Questa tecnica di isolamento può essere utilizzata per esplorare se le cellule staminali adipose possono aiutare i pazienti a rigenerare la funzione erettile dopo la prostatectomia radicale. Questo metodo non è limitato per una malattia specifica. Potrebbe essere utilizzato in tutte le aree della ricerca sulle cellule staminali adipose.
Le cellule staminali isolate sono usate per trattare la disfunzione erettile, ma la tecnica di isolamento è una procedura generale e le cellule staminali possono essere utili in altre aree all'interno della ricerca sulle cellule staminali. Inizia disinfettando la pelle dell'addome e dello scroto con lo 0,5% di clorexidina. Utilizzare un marcatore chirurgico per disegnare le aree sull'addome in cui verrà eseguita la liposuzione, di solito l'area tra la sintesi e l'ombelico.
Fai due incisioni larghe sei millimetri nella pelle dell'addome con un bisturi numero 11. Posizionare le incisioni simmetricamente e lateralmente dall'area disegnata verso l'alto della liposuzione. Posizionare un po 'di lubrificante sulle incisioni per assicurarsi che la cannula di infiltrazione scivoli dentro e fuori dalle incisioni facilmente durante la liposuzione.
Quindi introdurre una cannula di infiltrazione di calibro 14 attraverso le incisioni nella pelle. Iniettare la soluzione di Klein modificata per via sottocutanea nelle aree contrassegnate parallelamente alla superficie cutanea fino a quando il tessuto bersaglio diventa gonfio e sodo o tumescente. Iniettare un volume di soluzione di Klein modificata in un rapporto uno-a-uno al tessuto adiposo.
Attendere 10 minuti per massimizzare gli effetti dell'adrenalina e ridurre la quantità di sangue nel tessuto adiposo raccolto. Eseguire una liposuzione standard per infusione a getto per raccogliere da 200 a 300 millimetri di tessuto adiposo. Utilizzare cannule smussate che sono cave con un tubo di infusione integrato e un ugello.
Collegare la cannula a un dispositivo di aspirazione per la liposuzione. Introdurre una siringa da tre millimetri con una punta smussata attraverso le incisioni sull'addome e raccogliere il tessuto adiposo nel Lipo Collector per preservare il lipoaspirato in un ambiente sterile. Il lipoaspirato inizierà a separarsi dalla fase acquosa.
Utilizzare siringhe sterili da 50 millilitri per aspirare il lipoaspirato dal LipoCollector, riducendo al minimo il volume di acqua aspirata nelle siringhe. Avvitare un tappo sulla punta delle siringhe per mantenere sterile il tessuto adiposo. Posizionare le siringhe con la punta verso il basso in un sacchetto di plastica sterile per iniziare la separazione del lipoaspirato dalla fase acquosa.
Quindi posizionare il sacchetto in un contenitore sterile. Coprire il contenitore con un drappo sterile per fissare l'ambiente sterile durante il trasporto. Chiudere le incisioni cutanee con il materiale di sutura preferito dal chirurgo.
Posizionare un indumento compressivo intorno all'addome per ridurre l'edema postoperatorio. Per fare un blocco del pene, iniettare la bupivacaina in due siti, uno posto ventralmente e l'altro dorsalmente. Introdurre l'intero ago nel tessuto sottocutaneo, puntandolo lateralmente a destra, e iniettare l'anestesia mentre l'ago viene retratto.
Ripetere l'iniezione, puntando l'ago a sinistra. Posizionare tutti i materiali di consumo e gli enzimi in modo asettico sul tavolo coperto da un asciugamano chirurgico monouso sterile. Pulire il dispositivo con etanolo e caricare il set di materiali di consumo.
Quindi collegare un sacchetto di suonerie lattate al sistema. Eseguire la serie di test semiautomatici prima di aggiungere il lipoaspirato. Mentre il dispositivo è in fase di preparazione, lasciare riposare il lipoaspirato in un tubo da 50 millilitri per consentire al grasso di separarsi dalla fase liquida.
Prendere nota della quantità totale di tessuto adiposo e utilizzarla per garantire che la quantità totale di grasso caricato rientri nell'intervallo della capacità del dispositivo. Caricare il tessuto quando richiesto dal dispositivo. La macchina scaricherà il liquido in eccesso.
