Bu izolasyon tekniği, yağ kök hücrelerinin radikal prostatektomi sonrası hastaların erektil fonksiyonu yenilemesine yardımcı olup olamayacağını araştırmak için kullanılabilir. Bu yöntem belirli bir hastalık için sınırlı değildir. Yağ kök hücre araştırmalarının tüm alanlarında kullanılabilir.
İzole kök hücreler erektil disfonksiyonu tedavi etmek için kullanılır, ancak izolasyon tekniği genel bir prosedürdür ve kök hücreler kök hücre araştırmasındaki diğer alanlarda yararlı olabilir. Karın ve skrotum derisini% 0.5 klorheksidin ile dezenfekte ederek başlayın. Karın üzerinde liposuction'ın yapılacağı bölgeleri, genellikle sentez ve göbek arasındaki alanı çizmek için cerrahi bir belirteç kullanın.
Karın derisinde 11 numaralı neşter ile altı milimetre genişliğinde iki kesi yapın. Kesileri liposuction'ın yukarı çekilen bölgesinden simetrik ve yanal olarak yerleştirin. Liposuction sırasında infiltrasyon kanülünün insizyonların içine ve dışına kolayca kaydığından emin olmak için insizyonlara biraz kayganlaştırıcı yerleştirin.
Daha sonra ciltteki kesilerden 14 metrelik bir infiltrasyon kanülü ekleyin. Modifiye Klein solüsyonunu, hedeflenen doku şişmiş ve sert veya tümörlü hale gelene kadar cilt yüzeyine paralel olarak işaretlenmiş bölgelere deri altından enjekte edin. Yağ dokusuna bire bir oranda bir miktar modifiye Klein çözeltisi enjekte edin.
Adrenalinin etkilerini en üst düzeye çıkarmak ve hasat edilen yağ dokusundaki kan miktarını azaltmak için 10 dakika bekleyin. 200 ila 300 milimetre yağ dokusu toplamak için standart bir jet infüzyon liposuction yapın. Entegre bir infüzyon tüpü ve nozulu ile içi boş olan künt kanüller kullanın.
Liposuction için kanülü bir emme cihazına takın. Karın üzerindeki kesilerden künt uçlu üç milimetrelik bir şırınga sürün ve lipoaspiratı steril bir ortamda korumak için yağ dokusunu Lipo Collector'da toplayın. Lipoaspirat su fazından ayrılmaya başlayacaktır.
Lipoaspiratı LipoCollector'dan emmek için 50 mililitrelik steril şırıngalar kullanın, şırıngalarda emilen suyun hacmini en aza indirin. Yağ dokusunu steril tutmak için şırıngaların ucuna bir tıkaç vidalayın. Lipoaspiratın su fazından ayrılmasını başlatmak için ucu aşağı doğru olan şırıngaları steril bir plastik torbaya yerleştirin.
Ardından torbayı steril bir kaba koyun. Taşıma sırasında steril ortamı güvence altına almak için kabı steril bir örtü ile örtün. Cilt kesilerini cerrahın tercih ettiği dikiş materyali ile kapatın.
Postoperatif ödemi azaltmak için karın çevresine bir kompresyon giysisi yerleştirin. Bir penis bloğu yapmak için, bupivakaini biri ventral, diğeri dorsal olarak yerleştirilmiş iki bölgeye enjekte edin. Tüm iğneyi deri altı dokusuna sokun, yanal olarak sağa doğru işaret edin ve iğne geri çekilirken anesteziyi enjekte edin.
İğneyi sola doğrultarak enjeksiyonu tekrarlayın. Tüm sarf malzemelerini ve enzimleri steril tek kullanımlık cerrahi havlu ile kaplı masaya aseptik olarak yerleştirin. Cihazı etanol ile silin ve sarf malzemesi setini yükleyin.
Ardından sisteme bir torba laktasyonlu zil bağlayın. Lipoaspiratı eklemeden önce bir dizi yarı otomatik test yapın. Cihaz hazırlanırken, yağın sıvı fazdan ayrılmasını sağlamak için lipoaspiratın 50 mililitrelik bir tüp içinde durmasına izin verin.
Toplam yağ dokusu miktarına dikkat edin ve yüklenen toplam yağ miktarının cihaz kapasitesi aralığında olmasını sağlamak için bunu kullanın. Cihaz tarafından istendiğinde dokuyu yükleyin. Makine fazla sıvıyı boşaltacaktır.
Yağ dokusu miktarını tartın ve emzirilmiş halkalarla yıkayın. Doku yıkanıp boşaltıldığında, 37 ila 39 santigrat derece emzirilmiş halkalarla yeni bir infüzyon torbası bağlayın. Beş mililitre laktasyonlu halkalarda kollajenaz ve proteaz karışımı içeren ticari olarak temin edilebilen enzimi yeniden oluşturur.
