Tragen Sie zunächst einen rechteckigen Umriss aus klarem Nagellack auf den Objektträger auf. Bereiten Sie mehrere solcher Transplantatpräparate vor. Um das anästhesierte Tier zu montieren, verwenden Sie eine Pasteur-Pipette und eine Pumpe, um es von RPT auf niedrigschmelzende Agarose oder LMA zu übertragen.
Übertragen Sie dann das Tier in einem kleinen Tropfen LMA auf die Folie innerhalb der Nagellackkontur. Bevor sich das LMA verfestigt, verwenden Sie einen Embryo-Pusher, um das Tier vertikal auszurichten, wobei die vorgesehene Nadeleinstichstelle nach rechts zeigt. Und lassen Sie die Agarose etwa fünf Minuten lang vollständig aushärten.
Schneide mit einem Skalpell einen geraden senkrechten Schnitt durch den Agarose-Tropfen rechts neben dem montierten Tier. Wischen Sie lose Agarose von der Rutsche ab. Schneiden Sie mit einem Skalpell Keile aus der Agarose, um die Einstichstelle der Nadel freizulegen.
Tragen Sie RPT auf den Objektträger auf, bis die Agarosetropfen vollständig eingetaucht sind. Und montieren Sie den vorbereiteten Objektträger auf das Transplantationsmikroskop. Senken Sie das 40X-Objektiv ab, bis es die Oberfläche des Mediums durchbricht, und heben Sie es an, um das Spendertier in den Fokus zu bringen.
Bringen Sie dann die fluoreszenzmarkierten Spenderzellen von Interesse in den Fokus. Schieben Sie den Tisch nach links, um die Transplantatnadel zu platzieren.
