Dieses Protokoll ist in der Lage, robuste thorakale Aortenaneurysmen von konstanter Größe und Position bei Mäusen zu produzieren und dient als Leitfaden für den sicheren Zugang zur murinen Brust. Dieses Protokoll ist eine einfache, konsistente Methode zur Herstellung von thorakalen Aortenaneurysmen bei Mäusen über einen angemessenen Zeitraum im Vergleich zu anderen Modellen. Nach der Bestätigung einer angemessenen Sedierung in einem acht bis zehn Wochen alten männlichen c57 schwarz sechs Maus, legen Sie die Maus in die rechte seitliche Dekubitus-Position und band den rechten Arm rostral, so dass die Vorderpfote in der Linie mit der Nase ist.
Ziehen Sie den Schwanz kauarisch, um eine Spannungslinie zwischen dem rechten Arm und dem Schwanz zu schaffen, wodurch eine Verlängerung der Wirbelsäule entsteht, und kleben Sie das linke Bein in seiner natürlichen Position. Dann band den linken Arm entlüftung über gerollte Gaze. Bevor Sie mit dem Eingriff beginnen, verwenden Sie Clipper, um die linke Flanke von der linken Schulter zum linken Bauch zu rasieren.
Verwenden Sie einen Baumwoll-Applikator, um zuerst Betadyne-Lösung zu bürsten, dann 70% Ethanol über der chirurgischen Stelle. Wenn die Haut trocken ist, legen Sie einen sterilen Vorhang über das Tier. Machen Sie einen zwei Zentimeter langen seitlichen Schnitt in der Mitte des Hemothorax und verwenden Sie handgehaltene Elektrokauterie, um die Muskelschichten zu teilen, bis die Rippen sichtbar sind.
Unter 10 bis 15-facher Vergrößerung einen Zwei-Millimeter-Abschnitt zwischen den Rippen direkt kauterisieren und einen mit einer samenbenetzten, feinen Baumwoll-Applikator im Rippenraum verwenden, um durch den kauterisierten Teil in den Pleuraraum zu sezieren. Legen Sie einen mit Einer Linie benetzten, drei mal zwei Millimeter großen Schwamm in den Thorax, um die Lunge zu kollabieren. Dann verwenden Sie eine Schere, um die Thorakotomie zu erweitern, bis das Zwerchfell ventral sichtbar ist und der Schnitt mehrere Millimeter von den Paraspinusmuskeln dorsal entfernt ist.
Um die Aorta freizulegen, legen Sie Rippenretraktoren in den Thorakotomieschnitt und entfernen Sie vorsichtig den Schwamm von der Oberfläche der Lunge. Bedecken Sie die Lunge mit einem salinebewetteten, sechs mal vier Millimeter großen Schwamm mit den Enden, die rostral und kauarisch zeigen, und legen Sie einen breiten, flachen Lungenretraktor auf den Schwamm. Schieben Sie dann den Retraktor beweglich, bis die absteigende Thoraxaorta freigelegt ist, und verwenden Sie die SiebenZangen, um einen etwa fünf Millimeter großen Abschnitt aus Bindegewebe und Fett aus der Aorta zu sezieren.
Um die Elastase anzuwenden, verwenden Sie zunächst eine Mikropipette, um einen 0,5 mal ein Millimeter großen Schwamm mit 12 Mikroliter neiner Pankrease zu sättigen und den Schwamm auf die exponierte Oberfläche der Aorta zu legen. Verwenden Sie nach drei bis fünf Minuten die Zange Nummer sieben, um den Elastaseschwamm zu entfernen und den Lungenretraktor zu entfernen. Bewässern Sie die Brusthöhle mit etwa einem halben Milliliter steriler Saline.
Entfernen Sie den Lungenschwamm und verwenden Sie ein gerolltes zwei mal zwei Zoll großes Stück Gaze, um die verbleibende Strandenbewässerung zu absorbieren. Entfernen Sie die Rippen-Retraktoren und setzen Sie die Rippen mit drei unterbrochenen sechs-oh nicht-resorbierbaren Nähten ab, wobei Sie einen lockeren Knoten in jeder Naht binden, ohne die Nähte nach unten zu binden. Nach dem Wiederaufblasen der Lunge, binden Sie die Nähte und nähern Sie die Muskelschichten mit einer laufenden fünf oh regeflechte faste Naht.
