1. Gießen Sie das Silica-Gel in einen Erlenmeyerkolben. Das Gewicht des Verpackungsmaterials sollte etwa 50 x die Probe getrennt zu sein. Wenn die Verbindungen getrennt sehr ähnliche R_f -Werte haben, kann dann es erforderlich, mit einer größeren Menge an Kieselsäure pro Probe, die in diesem Beispiel der Fall ist.
   1. Platz 10 g Kieselsäure in den Erlenmeyerkolben, da 50 mg der Probe (45 mg Fluorenone und 5 mg Tetraphenylporphyrin) sind isoliert.
2. Fügen Sie die Lösungsmittelsystem (Hexan/Dichlormethan, 70 %: 30 %) in den Erlenmeyer-Kolben mit Silica-Gel. Fügen Sie genügend Lösungsmittel um sicherzustellen, dass all das Silica-Gel ist gut solvatisierte. Die Kieselsäure löst sich nicht, aber die Mischung wird visuell wahrnehmbar sein, wenn solvatisierte. Nachdem das Lösungsmittel hinzugefügt wurde wirbeln Sie Erlenmeyerkolben um sicherzustellen, dass all die Kieselsäure ist gut solvatisierte.

2. Vorbereitung der Spalte

1. Wählen Sie die entsprechend dimensionierte Spalte. Die Spalte sollte in der Regel etwa auf halbem Weg mit Kieselgel Gülle gefüllt werden. Je größer die Stichprobe, geläutert, je größer die Spalte erforderlich.
2. Stecken Sie den unteren Rand der Spalte mit einem Stück Glaswolle. Mit einem langen Stab, stellen Sie sicher, dass die Wolle fest in den unteren Rand der Spalte oberhalb der Absperrhahn gestellt wird.
3. Sobald die Wolle fest vorhanden ist, wenden Sie eine dünne Schicht von Sand über die Glaswolle.
   Hinweis: Wenn die Spalte mit einer Glasfritte oberhalb der Absperrhahn ausgestattet ist, sollte dieser Schritt ausgelassen werden.
4. Klemmen Sie die Spalte in die vertikale Position zu einem Ring Stand.
5. Mit einem Trichter, vorsichtig gießen Sie die vorbereiteten Brei aus Silica-Gel in die Spalte. Sie müssen möglicherweise zusätzliche Lösungsmittel um die Gülle aus dem Erlenmeyerkolben auf der Spalte zu übertragen hinzufügen. Mit einer Pipette, waschen Sie unten Silica-Gel, das an den Seiten der Spalte klebt.
   1. Da das Silica-Gel in der Spalte absetzen, klopfen Sie leicht die Seiten der Spalte um sicherzustellen, dass das Silica-Gel fest packt und eventuelle Luftblasen schließt.
6. Öffnen Sie den Absperrhahn und lassen Sie Lösungsmittel in einem sauberen Erlenmeyerkolben bis kurz vor das Silica-Gel und das Lösungsmittel vorderen Treffen ablaufen. Die Silica-Gel sollte nie austrocknen, bis das Verfahren abgeschlossen ist.
7. Legen Sie eine dünne Schicht des Sandes auf das Silica-Gel (Abbildung 1). Mit einer Pipette, waschen Sie unten keinen Sand, die zu den Seiten der Spalte stecken haben kann.
8. Lassen Sie keine zusätzlichen Lösungsmittel, bis der Sand trocken ist, aber nicht bis auf die Silica-Gel-Schicht.

Abbildung 1. Das richtige Setup für eine Säulenchromatographie experimentieren vor der Zugabe der Probe.

(3) Zugabe der Probe auf die Säule

1. Auflösen der Probe in die kleinste Menge des Lösungsmittels möglich (unter Verwendung der gleichen Lösungsmittel, das verwendet wurde, um die Silica-Gel-Gülle machen).
2. Fügen Sie die Probe mit einer Pipette hinzu, sanft an die Spitze der Säule werden.
3. Sobald die Probe an die Spitze der Spalte angewendet wurde, öffnen Sie den Absperrhahn und lassen Sie das Lösungsmittel durch die Sandschicht aber nicht die Silica-Gel-Schicht abtropfen. Verwenden Sie eine sehr kleine Menge des Lösungsmittels, waschen Sie jede Probe, die an den Seiten der Spalte klammerte sich haben kann. Diese zusätzliche Lösungsmittel durch die Sandschicht sowie ablassen.

(4) beschichtete Probe durch die Spalte

1. Mit einer Pipette, sehr sanft fügen Sie 4 – 5 mL des Lösungsmittels in einer Weise, die die Sandschicht nicht stört hinzu.
2. Setzen Sie einen Trichter am oberen Rand der Spalte und sehr langsam und sanft, füllen Sie den Rest der Spalte mit Lösungsmittel.
3. Öffnen Sie den Absperrhahn und lassen Sie das Lösungsmittel durch die Säule ablaufen.
4. Begin die mobile Phase zu sammeln, wie er aus der Spalte in Reagenzgläsern entwässert.
   1. Reagenzgläser sollten in einer sequenziellen Weise in einem Reagenzglas Rack platziert werden.
5. Fügen Sie zusätzliche Lösungsmittel an die Spitze der Säule, wie nötig, bis alle gewünschten Verbindungen von der Säule eluiert haben.

(5) erholt sich die Bestandteile

1. Wenn die Verbindungen farbig sind, können dann sie visuell identifiziert werden. Jedoch wenn die Verbindungen farblos sind, müssen sie mit Ulta-sichtbar (UV) Licht (wenn die Verbindungen Konjugation enthalten) identifiziert werden oder mit den entsprechenden Fleck. Die Reinheit der Verbindungen kann mit Dünnschichtchromatographie überprüft werden.
2. Identifizieren Sie die Reagenzgläser, die die gewünschte widerrufen enthalten.
3. Zusammenführen Sie aller Fraktionen, die die gewünschten isolierten widerrufen in ein vorgewogene Rundboden (RB) Fläschchen enthalten. Dies gilt für jede Verbindung isoliert.
4. Verdampfen des Lösungsmittels indem der RB-Kolben auf die Drehverdampfer.
5. Sobald alle Lösungsmittel entfernt worden ist, wiegen Sie die RB mit das getrocknete Produkt und subtrahieren Sie das Ausgangsgewicht der RB, eine Rendite zu erhalten.