Diese Methode bietet ein präklinisches Verhaltenssurrogat für Photophobie, die eine Hauptbeschwerde von Migränepatienten ist. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die Erkennung automatisch und somit sehr bequem ist. Auch Lichtaversion und Angst können durch die Durchführung dieser Tests unterschieden werden.
Schalten Sie am ersten Tag den Hell/Dunkel-Assay-Apparat ein. Stellen Sie die Lichtstärke auf 27.000 Lux ein. Legen Sie den dunklen Einsatz in die Hell-/Dunkelkammer.
Öffnen Sie die Tracking-Software und richten Sie ein neues Protokoll ein. Legen Sie in der neuen Protokolleinstellung die Dauer auf 30 Minuten fest. Legen Sie in der neuen Analyseeinstellung die Datenbins nach Dauer auf 300 Sekunden fest.
Wählen Sie in der neuen Zoneneinstellung vordefinierte Zonen aus. Wählen Sie zwei und dann horizontal aus. Überprüfen Sie, ob die Kammer für die Aufnahme horizontal in zwei gleich große Zonen unterteilt ist.
Gewöhnen Sie die Mäuse vor dem Test eine Stunde lang an den Testraum und halten Sie den Raum hell, um den zirkadianen Rhythmus der Mäuse nicht zu stören. Stellen Sie sicher, dass alle Geräte für den Hell/Dunkel-Assay eingeschaltet sind, damit sich die Mäuse vollständig an die Umgebung des Testraums gewöhnen können. Wählen Sie Daten erfassen aus, geben Sie die Maus-IDs ein und starten Sie das Protokoll.
Ziehen Sie die Schublade außerhalb der schalldämpfenden Kabine, um Zugang zur Hell/Dunkel-Kammer und zum dunklen Einsatz zu erhalten. Legen Sie eine Maus vorsichtig in die Lichtzone der Kammer und drücken Sie die Schublade in die Kabine. Stellen Sie sicher, dass die Software die Maus sofort erkennt und mit der Aufzeichnung der Aktivität beginnt.
Warten Sie, bis die Aufzeichnung nach 30 Minuten automatisch beendet wird. Bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück. Reinigen Sie die Kammer und den dunklen Einsatz mit keimtötenden Einwegtüchern mit Alkoholgeruch, um alle olfaktorischen Hinweise zu beseitigen, die von der vorherigen Maus hinterlassen wurden.
Wiederholen Sie am vierten Tag alle Schritte, die am ersten Tag ausgeführt wurden. Wiederholen Sie am siebten Tag die am ersten Tag ausgeführten Schritte, jedoch nur bis zur Gewöhnung der Mäuse. Nach der Gewöhnung die Mäuse intraperitoneal mit CGRP verabreichen.
Dann bringen Sie die Mäuse in ihre Heimkäfige zurück. Setzen Sie nach 30 Minuten das Protokoll fort und führen Sie die Maus wie bereits erwähnt in der Hell-Dunkel-Kammer aus. Reinigen Sie die Kammer und den dunklen Einsatz wie zuvor beschrieben.
Wiederholen Sie am 10. Tag alle am ersten Tag ausgeführten Schritte. Schalten Sie das Gerät ein und stellen Sie die Lichtintensität auf 27.000 Lux ein. Öffnen Sie die Tracking-Software und richten Sie ein neues Protokoll ein, wie zuvor gezeigt.
Wählen Sie in den neuen Zoneneinstellungen eine gefolgt von der Mitte aus. Stellen Sie die Peripherie auf 3,97 Zentimeter und die Mitte auf 19,05 mal 19,05 Zentimeter ein. Gewöhnen Sie die Mäuse an den Testraum, wie zuvor gezeigt.
Verabreichen Sie die Mäuse mit CGRP intraperitoneal. Bringen Sie die Mäuse in ihre Heimkäfige zurück. Starten Sie nach 30 Minuten das Protokoll.
Ziehen Sie die ausziehbare Schublade außerhalb der schalldämpfenden Kabine und platzieren Sie vorsichtig eine Maus in der Mitte der offenen Feldkammer. Schieben Sie die Schublade in die Kabine. Verfolgen Sie das Verhalten der Maus 30 Minuten lang und bringen Sie die Mäuse dann in ihre Heimkäfige zurück.
Reinigen Sie das Gerät wie zuvor demonstriert. Die Ergebnisse zeigten, dass die intraperitoneale Injektion von CGRP die Dauer der Zeit, die im Hell-Dunkel-Assay bei CD1- und C57-schwarzen 6J-Mäusen in der hellen Zone verbracht wurde, signifikant verkürzte, aber nicht die Zeit beeinflusste, die Mäuse im Zentrum des Freifeld-Assays bei CD1- und C57-schwarzen 6J-Mäusen verbrachten. Die Behandlung mit CGRP erhöhte auch die Zeit, die Mäuse in der dunklen Zone ruhten, aber nicht in der hellen Zone sowohl bei CD1- als auch bei C57-schwarzen 6J-Mäusen.
Die optische Stimulation von Neuronen in den hinteren thalamischen Kernen führte zu einer entsprechenden Abnahme der Dauer, die Mäuse im Hell-Dunkel-Assay in Kanalrhodopsin-2-injizierten Mäusen in der Lichtzone verbrachten, verglichen mit Kontrollvirus-injizierten Mäusen. Eine Zunahme der Ruhezeit in der dunklen Zone, aber nicht in der hellen Zone wurde auch bei den Channelrhodopsin-2-injizierten Mäusen im Vergleich zu den Kontrollvirus-injizierten Mäusen beobachtet. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Maus beim Einsetzen der Maus in die Hell-Dunkel-Kammer sanft behandelt werden sollte, um so viel Stress wie möglich zu vermeiden.
Diese Technik wird den Weg ebnen, um Mechanismen zu erforschen, die Migräne und anderen mit Photophobie verbundenen Erkrankungen zugrunde liegen, und die präklinische Wirksamkeit potenzieller Therapeutika zu testen.
