Diese Studie beschreibt ein reproduzierbares Großtiermodell der renalen Ischämie-Reperfusionsverletzung, mit dem die Pathophysiologie akuter Nierenschäden untersucht und mögliche therapeutische Modalitäten untersucht werden können. Diese Methode ist in hohem Maße reproduzierbar und minimiert die Auswirkungen der Entzündungsreaktion, indem sie die Menge an Beleidigung des Körpers im Vergleich zu einem offenen Ansatz begrenzt. Dieses präklinische Modell ahmt klinische Szenarien nach, wie Nierentransplantation, Nierenhyperfusion nach kardiogenem Schock, Transkatheterverfahren, die zu Nierenischämie führen, und kardiovaskuläre Verfahren mit verlängerten Kardio-Kreislauf-Stillstandszeiten.
Desinfizieren Sie zunächst den rechten seitlichen Bereich des Halses, indem Sie dreimal Betadin und dann 95% Ethanol auftragen. Drapieren Sie das Tier auf sterile Weise. Führen Sie einen Schnitt für die Katheterisierung der rechten Halsschlagader und der rechten Jugularvene durch.
Ziehen Sie den Musculus sternocleidomastoidis seitlich zurück und sezieren Sie ihn bis zur rechten Halsschlagader und zur rechten Vena jugularis. Führen Sie eine 5F-Angiographiescheide sowohl in die Arterie als auch in die Vene ein. Sichern Sie es mit einer Seidennäht von 2-0.
Führen Sie eine 5F-Angiographiescheide mit der Seldinger-Technik in die linke Oberschenkelarterie ein, indem Sie die Arterie mit einer Hohlnadel punktieren. Führen Sie einen Soft-Tip-Führungsdraht durch das Lumen ein und dringen Sie ihn in die Oberschenkelarterie vor. Halten Sie den Führungsdraht mit einer Hand fest, während Sie die Nadel entfernen.
Führen Sie die Angiographiescheide über den Führungsdraht in die Oberschenkelarterie und ziehen Sie den Führungsdraht bei Bedarf mit Ultraschallführung zurück. Intravenös 200 IE pro Kilogramm Natriumheparin verabreichen, um eine systemische Antikoagulation zu erreichen. Um eine Angiographie durchzuführen, injizieren Sie ein jodiertes Kontrastmittel unter Fluoroskopie, um die Nierenarterien zu identifizieren.
Identifizieren Sie die Nierenarterien und führen Sie den Führungsdraht im Führungskatheter manuell vor. Positionieren Sie den 5F JL4-Führungskatheter in der linken Nierenarterie durch die rechte Halsschlagader. Positionieren Sie den zweiten 5F JL4-Leitkatheter in der rechten Nierenarterie durch die linke Oberschenkelarterie.
Verwenden Sie die Führungsdrähte, um eine perkutane transluminale 5F-Angioplastie oder einen PTA-Dilatationskatheter in jeder Nierenarterie zu leiten. Positionieren Sie jeden Ballonkatheter an Ort und Stelle und verbinden Sie eine Druckleitung mit jedem Katheter. Überprüfen Sie das Vorhandensein arterier Pulswellenformen im Druckmonitor, um die korrekte Positionierung des Katheters sicherzustellen.
Blasen Sie jeden Ballon auf und streben Sie einen Druck von etwa 2,5 atmosphärischen Drücken im Ballon an. Um die Beendigung des Blutflusses zu den Nieren zu bestätigen, beobachten Sie die Abflachung der Pulswellenform an der Spitze des Ballonkatheters. Jodiertes Kontrastmittel in eine 1:1-Verdünnung mit Kochsalzlösung injizieren und auf Trübung der Nierengefäße prüfen.
Nach 60 Minuten Okklusion vorsichtig entleeren und entfernen Sie die Ballonkatheter aus den Nierenarterien. Führen Sie eine Angiographie mit einem 1:1 verdünnten Kontrastmittel durch, um die Durchgängigkeit der Nierenarterie und die Etablierung einer Nierenreprofusion zu bestätigen. Entfernen Sie die 5F-Angiographiescheide von der linken Oberschenkelarterie.
