontaktlinsen oder bei Verwendung einer Führung). Eine Führung ist ein Gerät, das über dem Scankopf platziert wird und Anfängern hilft, das Auge und den Scankopf auszurichten.
3. Platzieren Sie das Nagetier nach der Betäubung in ein Nagetierausrichtungssystem, das das Tier im 3-dimensionalen Raum drehen kann (Abbildung 1A, 1C und 1D). Bieten Sie thermische Unterstützung.
   HINWEIS: Derzeit verwenden wir Nagetierausrichtungssysteme für Mäuse und Ratten, die mit dem SD-OCT-Gerät entwickelt und verkauft werden.
4. Tragen Sie Flüssigkeit (z. B. Kochsalzlösung oder künstliche Tränen) auf, um die Augen geschmiert zu halten. Stellen Sie sicher, dass das Auge während der Bildgebung nicht austrocknet, damit die optischen Eigenschaften des Auges zwischen den Scans erhalten bleiben (wenn die Hornhaut nass ist, ist die Netzhaut deutlich zu sehen).
   1. Achten Sie darauf, die Feuchtigkeit im gegenüberliegenden Auge zu halten, wenn Sie das erste Auge scannen, damit es nicht austrocknet.
5. Verwenden Sie ein empfindliches Task-Tuch, um überschüssige Kochsalzlösung kurz vor der Bildgebung abzuleiten, da zu viel oder zu wenig Gleitmittel auf dem Auge die Bildqualität beeinträchtigt.
   HINWEIS: Die Verwendung von sterilem Gleitgel wird während der OCT nicht empfohlen, da dies die Bildgebung beeinträchtigen kann. Bei Bedarf kann nach dem Eingriff steriles Gleitgel verwendet werden. Eine Kontaktlinse kann auch angewendet werden, um während des gesamten Tests eine ausreichende Feuchtigkeit für das Auge zu gewährleisten. Unserer Erfahrung nach hat eine Kontaktlinse die Bildqualität nicht deutlich verbessert, aber Kontaktlinsen tragen dazu bei, das Risiko des Austrocknens der Hornhaut während der Bildgebung zu reduzieren.