Schließen Sie die Haut mit sieben bis zehn unterbrochenen fünf-oh nicht resorbierbaren Nähten. Überwachen Sie dann das Tier bis zur vollständigen Rektusität. Verwenden Sie am entsprechenden experimentellen Endpunkt eine Schere, um die Haut von der linken Flanke zum zentralen Bauch zu schneiden und dabei darauf zu achten, nicht in das Peritoneum einzutreten.
Incise die Haut von der dorsalen linken Flanke rostral auf die linke Schulter und machen einen Schnitt in einem 90-Grad-Winkel durch die Achsel zum Brustbein. Mit Kauterie, sezieren Sie die Hautklappe in Richtung der ventralen Aspekt der Maus, um die linke Hemothorax aussetzen und verwenden Sie eine Schere, um den Bauch entlang der linken Kostenrand von der ventralen in dorsale Richtung zu betreten, um die Unterseite der linken Membran zu belichten. Wenn sich die seitlichste Kante des Zwerchfells nicht öffnet, schneiden Sie das Zwerchfell an seiner seitlichsten Kante.
Platzieren Sie die Spitze der Kautery in diesem Loch, kauterisieren Sie das Zwerchfell vom Kostenrand bis zum xiphoiden Prozess und verwenden Sie einen feuchten, feingekippten Applikator mit Baumwolle, um die Lunge sanft von jeglichen Verklebungen an der Brustwand zu befreien. Während Sie sicherstellen, dass die Lunge aus dem Weg ist, verwenden Sie Elektrokauterie, um die Rippen und die Brustwand vom Costalrand bis zur ersten Rippe zu durchschneiden, dorsal bis zur mittleren Achsellinie, aber mindestens zwei Millimeter von der Aorta entfernt. Schneiden Sie entlang der oberen Rand der ersten Rippe und reflektieren Sie den Rippenkäfig ventral, um den Hemothorax auszusetzen.
Retraktoren auf die Lunge legen und medial ziehen. Legen Sie einen Retraktor oder eine mit Einer Linie benetzte Gaze auf das Zwerchfell und zeichnen Sie kauarisch, um so viel wie möglich von der Aorta freizulegen. Verwenden Sie einen trockenen, mit Baumwolle gekippten Applikator, um jegliche Adhäsionen aus dem Aortenaneurysmus und einem nicht betroffenen distalen Segment zu entfernen und die Videomikrometrie zu verwenden, um den Durchmesser des nicht betroffenen Kontrollsegments und den breitesten Teil des mit Elastase behandelten Aneurysmus zu messen.
Um die Aorta zu ernten, greifen Sie das Gefäß mit Schadenszangen nur distal zum behandelten Segment und verwenden Sie eine Schere, um distal zu den Zangen zu schneiden. Sezieren Sie die Aorta von der Wirbelsäule ab und schneiden Sie das Gefäß proximal in das behandelte Segment, um das aneurysmale Gewebe zu entfernen. Dann, mit einer Tuberkulinspritze und Nadel, waschen Sie das Aortenlumen mit Saline und verarbeiten Sie die Probe gemäß der geplanten nachgelagerten experimentellen Analyse.
Die entwickelten Thoraxaneurysmen als Fusiform in Form und kommen nur im behandelten Teil auf der Aorta vor. In dieser repräsentativen Videomikrometriemessung wurde die Aortendilatation bei der Gewebeernte auf 130 % bestimmt. Während type elastase behandelte Mäuse an den Tagen drei, sieben, 14 und 21 eine signifikante Zunahme der Aortendilatation aufweisen, mit der maximalen Dilatation, die an Tag 14 beobachtet wurde, im Vergleich zur Kontrolle wildartiger Mäuse.
Histologische Analysen zeigen, dass Wilde-Typ-Aneurysmen Elastinfasern haben, die dünn und fragmentiert sind. Es gibt auch weniger glatte Muskelzellfärbung mit einer Zunahme der Makrophagen und Interlukin Ein-Beta-Expression. Die murine Lunge ist extrem empfindlich, und Verletzungen sind in der Regel tödlich.
Achten Sie beim ersten Eintrag in die Brust auf höchste Vorsicht und manipulieren Sie die Lunge nur mit mit Einer Linie benetzten Schwämmen. Dieses Modell hat dazu beigetragen, die Rolle von Interlukin One-Beta und Interlukin six bei der Pathogenese absteigender thorakaler Aortenaneurysmen aufzuklären und wie ihre Blockade das nicht-chirurgische Management dieser Aneurysmen erleichtern könnte.
