이 분리 기술은 지방 줄기 세포가 급진적 인 전립선 절제술 후 환자가 발기 기능을 재생하는 데 도움이 될 수 있는지 여부를 탐구하는 데 사용될 수 있습니다. 이 방법은 특정 질병에 대해 제한되지 않는다. 그것은 지방 줄기 세포 연구의 모든 영역에서 사용될 수 있습니다.
분리 된 줄기 세포는 발기 부전 치료에 사용되지만 분리 기술은 일반적인 절차이며 줄기 세포는 줄기 세포 연구 내의 다른 분야에서 유용 할 수 있습니다. 복부와 음낭의 피부를 0.5 % 클로르헥시딘으로 소독하여 시작하십시오. 외과 마커를 사용하여 지방 흡입이 수행 될 복부의 영역, 일반적으로 합성과 탯줄 사이의 영역을 작성하십시오.
숫자 11 메스로 복부의 피부에 두 개의 여섯 밀리미터 너비의 절개를 만드십시오. 절개를 지방 흡입술의 위쪽으로 그려진 영역에서 대칭 및 측면으로 놓습니다. 절개에 약간의 윤활유를 올려 지방 흡입 중에 침윤 캐뉼라가 절개 안팎으로 쉽게 미끄러 지도록하십시오.
그런 다음 피부의 절개를 통해 크기 14 게이지 침윤 캐뉼라를 도입하십시오. 변형된 Klein 용액을 표적 조직이 부어 오르고 단단해지거나 종양이 될 때까지 피부 표면과 평행한 표시된 부위에 피하 주사하십시오. 지방 조직에 일대일 비율로 변형된 Klein 용액의 부피를 주입한다.
아드레날린의 효과를 극대화하고 수확 된 지방 조직에서 혈액의 양을 줄이기 위해 10 분 동안 기다리십시오. 표준 제트 주입 지방 흡입을 수행하여 200 ~ 300 밀리미터의 지방 조직을 수확하십시오. 통합 주입 튜브와 노즐이있는 중공 인 무딘 캐뉼라를 사용하십시오.
캐뉼라를 지방 흡입을위한 흡입 장치에 부착하십시오. 복부의 절개를 통해 무딘 팁이있는 세 밀리미터 주사기를 도입하고 리포 컬렉터에서 지방 조직을 수집하여 멸균 된 환경에서 지방 흡인물을 보존하십시오. 지방 흡인물은 물 단계에서 분리되기 시작할 것입니다.
50 밀리리터 멸균 주사기를 사용하여 LipoCollector에서 지방 흡인물을 빨아 들여 주사기에서 빨아들이는 물의 양을 최소화하십시오. 주사기 끝에 플러그를 조여 지방 조직을 멸균 상태로 유지하십시오. 팁이 있는 주사기를 멸균 비닐 봉지에 아래쪽으로 두어 수분 단계에서 지방 흡인물을 분리하기 시작합니다.
그런 다음 가방을 멸균 용기에 넣으십시오. 운송 중 멸균 환경을 확보하기 위해 멸균 드레이프로 컨테이너를 덮으십시오. 외과 의사가 선호하는 봉합사로 피부 절개를 닫으십시오.
수술 후 부종을 줄이기 위해 복부 주위에 압축 의복을 두십시오. 음경 블록을 만들려면 bupivacaine을 두 부위에 주사하십시오.이 부위는 심실로, 다른 하나는 등쪽에 놓습니다. 전체 바늘을 피하 조직에 넣고 오른쪽으로 옆으로 향하게하고 바늘이 수축 될 때 마취를 주입하십시오.
주사를 반복하고 바늘을 왼쪽으로 향하게하십시오. 모든 소모품과 효소를 멸균 일회용 수술 타월로 덮인 테이블 위에 무균 적으로 놓습니다. 에탄올로 장치를 닦아내고 소모품 세트를로드하십시오.
그런 다음 수유중인 링거 봉지를 시스템에 연결하십시오. 지방 흡인물을 추가하기 전에 일련의 반자동 테스트를 수행하십시오. 장치가 준비되는 동안 지방 흡인물을 50 밀리리터 튜브에 넣어 지방이 액상에서 분리 될 수 있도록하십시오.
지방 조직의 총량을 기록하고 이것을 사용하여로드 된 지방의 총량이 장치 용량의 범위에 있는지 확인하십시오. 장치에서 메시지를 표시할 때 조직을 로드합니다. 기계는 과도한 유체를 배출합니다.
지방 조직의 양을 계량하고 수유중인 링거로 씻으십시오. 조직을 씻고 배수하면 새로운 주입 백을 섭씨 37 ~ 39 도의 젖 분비 링거와 연결하십시오. 콜라게나제 및 프로테아제 블렌드를 다섯 밀리리터의 젖산 고리에 함유하는 시판되는 효소를 재구성한다.
