Diese Isolationstechnik kann verwendet werden, um zu untersuchen, ob Fettstammzellen Patienten helfen können, die erektile Funktion nach radikaler Prostatektomie zu regenerieren. Diese Methode ist nicht auf eine bestimmte Krankheit beschränkt. Es könnte in allen Bereichen der Fettstammzellforschung eingesetzt werden.
Die isolierten Stammzellen werden zur Behandlung der erektilen Dysfunktion verwendet, aber die Isolationstechnik ist ein allgemeines Verfahren und die Stammzellen können in anderen Bereichen der Stammzellforschung nützlich sein. Beginnen Sie mit der Desinfektion der Haut des Abdomens und des Hodensacks mit 0,5% Chlorhexidin. Verwenden Sie einen chirurgischen Marker, um die Bereiche am Bauch zu zeichnen, in denen die Fettabsaugung durchgeführt werden soll, normalerweise der Bereich zwischen der Synthese und dem Nabel.
Machen Sie zwei sechs Millimeter breite Einschnitte in die Haut des Abdomens mit einem Skalpell Nummer 11. Platzieren Sie die Schnitte symmetrisch und seitlich aus dem nach oben gezogenen Bereich der Fettabsaugung. Legen Sie ein wenig Gleitmittel auf die Einschnitte, um sicherzustellen, dass die Infiltrationskanüle während der Fettabsaugung leicht in die Einschnitte hinein- und herausgleitet.
Dann führen Sie eine Infiltrationskanüle der Größe 14 durch die Einschnitte in der Haut ein. Injizieren Sie modifizierte Klein-Lösung subkutan in die markierten Bereiche parallel zur Hautoberfläche, bis das Zielgewebe geschwollen und fest oder tumeszierend wird. Injizieren Sie ein Volumen modifizierter Klein-Lösung in einem Verhältnis von eins zu eins zum Fettgewebe.
Warten Sie 10 Minuten, um die Wirkung von Adrenalin zu maximieren und die Blutmenge im geernteten Fettgewebe zu reduzieren. Führen Sie eine Standard-Jet-Infusions-Fettabsaugung durch, um 200 bis 300 Millimeter Fettgewebe zu ernten. Verwenden Sie stumpfe Kanülen, die hohl sind, mit integriertem Infusionsschlauch und Düse.
Befestigen Sie die Kanüle zur Fettabsaugung an einem Absauggerät. Führen Sie eine Drei-Millimeter-Spritze mit stumpfer Spitze durch die Einschnitte am Bauch ein und sammeln Sie das Fettgewebe im Lipo Collector, um das Lipoaspirate in einer sterilen Umgebung zu erhalten. Das Lipoaspirate beginnt sich von der Wasserphase zu trennen.
Verwenden Sie sterile 50-Milliliter-Spritzen, um das Lipoaspirate aus dem LipoCollector aufzusaugen, wodurch das in den Spritzen aufgesaugte Wasservolumen minimiert wird. Schrauben Sie einen Stecker an die Spitze der Spritzen, um das Fettgewebe steril zu halten. Legen Sie Spritzen mit der Spitze nach unten in einen sterilen Plastikbeutel, um die Trennung von Lipoaspirate aus der Wasserphase zu starten.
Dann legen Sie den Beutel in einen sterilen Behälter. Decken Sie den Behälter mit einem sterilen Tuch ab, um die sterile Umgebung während des Transports zu sichern. Schließen Sie die Hautschnitte mit dem bevorzugten Nahtmaterial des Chirurgen.
Legen Sie eine Kompressionsstütze um den Bauch, um das postoperative Ödem zu reduzieren. Um einen Penisblock herzustellen, injizieren Sie das Bupivacain an zwei Stellen, eine ventral und die andere dorsal. Führen Sie die gesamte Nadel in das Unterhautgewebe ein, richten Sie sie seitlich nach rechts und injizieren Sie die Anästhesie, wenn die Nadel zurückgezogen wird.
Wiederholen Sie die Injektion und richten Sie die Nadel nach links. Legen Sie alle Verbrauchsmaterialien und Enzyme aseptisch auf den Tisch, der von einem sterilen Einweg-OP-Handtuch bedeckt ist. Wischen Sie das Gerät mit Ethanol ab und laden Sie das Verbrauchsmaterial-Set.
Schließen Sie dann eine Tüte mit laktierten Ringern an das System an. Führen Sie die Reihe der halbautomatischen Tests durch, bevor Sie das Lipoaspirate hinzufügen. Lassen Sie das Lipoaspirate während der Vorbereitung in einem 50-Milliliter-Schlauch stehen, damit sich das Fett von der flüssigen Phase trennen kann.
Beachten Sie die Gesamtmenge an Fettgewebe und verwenden Sie diese, um sicherzustellen, dass die Gesamtmenge an geladenem Fett im Bereich der Gerätekapazität liegt. Laden Sie das Gewebe ein, wenn Sie vom Gerät dazu aufgefordert werden. Die Maschine leitet überschüssige Flüssigkeit ab.
Wiegen Sie die Menge an Fettgewebe und waschen Sie es mit laktierten Ringern. Wenn das Gewebe gewaschen und entleert wurde, schließen Sie einen neuen Infusionsbeutel mit 37 bis 39 Grad Celsius Lactat-Ringern an. Rekonstituieren Sie das kommerziell erhältliche Enzym, das Kollagenase und Protease enthält, in fünf Milliliter laktierten Ringern.