Pesare la quantità di tessuto adiposo e lavarlo con suonerie lattate. Quando il tessuto è stato lavato e drenato, collegare una nuova sacca per infusione con suonerie lattate da 37 a 39 gradi Celsius. Ricostituire l'enzima disponibile in commercio contenente collagenasi e proteasi in cinque millilitri di suonerie allattate.
Assicurarsi che il dispositivo visualizzi la quantità di enzima da iniettare nel contenitore con il tessuto adiposo. Una volta iniettata la digestione enzimatica durerà circa 20 minuti. Dopo la digestione dei tessuti, controllare che il contenuto sia separato in un lipide superiore contenente fase gialla e uno strato rosa inferiore che contiene le cellule rigenerative di derivazione adiposa o ADRC.
Lasciare che lo strato rosa dreni nella camera di elaborazione cellulare del set di materiali di consumo, lasciando lo strato lipidico dietro. Consentire agli ARDC di concentrarsi nella camera di elaborazione cellulare durante più cicli di centrifugazione. Quindi aggiungere 10 millilitri di intrabase ricostituiti nelle suonerie lattate.
La reazione enzimatica dura 10 minuti e gli ARDRC vengono lavati in seguito. Quando l'isolamento degli ADRC è completato, sospendere nuovamente le cellule in cinque millilitri di lattato di Ringer e aspirare la soluzione in una siringa da cinque millilitri. Montare un lucchetto femmina di stopcock a tre vie Luer lock sulla siringa e aspirare quattro millilitri di DRDC in un'altra siringa sterile da cinque millilitri.
Trasferire l'ultimo millilitro di DRRC in una siringa da un millilitro. Utilizzare questa aliquota per le analisi di caratterizzazione ADRC, come la conta cellulare, la vitalità cellulare, l'analisi dei marcatori di superficie mediante citometria a flusso e la capacità di differenziazione ADRC. Mettere un ago calibro 25 sulla siringa da cinque millilitri contenente i quattro millilitri di DRDC.
Quindi imballarlo in un drappo sterile. Questa soluzione di ADRC verrà iniettata nel ricevente e dovrebbe contenere in media da 8,4 a 32,7 milioni di cellule. Assicurarsi che la soluzione di ADRC rimanga omogenea inclinando delicatamente la siringa fino a quando non viene iniettata nel corpo cavernoso.
Posiziona un drappo di apertura sopra il pene. E un laccio emostatico alla radice del pene con un anello di vaso in silicone. Stringere il cappio e fissarlo con una pinza, rendendo il laccio emostatico abbastanza stretto da fermare il flusso di sangue dal pene.
Utilizzare due tamponi antisettici per disinfettare la pelle del pene nel sito di iniezione. Quindi iniettare un millilitro della soluzione ADRC in un angolo diretto nel corpora cavernoso, sul lato destro in due punti diversi. Ripeti questo passaggio nel cavernoso dei corpora sinistro, iniettando un volume totale di quattro millilitri.
Questo metodo è stato testato in uno studio clinico di fase uno in aperto su 21 uomini con un'età media di 60 anni e un'erezione normale e una vita sessuale attiva prima di una prostatectomia radicale. Sei degli uomini soffrivano anche di incontinenza. Tutti gli uomini hanno ricevuto una singola iniezione inter cavernosa di ADRC isolati e sono stati seguiti con quattro visite in ambulatorio a 1, 3, 6 e 12 mesi dopo l'iniezione.
Non si sono verificati eventi gravi durante il periodo di osservazione. Otto uomini hanno riportato arrossamento transitorio e gonfiore nei siti di iniezione e tre hanno riportato reazioni nell'area del pene. Otto uomini hanno sperimentato eventi minori reversibili legati alla liposuzione, come leggero disagio addominale ed ematomi addominali minori.
Nessun paziente ha riportato disagio al follow-up di un mese. La loro funzione sessuale è stata valutata con l'International Index of Erectile Function Five e l'Erection Hardness Score. Otto uomini su 15 nel gruppo continentale hanno riferito che la loro funzione erettile era sufficiente per il rapporto sessuale a 12 mesi.
Il gruppo di sei uomini incontinenti non ha mostrato alcun miglioramento della funzione erettile Quando si tenta questo protocollo, tenere presente che gli enzimi utilizzati durante la procedura di isolamento devono essere portati fuori dal congelatore o dal frigorifero due ore prima dell'inizio della procedura. I risultati di questa tecnica hanno spianato la strada a un RCT in cui gli effetti delle cellule staminali adipose sono esplorati su una scala più ampia.