장치가 지방 조직과 함께 용기에 주입 할 효소의 양을 표시하는지 확인하십시오. 일단 주입되면 효소 소화는 약 20 분 동안 지속됩니다. 조직 소화 후, 함량이 황색 상을 함유하는 상부 지질과 지방 유래 재생 세포 또는 ADRCs를 포함하는 하부 분홍색 층으로 분리되는지 확인한다.
분홍색 층이 소모품 세트의 세포 처리 챔버로 배수되도록하여 지질 층을 남겨 둡니다. ADRCs가 원심분리의 다중 라운드 동안 세포 처리 챔버에서 농축되도록 허용한다. 그런 다음 수유중인 링거에 재구성 된 10 밀리리터의 인트라베이스를 추가하십시오.
효소 반응은 10 분 동안 지속되며 ADRC는 나중에 세척됩니다. ADRCs의 분리가 완료되면, 링거 젖산의 다섯 밀리리터에 세포를 재현탁하고 용액을 다섯 밀리리터 주사기로 흡인하십시오. 주사기에 세 방향 스톱콕 여성 루어 잠금 장치를 장착하고 네 밀리리터의 ADRC를 다른 다섯 밀리리터 멸균 주사기로 흡인합니다.
ADRC의 마지막 한 밀리리터를 하나의 밀리리터 주사기로 옮깁니다. 이 분취량을 세포 수, 세포 생존력, 유세포 분석기에 의한 표면 마커 분석 및 ADRC 분화 능력과 같은 ADRC 특성화 분석에 사용하십시오. 네 밀리리터의 ADRC가 들어있는 5 밀리리터 주사기에 25 게이지 바늘을 놓습니다.
그런 다음 멸균 커튼에 포장하십시오. ADRCs의이 용액은 수용자에게 주입 될 것이며 평균적으로 8.4 ~ 32.7 백만 개의 세포를 포함해야합니다. ADRC의 용액이 코포라 캐버노섬에 주입 될 때까지 주사기를 부드럽게 기울여 균질하게 유지되는지 확인하십시오.
조리개 드레이프를 음경 위에 놓습니다. 및 실리콘 용기 루프가있는 음경의 뿌리에 지혈대를 포함한다. 루프를 조이고 포셉으로 고정시켜 지혈대를 음경에서 혈류를 막을 수있을만큼 단단히 고정시킵니다.
두 개의 소독 면봉을 사용하여 주사 부위의 음경 피부를 소독하십시오. 그런 다음 ADRC 용액 한 밀리리터를 두 개의 다른 장소의 오른쪽에있는 코포라 캐버노섬에 직접 각도로 주입하십시오. 왼쪽 코포라 캐버노섬에서이 단계를 반복하여 총 네 밀리리터의 부피를 주입하십시오.
이 방법은 급진적 인 전립선 절제술 전에 평균 연령이 60 세이고 정상적인 발기 및 활동적인 성생활을 가진 21 명의 남성에 대한 공개 라벨 단계 1 임상 시험에서 테스트되었습니다. 여섯 명의 남자들도 요실금으로 고통 받았다. 모든 남성은 격리 된 ADRCs의 단일 동굴 간 주사를 받았으며 주사 후 1, 3, 6 및 12 개월에 외래 진료소에서 4 회 방문했습니다.
관찰 기간 동안 심각한 사건은 발생하지 않았습니다. 여덟 명의 남성이 주사 부위에서 일시적인 발적과 붓기를보고했으며 세 명은 음경 부위에서 반응을보고했습니다. 여덟 명의 남성은 가벼운 복부 불편 함과 경미한 복부 혈종과 같은 지방 흡입과 관련된 가역적 인 사소한 사건을 경험했습니다.
한 달 동안의 후속 조치에서 불편 함을보고한 환자는 없습니다. 그들의 성적 기능은 발기 기능 다섯 국제 지수와 발기 경도 점수로 평가되었습니다. 대륙 그룹의 15 명 중 여덟 명은 발기 기능이 12 개월에 성교하기에 충분하다고보고했습니다.
여섯 명의 대륙 남성의 그룹은이 프로토콜을 시도 할 때 발기 기능의 개선을 보이지 않았으며, 격리 과정에서 사용되는 효소는 절차가 시작되기 두 시간 전에 냉동실이나 냉장고에서 꺼내야한다는 것을 명심하십시오. 이 기술의 결과는 지방 줄기 세포의 효과가 더 큰 규모로 탐구되는 RCT의 길을 열었습니다.
