We thank Mr. Hajime Ichijo for video recording and helpful advice concerning editing the video. We also thank the Osumi lab members for animal care. This work is supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Area, Neural Diversity and Neocortical Organization, from MEXT of Japan (to N. O.). T. K. was supported by a Research Fellowship of JSPS for Young Scientists.

HINWEIS: Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt. Der Ausschuss für Tierversuche der Tohoku University School of Medicine hat den hier beschriebenen experimentellen Verfahren. 1. Anästhesie und Laparotomie <ol style="margin-left: 40px;"><li> Für die Blutentnahme, verwenden Sie spezifischen Pathogen-freien männlichen Sprague-Dawley Ratten. Schnell die Ratten für mindestens 18 Stunden, während die Bereitstellung von Wasser. Verwenden Sie im Ruhestand männlichen Ratten Züchter bei 6-8 Monaten (550-650 g) zum Sammeln von Blut. </li><li> Durchfluss von 2,5 bis 4,0% Isofluran, die ein Inhalationsnarkosemittel ist, in eine Box zu einem Narkosegerät angeschlossen, um Anästhesie bei 2,0 bis 3,5 l / min für 10 Minuten vorstellen. Übertragen Ratten in der Box auf die Anästhesie einzuführen. <ol><li> Betäubung zu bestätigen, indem der Verlust der Reaktion auf die Stimulation an den Pfoten mit einer Pinzette. Decken Sie die Nase des Ratten with eine Maske auf ein Narkosegerät, um während der Blutabnahme tief betäuben die Ratten verbunden. Die Konzentration und Strömungs werden bei 2,5-4,0% gehalten und 2,0-3,5 L / min. HINWEIS: Halothan sollte nicht zur Inhalationsanästhesie verwendet, weil Embryonen im Serum, die von Ratten, die mit diesem Reagens weisen eine Verzögerung in der embryonalen Entwicklung im Vergleich zu Embryonen in der von Ratten mit Isofluran betäubt 22 erhaltene Serum kultiviert betäubt gesammelt, kultiviert werden. </li></ol></li><li> Um eine Kontamination des Fells zu vermeiden, die Haut desinfiziert durch Eingießen 70% Ethanol auf den Bauch der narkotisierten Ratte. Pick-up die Haut desinfiziert und Bauchwand am unteren Bereich mit einer Pinzette und gleichzeitig geschnitten, diese Schichten in Richtung der Thorax-Bereich mit einem Paar große Schere, um die inneren Organe aus. Reflect den Darm außerhalb der Bauchhöhle mit einer Pinzette. </li><li> Schneiden Sie die Haut und Bauchwand in Richtung der Hinterbeine mit einerPaar große Schere, um die hinteren Bauchbereich weiter aus. Reflektieren Sie das Extra-Fett außerhalb der Bauchhöhle mit einer Pinzette. </li><li> Nehmen Sie das viszerale Fett an der Mittellinie mit zwei Pinzetten und teilen das Fett vorsichtig in einer Richtung parallel zu der Bauchschlagader freizulegen. Wiederholen Sie diesen Vorgang, um das viszerale Fett in Längsrichtung geteilt, um leicht die Gabelung der Bauchaorta. Zusätzlich ist die Aorta pulsatilen und kann von der benachbarten Hohlvene mit diesen charakteristischen unterscheiden. </li><li> Nehmen Sie das Fett um die Bauchaorta und die Bifurkation vorsichtig mit zwei Pinzetten und trennen Sie das Fett auf der Bauchaorta. </li></ol> 2. Blutentnahme <ol style="margin-left: 40px;"><li> Vorsichtig die Spitze einer 21 G Nadel in eine 20 ml Spritze unmittelbar kranial der Bifurkation der Aorta, mit dem Kegel nach unten verbunden. Halten Sie die Spritze mit einemHand, und ziehen Sie die Spritze langsam zu 15 ml Blut aus einer männlichen Ratte zu sammeln. </li><li> Entfernen Sie die Nadel aus der Spritze, und gießen Sie das Blut in zwei eiskalte 10-ml sterilen Röhrchen (Abbildung 1A). Halten Sie die Röhrchen auf Eis, bis Zentrifugation, um die Bildung der Blutgerinnsel verzögern. Reduzieren Sie die Zeit Zentrifugation durch Zentrifugieren mehrere Rohre auf einmal. </li><li> Euthanize die narkotisierten Ratten durch Thorakotomie und Schneiden des Herzens oder Enthauptung. </li></ol> 3. Rat Serum Vorbereitung <ol style="margin-left: 40px;"><li> Zentrifugieren des gesammelten Blutes für 5 min bei 1.200 × g und Raumtemperatur (RT), um das Blut in einen oberen und unteren Lagen (1C) zu trennen. </li><li> Halten Sie die Röhrchen bei 4 ° C für 1,5-2 Stunden, um die Fibringerinnsel beheben. </li><li> Holen das Fibringerinnsel in der oberen Schicht unter Verwendung eines Paars von gebogenen Pinzette und quetschen das Fibringerinnsel, das Serum zu trennen. Drücken Sie dann die Fibringerinnsel mit den gebogenen Pinzette gegen downwards nahe der Grenzfläche zwischen den beiden Schichten (Fig. 1D). </li><li> Wiederholen Sie Schritt 3.3 weiter lösen das Fibringerinnsel. </li><li> Zentrifugieren Sie die Röhrchen für 5 min bei 1.200 xg und RT (1E). </li><li> Das Serum vorsichtig in einem 15 ml sterilen Röhrchen übertragen mit einer sterilen Pipette in einer Laminar-Air-Flow-Gehäuse. </li><li> Zentrifugieren des gesammelten Rattenserum für 5 min bei 1.200 × g und Raumtemperatur, um jegliche verbleibenden roten Blutkörperchen zu entfernen. </li><li> Pool Serum vorsichtig in ein neues 15 ml sterilisierten Röhrchen unter Verwendung einer sterilen Pipette, um eine Kontamination durch restliche Erythrozyten am Boden des Rohres (1F) zu vermeiden. </li><li> Inkubieren des Serums in einem Wasserbad bei 56 ° C für 30 min, um das Komplementsystem zu inaktivieren. </li><li> Kühlen Sie die Rohre aus Rattenserum auf RT im laminaren Luftstrom Schrank. Das Serum sollte auf 10 ml, einzeln steril Röhrchen aliquotiert werden. Die Röhrchen bei -20 ° C bis zur Verwendung (1H). </li></ol>