3. OCT-Bildgebung für Nagetiere

1. Beginnen Sie mit einem Auge (OS oder OD) und bilden Sie danach das kontralaterale Auge ab.
   1. Positionieren Sie das Tier mit den beiden Drehbewegungen des Nagetierausrichtungssystems so, dass der Blick horizontal ist und auf die Achse der OCT-Linse blickt (Abbildung 1D).
   2. Verwenden Sie das OAT im Freistartmodus, um die Netzhaut für die Datenerfassung auszurichten. Verwenden Sie zunächst den Zielmodus (durch Klicken auf die Schaltfläche Ziel ), um eine kontinuierliche Anzeige von horizontalen und vertikalen B-Scans in Echtzeit zu erhalten.
   3. Bewegen Sie den Scankopf näher an das Auge, bis die Netzhaut sichtbar ist (da die Netzhautlinsen von Maus und Ratte einen Fixfokus haben, konzentriert sich die Linse in Richtung des Auges tiefer in die Netzhaut). Verwenden Sie dann das Nagetierausrichtungssystem, um die Tierposition nach oben / unten einzustellen und schwenken / drehen Sie, um den Sehnervenkopf in der Mitte zu positionieren, machen Sie den horizontalen Scan horizontal und den vertikalen Scan vertikal (Abbildung 1A).
   4. Stellen Sie den Arbeitsabstand so ein, dass das Netzhautbild flach und nicht gekrümmt ist.
   5. Passen Sie die Position des Referenzarms so an, dass sich das Bild am oberen Rand des Anzeigefensters befindet. Achten Sie darauf, nicht zu weit hinein zu drücken, da sich das Augenbild sonst von selbst zurückdreht.
2. Bildgebung der Netzhaut
   1. Für Glaukom-, Netzhautdegenerations- und diabetische Retinopathie-Modelle: Definieren Sie einen Volumenscan, der aus 1000 x 100 x 1 (A-Scans x B-Scans x wiederholte B-Scans) für die Mittelwertbildung besteht. Bei Ratten wird ein Volumenscan von 3 x 3 mm durchgeführt. Bei Mäusen ist ein Scan mit einem Volumen von 1,5 x 1,5 mm durchzuführen.
   2. Zentrieren Sie den Sehnerv im horizontalen und vertikalen Zugang, so dass sich der Volumenscan in der Mitte befindet. Nehmen Sie sich Zeit, um sicherzustellen, dass sich der Sehnervenkopf in der Mitte des Scans befindet und gerade entlang der Nasen-Temporal- und Ober-Unter-Achse verläuft (Abbildung 2). Scannen Sie und zentrieren Sie es erneut, um sicherzustellen, dass es sich bei Bedarf genau in der Mitte befindet. Wiederholen Sie diesen Scan nach Bedarf, bis der Sehnervenkopf zentriert und entlang beider Achsen ausgerichtet ist. Klicken Sie auf die Schaltfläche Schnappschuss , um ein Foto aufzunehmen.
      HINWEIS: Einige SD-OCT-Geräte haben die Möglichkeit, die Krümmung des Auges optisch zu manipulieren (z. B. das Bild wird abgeflacht), indem der Abstand des Auges von der Lichtquelle mit dem Referenzarm angepasst wird. Wir empfehlen, die Bilder abzuflachen und zu zentrieren, wenn direkte Dickenmessungen durch die Netzhautschichten durchgeführt werden, um die Genauigkeit entlang der anterior-posterioren Richtung zu verbessern.
   3. Klicken Sie auf die Schaltfläche Speichern , um das Bild zu speichern.
   4. Machen Sie einen radialen Scan, der auf den Sehnervenkopf zentriert ist, der 1000 x 4 x 20 ist (A-Bild x B-Bild x wiederholte B-Scans). Verwenden Sie wiederholte B-Scans, um die Bildschärfe des Auges oder der Netzhaut zu verbessern, was bei der Interpretation von Regionen des Auges oder Schichten der Netzhaut während der Datenanalyse hilft.
      HINWEIS: Auch hier beträgt dieser radiale Scan bei Ratten 3 mm, während er bei Mäusen 1,5 mm beträgt.
   5. Speichern Sie das Bild.
   6. Wiederholen Sie die Schritte 3.1 bis 3.2.5 im kontralateralen Auge.
3. Axiale Längenmessungen
   1. Bei Projekten, bei denen das gesamte Auge abgebildet wird, z. B. bei der Kurzsichtigkeit der Maus, machen Sie drei Scans des gesamten Auges und einen Netzhautscan für jedes Auge. Wählen Sie eine Voreinstellung, die aus einem radialen Scan besteht, der 500 x 20 x 1 groß ist und den gesamten Durchmesser des Auges umfasst.
      HINWEIS: Diese Einstellung liefert ein Bild der gesamten Länge des Mausauges von der Hornhaut bis zur Aderhaut.
   2. Zentrieren Sie die Mitte des Auges und die Netzhaut im Sichtfeld. Machen Sie drei radiale Scans (Ganzaugenscans): einen linearen B-Scan mit 1000 x 5 x 2 und zwei zusätzliche lineare B-Scans von 1000 x 5 x 2 an derselben Stelle. Speichern Sie die Bilder.
   3. Vergrößern Sie anschließend bei Bedarf und machen Sie einen Volumen- oder rechteckigen Scan (Retina-Scan) ähnlich der Beschreibung in 3.2, der aus 1000 x 20 A-Scans x B-Scans besteht. Speichern Sie den Volume-Scan.
   4. Wiederholen Sie die Schritte 3.3 bis 3.3.3 im kontralateralen Auge.
      HINWEIS: Axiallängenmessungen sind nur bei kleinen Augen (Maus oder kleiner) möglich, da das Bildgebungsfenster aktueller Systeme nicht groß genug ist, um ein größeres Auge zu erfassen.

