Das Verständnis der Pathophysiologie des ischämischen Schlaganfalls ist aufgrund des Fehlens qualitativ hochwertiger Gewebedaten beim Menschen begrenzt. Da solche Proben nicht zu beschaffen sind, können gut kontrollierte Tiermodellstudien als Ersatz dienen. Das in diesem Protokoll verwendete Kaninchenmodell liefert konsistente, qualitativ hochwertige Daten für die Untersuchung des ischämischen Schlaganfalls.
Die hier beschriebene Technik ermöglicht eine präzise Kontrolle und Modulation hämodynamischer Faktoren, um deren Einfluss auf die Pathophysiologie des ischämischen Schlaganfalls zu beurteilen. Ein gut geplantes Verfahren kann zu qualitativ hochwertigen Ergebnissen führen, insbesondere durch den Einsatz von Strategien zur Linderung von Vasospasmen in den Arterien durch eine Kombination aus pharmakologischer Prophylaxe und effektiven angiographischen Techniken. Legen Sie das Kaninchen zunächst in Rückenlage auf einen fluoroskopietauglichen Operationstisch.
Verlängern Sie den Kopf, um die Positionierung für nachfolgende angiographische Ansichten zu optimieren. Um den Vasospasmus zu mildern, geben Sie nach der Einleitung der Anästhesie 0,5 Zoll transdermales Nitroglycerin auf die Innenseite des Ohrs. Nachdem Sie das Fell aus beiden Leistenregionen mit einer elektrischen Haarschneidemaschine entfernt haben, bereiten Sie die Haut mit Chlorhexidin- und Alkoholpeelings vor.
Drapieren Sie die Haut in der üblichen sterilen Weise und ertasten Sie die beidseitigen Pulse der Oberschenkelarterien. Machen Sie einen fünf Zentimeter langen chirurgischen Schnitt mit einer Klinge mit der Nummer 10 an der Stelle, an der Lidocain injiziert wurde. Verwenden Sie eine stumpfe Dissektion, um das neurovaskuläre Bündel freizulegen, und erweitern Sie bei Bedarf den Schnitt, um ein Arteriensegment freizulegen, das groß genug für den Zugang ist.
Nach der Isolierung des neurovaskulären Bündels werden mehrere Tropfen 1%Lidocain auf die Arterie getropft, um einen Vasospasmus zu verhindern. Trennen Sie die Arterie vorsichtig mit einer Pinzette von der Vene und dem angrenzenden Nerv. Identifizieren Sie die Arterie anhand des charakteristischen Aussehens ihrer Muskelwand im Vergleich zu den dünnen Wänden der Vene.
Nachdem Sie die Arterie isoliert haben, führen Sie die rechtwinklige Pinzette unter das Gefäß. Fassen Sie dann zwei Gefäßschlaufen mit dem Instrument und führen Sie sie sanft unter der Arterie hindurch. Platzieren Sie jeweils einen am stromaufwärts und stromabwärts gelegenen Ende des freiliegenden Gefäßes.
Ziehen Sie die Arterie sanft an, indem Sie an den Gefäßschlaufen ziehen, und untersuchen Sie das Gefäß mit einer sanften Dissektion auf Restgewebe, das entfernt werden soll, um die Chancen auf einen erfolgreichen Zugang zu erhöhen. Nachdem Sie das Gefäß präpariert und den Angiokatheter vorbereitet haben, träufeln Sie Lidocain erneut auf das Gefäß. Die Arterie weitet sich sichtbar, was die Chancen auf einen erfolgreichen Zugang und die Platzierung einer Schleuse mit der Seldinger-Technik erhöht.
Üben Sie eine sanfte Traktion auf die stromabwärts gelegene Gefäßschlaufe aus, um die Arterie zu verstopfen, indem Sie den Abfluss reduzieren und das Gefäß für den Zugangsversuch stabilisieren. Als nächstes schieben Sie die Nadel des Angiokatheters langsam in die Mitte des freiliegenden arteriellen Segments. Wenn Sie einen Blutblitz im Angiokatheter und in der Nabenkammer sehen, schieben Sie den Katheter in das arterielle Lumen.
Nach erfolgreicher Platzierung des Angiokatheters schieben Sie einen Mikrodraht durch das Lumen des Angiokatheters in die Aorta vor. Entfernen Sie dann den Angiokatheter über dem Draht und ersetzen Sie ihn durch eine dünne hydrophile Hülle. Bestätigen Sie den Rückfluss des arteriellen Blutes durch den Seitenarmschlauch, indem Sie das Dreiwegeventil öffnen.