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction.">Introduction.</a> Mammalian Postimplantation Embryos. A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J Craniofac Genet Dev Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>Takahashi, M., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+method+of+rodent+whole+embryo+culture+using+the+rotator-type+bottle+culture+system.">The method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system.</a> J Vis Exp. (42), e2170 (2010).</li><li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+embryo+culture,+teratogenesis,+and+the+estimation+of+teratologic+risk.">Whole embryo culture, teratogenesis, and the estimation of teratologic risk.</a> Teratology. 42, 635-642 (1990).</li><li>Matsuo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mutation+in+the+Pax-6+gene+in+rat+small+eye+is+associated+with+impaired+migration+of+midbrain+crest+cells.">A mutation in the Pax-6 gene in rat small eye is associated with impaired migration of midbrain crest cells.</a> Nat Genet. 3, 299-304 (1993).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Yamamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nodal+antagonists+regulate+formation+of+the+anteroposterior+axis+of+the+mouse+embryo.">Nodal antagonists regulate formation of the anteroposterior axis of the mouse embryo.</a> Nature. 428, 387-392 (2004).</li><li>Inoue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cadherins+in+maintaining+the+compartment+boundary+between+the+cortex+and+striatum+during+development.">Role of cadherins in maintaining the compartment boundary between the cortex and striatum during development.</a> Development. 128, 561-569 (2001).</li><li>Takahashi, M., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+regulates+specification+of+ventral+neurone+subtypes+in+the+hindbrain+by+establishing+progenitor+domains.">Pax6 regulates specification of ventral neurone subtypes in the hindbrain by establishing progenitor domains.</a> Development. 129, 1327-1338 (2002).</li><li>Calegari, F., Haubensak, W., Yang, D., Huttner, W. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergent+extension+analysis+in+mouse+whole+embryo+culture.">Convergent extension analysis in mouse whole embryo culture.</a> Methods Mol Biol. 839, 133-146 (2012).</li><li>Kikkawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dmrta1+regulates+proneural+gene+expression+downstream+of+Pax6+in+the+mammalian+telencephalon.">Dmrta1 regulates proneural gene expression downstream of Pax6 in the mammalian telencephalon.</a> Genes Cells. 18, 636-649 (2013).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Fukuchi-Shimogori, T., Grove, E. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+backscatter+microscopy+of+mouse+embryos.">Ultrasound backscatter microscopy of mouse embryos.</a> Methods Mol Biol. 135, 235-243 (2000).</li><li>Pierfelice, T. J., Gaiano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+microinjection+into+the+mouse+forebrain+in+utero+at+E9.5.">Ultrasound-guided microinjection into the mouse forebrain in utero at E9.5.</a> J Vis Exp. (45), e2047 (2010).</li><li>Quinlan, G. A., Khoo, P. L., Wong, N., Trainor, P. A., Tam, P. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+tube+closure+in+mouse+whole+embryo+culture.">Neural tube closure in mouse whole embryo culture.</a> J Vis Exp. (56), e3132 (2011).</li><li>Machado, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+phrenic+neuron+identity+in+embryonic+stem+cell-derived+motor+neurons.">Reconstruction of phrenic neuron identity in embryonic stem cell-derived motor neurons.</a> Development. 141, 784-794 (2014).</li><li>Glanville-Jones, H. C., Woo, N., Arkell, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+whole+embryo+culture+with+commercially+available+reagents.">Successful whole embryo culture with commercially available reagents.</a> Int J Dev Biol. 57, 61-67 (2013).</li><li>Ornoy, A., Yacobi, S., Yaffee, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+culture+of+11.5-day-old+rat+embryos+in+DMEM/F12+and+20%+fetal+bovine+serum.">A simple method of culture of 11.5-day-old rat embryos in DMEM/F12 and 20% fetal bovine serum.</a> J Anat. 203, 419-423 (2003).</li><li>Moore-Scott, B. A., Gordon, J., Blackburn, C. C., Condie, B. G., Manley, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+serum-free+in+vitro+culture+technique+for+midgestation+mouse+embryos.">New serum-free in vitro culture technique for midgestation mouse embryos.</a> Genesis. 35, 164-168 (2003).</li><li>Kalaskar, V. K., Lauderdale, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Embryonic+Development+in+a+Serum-free+Whole+Embryo+Culture+System.">Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System.</a> J Vis Exp. (85), e50308 (2014).</li></ol>