Cihazın, yağ dokusu ile teneke kutuya enjekte edilecek enzim miktarını gösterdiğinden emin olun. Enjekte edildikten sonra enzimatik sindirim yaklaşık 20 dakika sürecektir. Doku sindiriminden sonra, içeriğin sarı faz içeren bir üst lipit ve yağ türevi rejeneratif hücreleri veya ADRC'leri içeren alt pembe bir tabakaya ayrıldığını kontrol edin.
Pembe tabakanın sarf malzemesi setinin hücre işleme odasına akmasına izin verin ve lipit tabakasını geride bırakın. ADRC'lerin çoklu santrifüjleme turları sırasında hücre işleme odasında yoğunlaşmasına izin verin. Daha sonra laktasyonlu halkalarda yeniden oluşturulmuş 10 mililitre intrabaz ekleyin.
Enzimatik reaksiyon 10 dakika sürer ve ADRC'ler daha sonra yıkanır. ADRC'lerin izolasyonu tamamlandığında, hücreleri beş mililitre Ringer laktatında yeniden askıya alın ve çözeltiyi beş mililitrelik bir şırıngaya aspire edin. Şırıngaya üç yönlü bir stopcock dişi Luer kilidi takın ve dört mililitre ADRC'yi başka bir beş mililitrelik steril şırıngaya aspire edin.
Son bir mililitre ADRC'yi bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın. Bu aliquot'u, hücre sayısı, hücre canlılığı, yüzey belirteçlerinin akış sitometrisi ile analizi ve ADRC farklılaşma yeteneği gibi ADRC karakterizasyon analizleri için kullanın. Dört mililitre ADRC içeren beş mililitrelik şırıngaya 25 gauge iğne koyun.
Sonra steril bir örtüye koyun. ADRC'lerin bu çözeltisi alıcıya enjekte edilecek ve ortalama olarak 8.4 ila 32.7 milyon hücre içermelidir. ADRC'lerin çözeltisinin, şırıngayı corpora cavernosum'a enjekte edilene kadar hafifçe eğerek homojen kaldığından emin olun.
Penis üzerine bir diyafram örtüsü yerleştirin. Ve penisin kökünde silikon damar halkalı bir turnike. Döngüyü sıkın ve forsepslerle sabitleyin, turnikeyi penisten kan akışını durduracak kadar sıkı hale getirin.
Penis derisini enjeksiyon bölgesinde dezenfekte etmek için iki antiseptik çubuk kullanın. Daha sonra ADRC çözeltisinin bir mililitresini corpora cavernosum'a iki farklı yerde, sağ tarafta doğrudan bir açıyla enjekte edin. Bu adımı sol corpora cavernosum'da tekrarlayın ve toplam dört mililitre hacim enjekte edin.
Bu yöntem, radikal prostatektomi öncesi yaş ortalaması 60 olan ve normal ereksiyon ve aktif cinsel yaşamı olan 21 erkek üzerinde yapılan açık etiketli birinci faz klinik çalışmada test edilmiştir. Erkeklerden altısı da idrar kaçırmadan muzdaripti. Tüm erkeklere izole ADRC'lerin tek bir kavernöz enjeksiyonu yapıldı ve enjeksiyondan 1, 3, 6 ve 12 ay sonra poliklinikte dört ziyaretle takip edildi.
Gözlem sırasında ciddi bir olay meydana gelmedi. Sekiz erkek, enjeksiyon bölgelerinde geçici kızarıklık ve şişlik bildirdi ve üçü penis bölgesinde reaksiyon bildirdi. Sekiz erkek, hafif karın rahatsızlığı ve minör abdominal hematomlar gibi liposuction ile ilgili geri dönüşümlü küçük olaylar yaşadı.
Hiçbir hasta bir aylık takipte rahatsızlık bildirmedi. Cinsel işlevleri Uluslararası Erektil Fonksiyon İndeksi Beş ve Ereksiyon Sertliği Skoru ile değerlendirildi. Kıta grubundaki 15 erkekten sekizi, erektil fonksiyonlarının 12 ayda cinsel ilişki için yeterli olduğunu bildirmiştir.
Altı inkontinans erkeğinden oluşan grup, erektil fonksiyonda herhangi bir iyileşme göstermedi Bu protokolü denerken, izolasyon prosedürü sırasında kullanılan enzimlerin, prosedür başlamadan iki saat önce dondurucudan veya buzdolabından çıkarılması gerektiğini unutmayın. Bu teknikten elde edilen sonuçlar, yağ kök hücrelerinin etkilerinin daha büyük ölçekte araştırıldığı bir RCT'nin yolunu açmıştır.
