この単離技術は、脂肪幹細胞が根治的前立腺切除術後の患者の勃起機能の再生を助けることができるかどうかを調べるために使用することができる。この方法は、特定の疾患について限定されない。これは、脂肪幹細胞研究のすべての分野で使用することができます。
単離された幹細胞は勃起不全を治療するために使用されるが、単離技術は一般的な手順であり、幹細胞は幹細胞研究内の他の分野で有用であり得る。腹部と陰嚢の皮膚を0.5%クロルヘキシジンで消毒することから始めます。外科的マーカーを使用して、脂肪吸引が行われる腹部上の領域、通常は合成と臍の間の領域を描画する。
11個のメスで腹部の皮膚に幅6ミリメートルの切開を2回行う。切開部を脂肪吸引の上の描画領域から対称的および横方向に配置する。浸潤カニューレが脂肪吸引中に切開部に容易に出入りするように、切開部に少しの潤滑剤を置く。
次に、皮膚の切開部を通してサイズ14ゲージの浸潤カニューレを導入する。修飾クライン溶液を皮下に注射し、皮膚表面に平行な顕著な領域に、標的組織が腫脹してしっかりまたは腫脹状態になるまで注入する。脂肪組織に1対1の比率で修飾クライン溶液の体積を注入する。
アドレナリンの効果を最大化し、採取した脂肪組織中の血液の量を減らすために10分間待つ。標準的なジェット注入脂肪吸引を行い、200〜300ミリメートルの脂肪組織を採取する。統合された注入チューブとノズルで中空の鈍いカニューレを使用してください。
カニューレを脂肪吸引用の吸引装置に取り付けます。腹部の切開部を通して鈍い先端を持つ3ミリメートルの注射器を導入し、脂肪組織をリポコレクターに集めて脂肪吸引液を滅菌環境で保存します。脂肪吸引液は水相から分離し始めます。
50ミリリットルの滅菌シリンジを使用してLipoCollectorからリポ吸引液を吸い上げ、シリンジに吸い込まれる水の量を最小限に抑えます。シリンジの先端にプラグをねじ込み、脂肪組織を無菌に保ちます。滅菌ビニール袋に先端が下向きの注射器を置き、水相からの脂肪吸引液の分離を開始する。
その後、袋を滅菌容器に入れます。輸送中の無菌環境を確保するために、容器を滅菌ドレープで覆います。外科医の好む縫合材料で皮膚切開部を閉じる。
術後の浮腫を軽減するために腹部の周りに圧縮衣服を置きます。陰茎ブロックを作るには、ブピバカインを2つの部位に注射し、1つは腹側に置き、もう1つは背側に置きます。皮下組織に針全体を導入し、横方向に右を指し示し、針が引っ込められるように麻酔を注入する。
注射を繰り返し、針を左に向けます。すべての消耗品と酵素を無菌の使い捨て手術用タオルで覆われたテーブルの上に無菌的に置きます。エタノールでデバイスを拭き取り、消耗品セットをロードします。
次に、授乳中のリンガーの袋をシステムに接続します。脂肪吸引液を添加する前に、一連の半自動試験を行う。装置が調製されている間、脂肪を50ミリリットルのチューブに入れて脂肪を液相から分離させる。
脂肪組織の総量に注意し、これを使用して、負荷された脂肪の総量がデバイスの容量の範囲内にあることを確認します。デバイスからプロンプトが表示されたら、ティッシュをロードします。機械は余分な液体を排出します。
脂肪組織の量の重量を量り、授乳リンガーで洗ってください。組織を洗浄して排水したら、新しい輸液バッグを摂氏37〜39度の授乳リンガーで接続します。コラゲナーゼおよびプロテアーゼを含む市販の酵素ブレンドを5ミリリットルの乳酸リンガーで再構成する。
脂肪組織を含むキャニスターに注入する酵素の量が装置に表示されていることを確認します。一度注射すると、酵素消化は約20分続きます。組織消化後、含有量が黄色相を含む上部脂質と脂肪由来再生細胞(ADRCs)を含む下部ピンク色層に分離されていることを確認する。
ピンク色の層を消耗品セットの細胞処理チャンバに排出し、脂質層を残します。ADRC が複数回の遠心分離中に細胞処理チャンバ内で濃縮できるようにします。次いで、乳酸リンガーで再構成された10ミリリットルの塩基内を加える。
酵素反応は10分間持続し、その後ADRCを洗浄する。ADRCの単離が完了したら、細胞を5ミリリットルのリンゲル乳酸塩に再懸濁し、溶液を5ミリリットルのシリンジに吸引する。シリンジに3ウェイ活栓メスルアーロックを取り付け、4ミリリットルのADRCを別の5ミリリットルの滅菌シリンジに吸引します。
最後の1ミリリットルのADRCを1ミリリットルのシリンジに移します。このアリコートは、細胞数、細胞生存率、フローサイトメトリーによる表面マーカーの分析、ADRC分化能などのADRC特性評価分析に使用します。4ミリリットルのADRCが入った5ミリリットルのシリンジに25ゲージの針を置きます。
その後、滅菌ドレープに詰めます。ADRCのこの溶液はレシピエントに注入され、平均して840万〜3270万個の細胞を含むべきである。ADRCの溶液がコーパスキャベルノサムに注入されるまでシリンジを静かに傾けることによって、ADRCの溶液が均質なままであることを確認してください。
ペニスの上に絞りドレープを置きます。そして、シリコン容器ループを備えた陰茎の根元にある止血帯。ループを締め付け、鉗子で固定し、止血帯を陰茎からの血流を止めるのに十分なほどタイトにします。
注射部位の陰茎の皮膚を消毒するために2つの消毒綿棒を使用してください。次いで、1ミリリットルのADRC溶液を、右側の2つの異なる場所で、真珠洞に直角に注入する。左のコーパスキャベルノサムでこのステップを繰り返し、4ミリリットルの総容量を注入する。
この方法は、平均年齢が60歳で、根治的前立腺切除術の前に正常な勃起および活発な性生活を有する21人の男性に対するオープンラベル第1相臨床試験で試験された。男性のうち6人も失禁に苦しんでいました。すべての男性は、単離されたADRCの1回の海綿間注射を受け、注射後1、3、6および12ヶ月で外来診療所で4回の訪問を受けた。
観測中に重大な事象は発生しなかった。8人の男性が注射部位で一過性の発赤と腫れを報告し、3人が陰茎領域での反応を報告した。8人の男性は、軽い腹部不快感や軽度の腹部血腫など、脂肪吸引に関連する可逆的な軽微な事象を経験した。
1ヶ月のフォローアップで不快感を報告した患者はいなかった。彼らの性機能は、勃起機能5の国際指数と勃起硬度スコアで評価されました。大陸グループの15人の男性のうち8人は、彼らの勃起機能は12ヶ月で性交に十分であると報告しました。
6人の失禁男性のグループは勃起機能の改善を示さなかったこのプロトコルを試みるとき、単離の手順中に使用される酵素は、手順が開始される2時間前に冷凍庫または冷蔵庫から取り出さなければならないことに留意してください。この技術の結果は、脂肪幹細胞の効果がより大きなスケールで探求されるRCTへの道を開いた。