No conflicts of interest are declared.

Reproduzierbare Ergebnisse in WEC Experimente sind abhängig von der Verwendung von hochwertigen IC Rattenserum und genaue Embryo Dissektionstechnik 3. Den Zeitraum des Fastens vor Blutentnahme nicht kürzen, weil das Fasten ist notwendig, um Glucose-Konzentrationen im Blut zu standardisieren. Weibliche Ratten, nicht zur Herstellung von Serum verwendet werden, da Hormonspiegel ändern bei weiblichen Tieren nach dem Östrus-Zyklus, und diese Änderungen in Hormone Östradiol für Embryokulturen geeignet sind. ...

Eine Vielzahl von Modelltiere sind in der Entwicklungsbiologie zur Entwicklungsmechanismen auf molekularer und zellulärer Ebene zu untersuchen. Zum Beispiel Amphibien-und Vogelspezies wurden weithin als klassische Modell Tiere, die für die direkte Behandlung der Embryonen sind, weil diese Embryonen entwickeln sich außerhalb der Mutter eingesetzt. Im Gegensatz zu diesen Tieren wachsen Säugetier-Embryonen in die Gebärmutter der Mutter, und das Wachstum in späteren Phasen hängt entscheidend von der Funktion der Gebärmutter. Daher ist es in der Regel schwierig, Säugetierembryos, wie sie aus der Maus und Ratte in einem frühen Stadium direkt zu manipulieren. In den 1960er Jahren wurde eine neue Denis ganze Säugetierembryokultur (WEC)-Technik mit WEC Geräte mit einer kontinuierlichen Sauerstoffzufuhr und Wärme ein. WEC können Maus-und Rattenembryos zu wachsen ex vivo (dh außerhalb des Uterus). Obwohl die WEC-Technik wurde oft in Teratologie durch Zugabe verschiedener chemic verwendetAl-Verbindungen in dem Kulturmedium wurde diese Technik auch in verschiedenen Entwicklungsbiologie Studien verwendet worden, um einzigartige Entwicklungsmechanismen in Säugetieren 2-4 zu prüfen. Zum Beispiel wird WEC mit anderen Techniken, wie z. B. Zellmarkierung, in Wildtyp-und Mutanten-Embryos unter Verwendung fluoreszierender Farbstoff 5, Zelltransplantation 6 und Gen-Einführung über 7 Lipofektion und Elektroporation 8-13 kombiniert. Kürzlich wurde in utero Manipulation verwendet wurde, um Entwicklungsprozesse in Nagetierembryonen in späteren Stadien zu analysieren und mit Elektroporationsverfahren 14-16 zusammengefasst. Jedoch sind diese Techniken nicht für die Handhabung von Postimplantationsembryonen und midgestation aufgrund von Schwierigkeiten Erzielung einer genauen lokalen Injektion der DNA-Lösung in Embryonen im Frühstadium. Obwohl Ultraschall-geführte Zelltransplantation und Injektion von viralen Vektoren in frühen Embryonen (dh, E8.5-E-9.5 in der Maus) in utero wurde berichtet, zuvor 17,18, sind sehr gute Kenntnisse erforderlich, um diese Experimente mit einer hohen Erfolgsquote durchzuführen. Daher WEC mit hoher Zugänglichkeit ex vivo hat Vorteile in Bezug auf die Manipulation der Maus-und Rattenembryos. Sofort zentrifugiert (IC) Rattenserum von männlichen Ratten vorbereitet wird oft für WEC Medium verwendet. Wenn Embryonen sind in der Postimplantationsstufe (dh früher als E8.0 im E10.0 Maus oder der Ratte) kultiviert wird eine Mischung aus synthetischen Mediums und IC Rattenserum häufig als Medium für WEC 19 verwendet. Doch die Kultur Embryonen in der Mitte der Schwangerschaft (dh., E8.0-12.5 in Maus-Embryonen oder E10.0-E14.5 in Rattenembryonen), 100% Serum sollte als Medium verwendet werden, da es derzeit keine alternative Medien ermöglicht Embryonen in vitro normalerweise länger als 2 Tage wachsen. Die Herstellung von hochwertigen RattenserumEin entscheidender Schritt zur Erreichung Reproduzierbarkeit WEC Experimenten. Verglichen mit verzögerter Zentrifugation hat den IC Vorteil der Reduzierung der Hämolyse, wenn das Serum wird durch Zusammendrücken des Fibringerinnsels gesammelt, da die meisten der roten Blutzellen bereits aus