Этот метод изоляции может быть использован для изучения того, могут ли жировые стволовые клетки помочь пациентам регенерировать эректильную функцию после радикальной простатэктомии. Этот метод не ограничивается конкретным заболеванием. Он может быть использован во всех областях исследований жировых стволовых клеток.
Изолированные стволовые клетки используются для лечения эректильной дисфункции, но метод изоляции является общей процедурой, и стволовые клетки могут быть полезны в других областях исследований стволовых клеток. Начните с дезинфекции кожи живота и мошонки 0,5% хлоргексидина. Используйте хирургический маркер, чтобы нарисовать области на животе, где будет выполняться липосакция, обычно область между синтезом и пупком.
Сделайте два шестимиллиметровых разреза в коже живота с помощью скальпеля no 11. Расположите разрезы симметрично и латерально от вытянутой вверх области липосакции. Поместите немного смазки на разрезы, чтобы убедиться, что инфильтрационная канюля легко скользит в и из разрезов во время липосакции.
Затем вводят инфильтрационную канюлю 14 калибра через разрезы в коже. Вводите модифицированный раствор Клейна подкожно в отмеченные участки, параллельные поверхности кожи, до тех пор, пока целевая ткань не станет опухшей и твердой или тумесцирующей. Вводят объем модифицированного раствора Клейна в соотношении один к одному к жировой ткани.
Подождите 10 минут, чтобы максимизировать эффект адреналина и уменьшить количество крови в собранной жировой ткани. Выполните стандартную струйную инфузионную липосакцию для сбора от 200 до 300 миллиметров жировой ткани. Используйте тупые канюли, которые являются полыми со встроенной инфузионной трубкой и насадкой.
Прикрепите канюлю к всасывающему устройству для липосакции. Ввести трехмиллиметровый шприц с тупым кончиком через разрезы на животе и собрать жировую ткань в Lipo Collector для сохранения липоаспирата в стерильной среде. Липоаспират начнет отделяться от водной фазы.
Используйте 50 миллилитровые стерильные шприцы, чтобы всасывать липоаспират из LipoCollector, сводя к минимуму объем воды, всасываемой в шприцы. Прикрутите заглушку к кончику шприцев, чтобы сохранить жировую ткань стерильной. Поместите шприцы кончиком вниз в стерильный полиэтиленовый пакет, чтобы начать отделение липоаспирата от водной фазы.
Затем поместите пакет в стерильный контейнер. Накройте контейнер стерильной драпировкой для защиты стерильной среды во время транспортировки. Закройте разрезы кожи предпочтительным для хирурга шовным материалом.
Поместите компрессионное белье вокруг живота, чтобы уменьшить послеоперационный отек. Чтобы сделать блок полового члена, вводите бупивакаин в два места, один из которых помещается вентрально, а другой дорсально. Ввести всю иглу в подкожную клетчатку, направив ее латерально вправо, и ввести анестезию по мере втягивания иглы.
Повторите инъекцию, направив иглу влево. Поместите все расходные материалы и ферменты на стол, покрытый стерильным одноразовым хирургическим полотенцем. Протрите устройство этанолом и загрузите расходный комплект.
Затем подключите к системе мешок с лактированными звонарями. Выполните серию полуавтоматических тестов перед добавлением липоаспирата. Пока устройство готовится, дайте липоаспирату постоять в 50-миллилитровой трубке, чтобы позволить жиру отделиться от жидкой фазы.
Обратите внимание на общее количество жировой ткани и используйте это для того, чтобы общее количество загруженного жира находилось в диапазоне емкости устройства. Загрузите ткань при появлении соответствующего запроса от устройства. Машина будет сливать лишнюю жидкость.
Взвесьте количество жировой ткани и промыть ее лактированными звонарями. Когда ткань будет вымыта и дренирована, соедините новый инфузионный мешок с лактированными звонарями от 37 до 39 градусов цельсия. Восстановите коммерчески доступный фермент, содержащий смесь коллагеназы и протеазы, в пяти миллилитрах лактированных звонарей.