4. Schritte nach der Bildgebung

1. Speichern Sie gespeicherte Daten in einer Cloud, was eine gute Praxis für das Datenmanagement ist und einen einfachen Zugriff für spätere Analysen ermöglicht. Führen Sie Datenanalysen mit einer benutzerdefinierten Software durch, die in einem mathematischen Modellierungsprogramm (Table of Materials) entwickelt wurde.
2. Entfernen Sie das Nagetier aus dem Nagetierausrichtungssystem und verabreichen Sie eine intraperitoneale Injektion von Atipamezol (1 mg/kg für Ratten und Mäuse), um die Wirkung des Xylazins umzukehren, damit das Nagetier schneller aufwacht.
3. Lassen Sie Nagetiere sich bei schwacher Hitze auf einem Heizkissen erholen. Geben Sie bei Bedarf zusätzliche Salztropfen. Bringen Sie Nagetiere in ihren Heimatkäfig zurück, wenn sie wieder voll beweglich sind.
4. Schließen Sie das Programm, und deaktivieren Sie das OAT.

5. Nachbearbeitung von OCT-Bildern

1. Verarbeiten Sie die Bilder mit einer benutzerdefinierten Software, die in einem mathematischen Modellierungsprogramm entwickelt wurde, um den spezifischen Anforderungen des OCT gerecht zu werden (z. B. Messen Sie die Dicke von Interessenbereichen durch manuelles Markieren der Bilder).
2. Verwenden Sie je nach Zweck des Bildes (Netzhaut der Maus, Rattennetzhaut oder Myopie/axiale Länge) eines von drei verschiedenen Programmen:
   1. Wählen Sie für die Verarbeitung der Netzhaut die zu ladenden OAT-Scans aus. Definieren Sie zunächst das Zentrum des Sehnervenkopfes mit einem einfachen Klick.
   2. Beobachten Sie, wie das Programm vertikale Linien erzeugt, die Entfernungen auf beiden Seiten des Sehnervenkopfes definieren. Beachten Sie, dass diese Linien in der Netzhaut der Ratte 0,5 mm und 1,2 mm von der Mitte des Sehnervenkopfes entfernt sind, für insgesamt 4 vertikale Linien, die die nasal-temporale und untere-superior-Achse des Auges darstellen, abhängig von dem radialen B-Scan, der derzeit analysiert wird.
      HINWEIS: In der Netzhaut der Maus sind diese vertikalen Linien 0,25 mm und 0,5 mm vom Zentrum des Sehnervenkopfes entfernt.
   3. Zeichnen Sie die folgenden Ebenen entlang jeder Linie ab:
      Die retinale Nervenfaserschicht (RNFL), die innere plexiforme Schicht (IPL), die innere Kernschicht (INL), die äußere plexiforme Schicht (OPL), die äußere Kernschicht (ONL), die externe begrenzende Membran (ELM), die inneren Segmente / äußeren Segmente (IS / OS), das retinale Pigmentepithel (RPE) und die gesamte Netzhautdicke.
      HINWEIS: Der Radialscan weist beim Öffnen in der Regel keine nasalen/temporalen und oberen/minderwertigen Beschriftungen auf. Scans können so erstellt werden, dass sie eine N/T- und S/I-Orientierung haben, und insbesondere diese Scans werden später analysiert.
   4. Nachdem ein Bild abgegrenzt und das Programm geschlossen wurde, exportieren Sie diese Messungen zur Datenanalyse in eine Tabellenkalkulationssoftware.
3. Verwenden Sie diese Längen- und Dickenwerte aus Schritt 5, um Vergleiche zwischen Gruppen anzustellen, z. B. um festzustellen, ob regionale Unterschiede (n/t/s/i) oder Längsänderungen vorliegen.
4. Bei Netzhautmessungen wird zunächst festgestellt, ob es im Abstand von 0,5 mm und 1,2 mm Unterschiede in der Nasen-Temporal- und Unter-Ober-Achse gibt.
   HINWEIS: Wenn keine Unterschiede in den Quadranten beobachtet werden, können die 0,5-mm- und 1,2-mm-Messungen zusammen gemittelt werden. Dies ist ein ähnlicher Ansatz für die Netzhautscans der Maus, nur bei 0,25 mm und 0,5 mm.
5. Verwenden Sie dieses Programm für Myopie-Studien, um die Augenparameter entlang der optischen Achse des Auges zu beurteilen. Öffnen Sie das mathematische Modellierungsprogramm. Wählen Sie zunächst ein Bild aus, das geladen werden soll.
   1. Nachdem Sie das Bild geladen haben, markieren Sie jeden Scan manuell (radiale und B-Scans). Markieren Sie die vorderen und hinteren Ränder der Hornhaut, der Linse, der Glaskammer und der Netzhaut, so dass das Programm die Hornhautdicke, die Linsendicke, die Tiefe der vorderen und Glaskörperkammer, die gesamte Netzhautdicke und die gesamte axiale Länge berechnet.
   2. Beenden Sie nach dem Markieren das Programm, das Sie zu einem Speichermenü auffordert. Speichern Sie die abgegrenzten Werte in einer Tabellenkalkulationssoftware und berechnen Sie den Mittelwert der drei separaten Scans.