der Fibrin-Gerinnsel getrennt. Als hämolytischer Rattenserum nicht auf das normale Wachstum der Ratten-und Maus-Embryonen zu unterstützen, ist die Herstellung von Serum mit sofortiger Zentrifugation bevorzugt Zubereitung mit verzögerter Zentrifugation. Unser Protokoll enthält zwei zusätzliche Schritte im Vergleich zu anderen Protokollen 18-20 (dh., Speichern des gesammelten Bluts auf Eis vor der ersten Zentrifugation und Halten der gesammelten Blutproben 2 h bei 4 º C nach der ersten Zentrifugation). Die ersteren Stufe die Bildung des Blutgerinnsels zu verzögern, und der letztere Schritt fördert die Verfestigung des Fibringerinnsels für einfache Quetschen. Daher kann unser Protokoll von Anfängern verwendet werden. Allerdings reproduzieren Blutentnahme und SerumExtraktion genau durch einfaches Protokoll Bücher bezieht, ist extrem schwierig, 19-21. In diesem Video-Beitrag zeigen wir, unsere Standard-Protokoll für die Herstellung der optimalen IC Rattenserum, die Blutentnahme aus der Bauchaorta von männlichen Ratten und Gewinnung von Serum durch Zentrifugation enthält.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="892">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:156px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:401px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Isoflurane</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>B506</td>
			<td>For anesthesia of rats.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Large scissors</td>
			<td>Napox</td>
			<td>B-7H</td>
			<td>Stelized scissors for cutting the skin and muscle of rats.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>Napox</td>
			<td>A-3-2</td>
			<td>Stelized forceps for picking up the skin of rats and squeezing the fibrin clot.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sprague-Dawley (SD) rat</td>
			<td>Charles Rivers Laboratories</td>
			<td></td>
			<td>Retired male rats from colony in the lab or purchased retired male rats.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe (20 ml)</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-29ESZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle (21G x 5/8&#34;)</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-2116R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile test (spitz) tube (10 ml)</td>
			<td>ASIAKIZAI</td>
			<td style="width:119px;">1101C000B-10</td>
			<td>For collection of boold</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile disposable pipette</td>
			<td>Eiken Chemical</td>
			<td>CD2000 No.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterilie disposable tube (15 ml)&#160;</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>2196</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for investigating the mechanisms of developmental processes. Immediately centrifuged (IC) rat serum is commonly used for WEC and is essential for the growth and development of cultured mouse and rat embryos ex vivo. For the culture of midgestation embryos (i.e., E8.0-12.5 for the mouse, and E10.0-14.5 for the rat), 100% rat serum is the best media for supporting the growth of the embryo ex vivo. To prepare rat serum suitable for WEC, the collected blood should be centrifuged immediately to separate the blood cells from the plasma fraction. After centrifugation, the fibrin clot forms in the upper layer; this clot should be squeezed gently using a pair of sterile forceps and subsequently centrifuged to completely separate the blood cells from the serum. In this video article, we demonstrate our standard protocol for the preparation of optimal IC rat serum, including blood collection from the abdominal aorta of male rats and extraction of the serum by centrifugation.