Убедитесь, что устройство отображает количество фермента для введения в канистру с жировой тканью. После инъекции ферментативное пищеварение будет длиться около 20 минут. После переваривания тканей убедитесь, что содержимое разделено на верхний липид, содержащий желтую фазу, и нижний розовый слой, который содержит регенеративные клетки, полученные из жировой ткани, или ADRC.
Дайте розовому слою стекать в камеру обработки клеток расходного набора, оставляя липидный слой позади. Позвольте ADDC концентрироваться в камере обработки клеток во время нескольких раундов центрифугирования. Затем добавляют 10 миллилитров внутрибазовых, восстановленных в лактированных звонарях.
Ферментативная реакция длится в течение 10 минут, после чего АДПК промывают. Когда выделение АДПК завершено, повторно приостановите клетки в пяти миллилитрах лактата Рингера и аспирируйте раствор в пятимиллилитровой шприц. Установите на шприц трехходовой запорный кран женского замка Luer и аспирируйте четыре миллилитра ADRCs в другой пятимиллилитровой стерильный шприц.
Переведите последний миллилитр АДГ в шприц на один миллилитр. Используйте эту аликвоту для анализа характеристик ADRC, таких как количество клеток, жизнеспособность клеток, анализ поверхностных маркеров с помощью проточной цитометрии и способность дифференцировать ADRC. Наденьте иглу 25 калибра на шприц с пятью миллилитрами, содержащими четыре миллилитра АДПК.
Затем упакуйте его в стерильную драпировку. Этот раствор АДПК будет вводиться реципиенту и должен в среднем содержать от 8,4 до 32,7 миллиона клеток. Убедитесь, что раствор АДПК остается однородным, осторожно наклоняя шприц до тех пор, пока он не будет введен в кавернозные тела.
Поместите драпировку отверстия над пенисом. И жгут на корень пениса с силиконовой сосудистой петлей. Затяните петлю и закрепите ее щипцами, сделав жгут достаточно плотным, чтобы остановить приток крови от пениса.
Используйте два антисептических тампона для дезинфекции кожи полового члена в месте инъекции. Затем вводят один миллилитр раствора ADRC под прямым углом в пещеристые тела, с правой стороны в двух разных местах. Повторите этот шаг в левом кавернозном теле, введя общий объем в четыре миллилитра.
Этот метод был протестирован в открытом клиническом испытании первой фазы на 21 мужчине со средним возрастом 60 лет и нормальной эрекцией и активной сексуальной жизнью до радикальной простатэктомии. Шестеро мужчин также страдали от недержания мочи. Все мужчины получили одну межквавернозную инъекцию изолированных АДПК и сопровождались четырьмя посещениями в амбулаторной клинике через 1, 3, 6 и 12 месяцев после инъекции.
За время наблюдения не произошло никаких серьезных событий. Восемь мужчин сообщили о преходящем покраснении и отеке в местах инъекций, а трое сообщили о реакции в области полового члена. Восемь мужчин испытали обратимые незначительные события, связанные с липосакцией, такие как легкий дискомфорт в животе и незначительные абдоминальные гематомы.
Ни один пациент не сообщил о дискомфорте в течение одного месяца наблюдения. Их сексуальная функция оценивалась с помощью Международного индекса эректильной функции five и показателя твердости эрекции. Восемь из 15 мужчин в группе континента сообщили, что их эректильная функция была достаточной для полового акта в 12 месяцев.
Группа из шести мужчин с недержанием не показала какого-либо улучшения эректильной функции При попытке этого протокола имейте в виду, что ферменты, которые используются во время процедуры изоляции, должны быть извлечены из морозильной камеры или холодильника за два часа до начала процедуры. Результаты этого метода проложили путь для РКИ, где эффекты жировых стволовых клеток исследуются в большем масштабе.