Wenden Sie aus Druck an der Stelle der Katheterisierung für 30 Minuten an. Kehren Sie die Wirkung von Heparin durch die Verabreichung von drei Milligramm pro Kilogramm Protamin bis zur Normalisierung der aktiven Gerinnungszeit um. Um während der postoperativen Phase Urin zu entnehmen, befestigen Sie einen Schlauch mit einer Seidennaht von 2-0 mit einem unterbrochenen Stich auf der Haut am Foley-Katheter.
Für die Blutentnahme lassen Sie die Angiographiescheiden in der rechten Halsschlagader und der rechten Jugularvene an Ort und Stelle und sichern Sie sie mit einer Seidennähte 2-0. Verabreichen Sie drei Milligramm pro Kilogramm Bupivacain an der Schnittstelle, um schmerzen zu minimieren. Hydratisieren Sie das Tier weiterhin mit 0,9 Natriumchlorid für insgesamt zwei Stunden nach dem Ende der Ischämie.
Schließen Sie den Halsschnitt mit einer Seidennaht von 2-0 mit einem unterbrochenen Stich in zwei Schichten. Legen Sie ein Fentanylpflaster von 25 bis 50 Mikrogramm pro Stunde auf den Rücken des Tieres, um postoperative Schmerzen zu minimieren, und überwachen Sie das Tier bei mechanischer Beatmung, bis es erwacht. Sammeln Sie die endgültigen Blut- und Urinproben und berechnen Sie die Urinproduktion.
Führen Sie einen Laparotomie-Schnitt in der Mittellinie mit einer Klinge der Größe 10 vom Xiphoid bis zum mittleren Becken durch. Verwenden Sie einen geraden seitlichen Retraktor, um die Bauchhaut zurückzuziehen. Sezieren Sie die seitlichen Peritonealansätze der Bauchdecke, um das rechte und linke Retroperitoneum freizulegen.
Identifizieren und sezieren Sie unverblümt sowohl Nierenarterien als auch Venen. Ligatieren Sie sowohl Nierenarterien als auch Venen mit einer 2-0-Seidennähtung und führen Sie bilaterale Nephrektomien durch, um Ganzgewebeproben für histologische und metabolische Analysen zu sammeln. Die Nierenfunktion wurde durch Bestimmung der Urinproduktion, eGFR, Plasmakreatin und BUN beurteilt.
Nach 60 Minuten bilateralem Nierenarterienverschluss war die Urinproduktion signifikant vermindert und blieb sechs und 24 Stunden nach der Reperfusion so. In ähnlicher Weise wurde eine signifikante Abnahme der eGFR beobachtet, die im Vergleich zum Ende der Ischämie nach zwei Stunden, sechs Stunden und 24 Stunden Reperfusion vom Ausgangswert abfiel. Plasmakreatinin war nach zwei, sechs und 24 Stunden Reperfusion im Vergleich zum Ausgangswert signifikant erhöht.
BUN war im Vergleich zum Ausgangswert nach sechs und 24 Stunden Reperfusion erhöht. Offensichtliche nekrotische und hämorrhagische Bereiche waren am Ende der 60 Minuten der bilateralen Nierenischämie und der 24 Stunden der Reperfusion in beiden Nieren ungleichmäßig verteilt. Massons Trichromfärbung zeigte eine konfluente koagulative Nekrose, die sich an den proximalen Tubuli der Nierenrinde befand.
Kunststoffeingelassene Abschnitte wurden ebenfalls bewertet. Alle Trichrom-Dias von Masson wurden auf Zellnekrose, Verlust der Bürstengrenze, Gussbildung und Tubulusdilatation untersucht. Akute tubuläre Nekrose oder ATN-Scoring zeigte eine signifikante Verletzung der Nierenrinde und des Medulla.
Überprüfen Sie bei der Durchführung dieses Protokolls die Positionierung der Ballonstellen in der Nähe von RC und verschließen Sie den Fluss zur Niere vollständig. Stellen Sie sicher, dass es in diesem Wasser nicht knickt. Nach diesem Verfahren können endovaskuläre Katheterflusssonden in die Nierenarterien eingeführt werden, um den renalen Blutfluss zu beurteilen, oder Nierenbiopsien können durchgeführt werden, um Nierengewebeverletzungen zu beurteilen.