Stellen Sie sicher, dass das Gerät die Menge an Enzym anzeigt, die mit dem Fettgewebe in den Kanister injiziert werden soll. Nach der Injektion dauert die enzymatische Verdauung etwa 20 Minuten. Überprüfen Sie nach der Gewebeverdauung, ob der Inhalt in ein oberes Lipid mit gelber Phase und eine untere rosa Schicht getrennt ist, die die aus Fett gewonnenen regenerativen Zellen oder ADRCs enthält.
Lassen Sie die rosa Schicht in die Zellverarbeitungskammer des Verbrauchsstoffsets abfließen und lassen Sie die Lipidschicht zurück. Lassen Sie die ADRCs während mehrerer Zentrifugationsrunden in der Zellverarbeitungskammer konzentrieren. Dann fügen Sie 10 Milliliter Intrabase hinzu, die in den laktierten Ringern rekonstituiert sind.
Die enzymatische Reaktion dauert 10 Minuten und die ADRCs werden anschließend gewaschen. Wenn die Isolierung von ADRCs abgeschlossen ist, suspendieren Sie die Zellen in fünf Millilitern Ringer-Laktat wieder und saugen Sie die Lösung in eine Fünf-Milliliter-Spritze ab. Montieren Sie eine Drei-Wege-Absperrhahn-Buchse Luer an der Spritze und saugen Sie vier Milliliter ADRCs in eine weitere sterile Fünf-Milliliter-Spritze ab.
Übertragen Sie den letzten einen Milliliter ADRCs in eine Ein-Milliliter-Spritze. Verwenden Sie dieses Aliquot für ADRC-Charakterisierungsanalysen, wie z. B. Zellzahl, Zelllebensfähigkeit, Analyse von Oberflächenmarkern durch Durchflusszytometrie und ADRC-Differenzierungsfähigkeit. Setzen Sie eine 25-Gauge-Nadel auf die Fünf-Milliliter-Spritze, die die vier Milliliter ADRCs enthält.
Dann verpacken Sie es in einem sterilen Vorhang. Diese Lösung von ADRCs wird in den Empfänger injiziert und sollte im Durchschnitt 8,4 bis 32,7 Millionen Zellen enthalten. Stellen Sie sicher, dass die Lösung von ADRCs homogen bleibt, indem Sie die Spritze vorsichtig kippen, bis sie in die Corpora cavernosum injiziert wird.
Legen Sie einen Blendenvorhang über den Penis. Und ein Tourniquet an der Wurzel des Penis mit einer Silikongefäßschlaufe. Ziehen Sie die Schlaufe fest und sichern Sie sie mit einer Pinzette, wodurch das Tourniquet fest genug ist, um den Blutfluss aus dem Penis zu stoppen.
Verwenden Sie zwei antiseptische Tupfer, um die Penishaut an der Injektionsstelle zu desinfizieren. Dann injizieren Sie einen Milliliter der ADRC-Lösung in einem direkten Winkel in die Corpora cavernosum, auf der rechten Seite an zwei verschiedenen Stellen. Wiederholen Sie diesen Schritt in der linken Korpora cavernosum und injizieren Sie ein Gesamtvolumen von vier Millilitern.
Diese Methode wurde in einer offenen klinischen Phase-Eins-Studie an 21 Männern mit einem Durchschnittsalter von 60 Jahren und einer normalen Erektion und einem aktiven Sexualleben vor einer radikalen Prostatektomie getestet. Sechs der Männer litten auch an Inkontinenz. Alle Männer erhielten eine einzige interkavernöse Injektion von isolierten ADRCs und wurden 1, 3, 6 und 12 Monate nach der Injektion mit vier Besuchen in der Ambulanz verfolgt.
Während der Beobachtungszeit traten keine schwerwiegenden Ereignisse auf. Acht Männer berichteten von vorübergehenden Rötungen und Schwellungen an den Injektionsstellen und drei berichteten von Reaktionen im Penisbereich. Acht Männer erlebten reversible kleinere Ereignisse im Zusammenhang mit der Fettabsaugung, wie leichte Bauchbeschwerden und kleinere Bauchhämatome.
Keine Patienten berichteten von Beschwerden bei der einmonatigen Nachuntersuchung. Ihre sexuelle Funktion wurde mit dem International Index of Erectile Function Five und dem Erection Hardness Score bewertet. Acht von 15 Männern in der Kontinentgruppe berichteten, dass ihre erektile Funktion nach 12 Monaten für den Geschlechtsverkehr ausreichte.
Die Gruppe von sechs inkontinenten Männern zeigte keine Verbesserung der erektilen Funktion Wenn Sie dieses Protokoll versuchen, denken Sie daran, dass die Enzyme, die während des Isolationsverfahrens verwendet werden, zwei Stunden vor Beginn des Verfahrens aus dem Gefrierschrank oder Kühlschrank genommen werden müssen. Die Ergebnisse dieser Technik haben den Weg für eine RCT geebnet, bei der die Auswirkungen von Fettstammzellen in größerem Maßstab erforscht werden.