Abbildung 1 zeigt repräsentative Ergebnisse von den beschriebenen Verfahren zur Abtrennung von Blutzellen und Serum. Wir erhalten in der Regel 15 ml Blut aus einem pensionierten männlichen Ratte (Abbildung 1A). Durch Zentrifugieren, kann das gesammelte Blut in eine obere Schicht, die das Serum und das Fibringerinnsel, die mit einem Pfeil angedeutet ist, und eine untere Schicht, die die Blutzellen (Fig. 1C) getrennt werden. Wichtiger ist, hämolytische Blutproben nicht...

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Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is widely used in teratology and developmental biology. Immediately centrifuged rat serum is commonly provided as a medium for both mouse and rat WEC. In this video, we demonstrate our standard protocol for the preparation of high-quality rat serum suitable for mammalian WEC.

Herstellung von Ratten Serum Geeignet für Säugetier Whole Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

preparation-of-rat-serum-suitable-for-mammalian-whole-embryo-culture

Research

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Biology

13.7K Aufrufe.  Jichi Medical University. Mammalian whole embryo culture (WEC) is widely used in teratology and developmental biology. Immediately centrifuged rat serum is commonly provided as a medium for both mouse and rat WEC. In this video, we demonstrate our standard protocol for the preparation of high-quality rat serum suitable for mammalian WEC.