Legen Sie zunächst die sterilen chirurgischen Instrumente auf die Arbeitsbank. Um die betäubte Maus im stereotaktischen Rahmen zu sichern, mischen Sie die oberen Schneidezähne mit einer Nasenklemme und stabilisieren Sie den Kopf mit zwei Ohrstangen. Machen Sie mit einer Augenschere einen 0,5 Zentimeter großen Schnitt auf der Kopfhaut, um den Schädel freizulegen.
Schrubben Sie mit einem in 3%Wasserstoffperoxid getauchten Wattestäbchen den freiliegenden Schädel, um das Periost zu entfernen. Lassen Sie den Schädel trocknen. Befestigen Sie den Bohrer am stereotaktischen Instrument und stellen Sie die Knöpfe des stereotaktischen Arms ein.
Positionieren Sie die Bohrspitze mit Hilfe einer Lupe genau an der Bregma. Zeichnen Sie den Wert der Z-Achse am Bregma mit der LCD-Digitalanzeige auf. Positionieren Sie nun die Bohrspitze am Lambda und notieren Sie den Wert der Z-Achse.
Stellen Sie die Nasenklemme so ein, dass die Differenz zwischen den beiden Z-Werten minimiert wird. Positionieren Sie den Bohrer bei den Koordinaten minus 5,2 für X und plus 0,8 für Y, um den Wert der Z-Achse in dorsaler ventraler Richtung zu messen. Positionieren Sie den Bohrer bei den Koordinaten minus 5,2 für X minus 0,8 für Y, und messen Sie den Wert der Z-Achse erneut.
Stellen Sie die Ohrbügel auf einen bestimmten Maßstab ein. Positionieren Sie den Bohrer auf dem Bregma und stellen Sie drei Koordinaten auf der LCD-Digitalanzeige auf Null. Positionieren Sie den Bohrer anhand von Referenzkoordinaten über dem Interessenbereich.
Starten Sie den Bohrer und senken Sie ihn mit dem vertikalen Arm allmählich ab, bis der Bohrer in den Schädel eindringt. Entfernen Sie Schmutz und Blut mit Wattestäbchen. Geben Sie 25 Mikroliter SDS-PAGE-Ladepuffer mit Bromphenolblau und 50 Mikroliter doppelt destilliertes Wasser in ein 200-Mikroliter-Röhrchen.
Decken Sie das Schädelfenster mit einem mit Kochsalzlösung angefeuchteten Wattepad ab. Laden Sie 0,3 Mikroliter Farbstoff in die Mikrospritze. Befestigen Sie die Spritze und den motorisierten stereotaktischen Mikroinjektor am stereotaktischen Arm.
Positionieren Sie die Spritzenspitze am Bregma und stellen Sie die Koordinaten auf der LCD-Digitalanzeige auf Null. Richten Sie die Nadel entsprechend den Referenzkoordinaten in den interessierenden Bereich ein. Stellen Sie die Geschwindigkeit des Injektors auf 0,1 Mikroliter pro Minute ein und starten Sie den motorisierten Mikroinjektor, der 0,3 Mikroliter Farbstoff in den Zielbereich abgibt.
Ziehen Sie den Injektor nach 10 Minuten langsam zurück.
