Um die Passage von Neurosphären durchzuführen, die aus Neurostammzellen gewonnen wurden, die aus der subventrikulären Zone der Neuronen isoliert wurden, entnehmen Sie bitte das Medium, das die Neurosphären enthält, von den Multi-Well-Platten und übertragen Sie sie in ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Zentrifugieren Sie die Neurosphären fünf Minuten lang bei 300 G. Nachdem Sie den Überstand entfernt haben, fügen Sie dem Pellet 200 Mikroliter enzymatische Lösung hinzu und klopfen Sie vorsichtig auf den Boden des Röhrchens, um es zu lösen. 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um die Dissoziation der Neurosphäre zu erleichtern.
Fügen Sie dann einen Milliliter Kontrollmedium hinzu, um die enzymatische Reaktion zu stoppen. Dissoziieren Sie Neurosphären mechanisch mit einer P 1000 Mikropipette, indem Sie 10 bis 20 Mal auf und ab pipettieren. Fügen Sie ein zusätzliches Volumen von vier Millilitern Kontrollmedium hinzu und mischen Sie es durch Inversion, um die Zellen zu waschen.
Die Zellen werden fünf Minuten lang bei 300 g zentrifugiert, bevor der Überstand entfernt wird. Fügen Sie einen Milliliter des vollständigen Mediums hinzu und resuspendieren Sie das Pellet, um die Zellsuspension zu homogenisieren, indem Sie 10 Mal auf und ab pipettieren. Nach Verdünnung eines Teils eines Aliquots der Zellsuspension mit einem Teil Trypanblau wird die Zellsuspension mit einer Neubauer-Kammer gezählt.
Zur Erweiterung der Kultur werden Zellen mit einer Dichte von 10.000 Zellen pro Quadratzentimeter unter Verwendung eines vollständigen Mediums in einer geeigneten Kulturplatte oder einem geeigneten Kolben gesät.