Ergebnisse

SD-OCT gilt als erfolgreich, wenn qualitativ hochwertige Bilder erhalten werden, so dass die Augenabmessungen zuverlässig gemessen werden können. Hier wird eine Vielzahl von Anwendungen von SD-OCT anhand von Modellen der Netzhautdegeneration, des Glaukoms, der diabetischen Retinopathie und der Myopie veranschaulicht.

In einem lichtinduzierten Netzhautdegeneration-Modell (LIRD) induziert die Exposition gegenüber hellem Licht (10.000 Lux) eine Degeneration von Photorezeptorzellen in der Netzh...

Diskussion

Die hochauflösende Bildgebung von Augenstrukturen in vivo ermöglicht die Beurteilung von Netzhaut- und Augenveränderungen im Laufe der Zeit. In diesem Protokoll wurde gezeigt, dass SD-OCT Unterschiede in den Augenstrukturen in vivo in Modellen der Netzhautdegeneration, des Glaukoms, der diabetischen Retinopathie und der Myopie erfasst.

Der kritischste Aspekt bei der Durchführung von SD-OCT ist es, ein klares Bild der Netzhaut oder einer anderen Augenstruktur von Interesse zu erhalten. Es i...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
1% tropicamide	Sandoz	Sandoz #6131403550; NDC- 24208-585-59
0.5% tetracaine	Alcon	NDC 0065-0741-12
AIM-RAS G3 120 V	Leica Bioptigen	90-AIMRAS-G3-120	Specialized platform to hold the OCT Scanner Head for mice
Celluvisc gel	REFRESH CELLUVISC	#4554; NDC-0023-4554-30
G3 18 mm Telecentric Lens	Leica Bioptigen	90-BORE-G3-18
G3 Mouse Lens	Leica Bioptigen	90-BORE-G3-M
G3 Rat Lens	Leica Bioptigen	90-BORE-G3-R
heating pad	Fabrication	11-1130
InVivoVue software	Leica Bioptigen		Specialized software that pairs with the Leica Bioptigen SD-OCT system
MATLAB	Mathworks		mathematical modeling program
Mouse/Rat Kit	Leica Bioptigen	90-KIT-M/R	Mouse/rat rodent alignment system
saline	ADDIPAK	200-39
System Envisu R4300 VHR 120 V	Leica Bioptigen	90-R4300-V1-120	SD-OCT system