Verriegeln Sie das Ventil und spülen Sie den Mantel mit 0,9%iger Kochsalzlösung. Befestigen Sie die Schleusennabe mit einer zusätzlichen 3,0-Seidennaht an der angrenzenden Haut und wiederholen Sie diesen Vorgang für die kontralaterale Oberschenkelarterie. Führen Sie unter fluoroskopischer Visualisierung einen Katheter mit vier französischen Gleitern über einen 0,035-Zoll-Gleitdraht vor, der durch die linke Femurhülle eingeführt wird.
Positionierung der Spitze des Gleitkatheters in der proximalen linken Wirbelarterie. Nachdem Sie den Draht entfernt haben, spülen Sie den Katheter mit heparinisierter 0,9%iger Kochsalzlösung. Führen Sie eine Angiographie durch, indem Sie die linke Wirbelarterie mit jodiertem Kontrastmittel unter Lappenvergrößerung injizieren, um den gesamten Kopf und Hals zu visualisieren.
Für die Injektion des linken Wirbels injizieren Sie 50% Kontrastmittel, verdünnt in normaler Kochsalzlösung, mit einem sanften Crescendo aus einer Drei-CC-Spritze. Bestimmen Sie die Injektionsmenge, indem Sie den Rückfluss in der rechten Wirbelarterie in die rechte Schlüsselbeinarterie überprüfen. Beachten Sie bei dieser Injektion auch die hintere Hirnarterie oder die obere Hirnarterie, von denen eine das Ziel ist, das mit dem Mikrokatheter verschlossen wird.
Bereiten Sie einen 2,4 French Flow-gerichteten Mikrokatheter mit einem 0,010-Zoll-Mikrodraht vor und machen Sie eine C-Form an der Spitze des Mikrodrahts. Führen Sie den Mikrokatheter unter Anleitung der Roadmap mit der rechten Femurscheide in einen Katheter mit vier French-Glide-Kathetern und über den Draht in die rechte Wirbelarterie. Schieben Sie den Mikrokatheter durch das zervikale Segment der linken Wirbelarterie.
Um die scharfe Kurve vom V2- zum V3-Segment so gut wie möglich zu passieren, schieben Sie den Mikrokatheter allein vor, während sich der Mikrodraht wieder proximal an seiner Spitze befindet. Nach der scharfen Kurve von V2 nach V3 gelangt der Mikrokatheter oft leicht in die proximale Basal- oder Arterie. Schieben Sie an dieser Stelle den Mikrodraht vor und wählen Sie die gewünschten posterioren zerebralen und oberen Kleinhirnarterien aus, da Mikrokatheterinjektionen aufgrund der fragilen Natur der intrakraniellen Arterien nicht ratsam sind.
Schieben Sie den Mikrokatheter weiter über den Mikrodraht in die Zielarterie und wählen Sie eine proximale Position, da er aufgrund seiner Winkelung an seinem Ursprung in der Regel am sichersten im Seitenzahnbereich kommuniziert werden kann. Eine tiefere Position ist in der Arteria cerebellaris superior möglich. Wiederholen Sie das Angiogramm, indem Sie den Katheter der linken Wirbelarterie mit hoher Vergrößerung über den Kopf injizieren, um den Verschluss der Zielarterie zu bestätigen.
Für eine optimale Bildgebung wird ein Kontrastmittel in voller Stärke injiziert, in der Regel nicht mehr als ein CC, das für die Beruhigung aller intrakraniellen Arterien ausreichend ist. Entfernen Sie den Mikrodraht vorsichtig aus dem Mikrokatheter unter fluoroskopischer Visualisierung, um eine stabile Position zu bestätigen. Setzen Sie einen Absperrhahn auf die Nabe des Mikrokatheters und schließen Sie den Absperrhahn, um Blutverlust durch retrograden Blutfluss zu verhindern.
Entfernen Sie den linken Wirbelkatheter, um die linke Femurzugangsschleuse freizugeben. Während der anschließenden Okklusionsphase werden intermittierende Durchleuchtungsbilder aufgenommen, um die stabile Position des okklusiven Mikrokatheters zu bestätigen. Entfernen Sie den okklusiven Mikrokatheter nach drei Stunden.
Und dann setzen Sie die arterielle Blutdruckmessung und -modulation für den zusätzlichen gewünschten Zeitraum fort. Blasen Sie den Ballonkatheter in der Aorta auf und entleeren Sie ihn, um die Blutdruckvariabilität zu überwachen. Bei akuten Eingriffen mit sofortiger Hirnentnahme wird das Schädeldach stückweise mit Rongeuren entfernt, beginnend am Hinterhauptkamm und anterior, bis das Gehirn intakt entnommen werden kann.
Versetzen Sie das Gehirn in Formalin oder Schockfrost, je nachdem, welche Art der gewünschten Gewebeanalyse gewünscht wird. Bei allen Tieren wurde das Gehirn erfolgreich entnommen und eine histopathologische Analyse durchgeführt, die einen Infarkt im rechten Kleinhirn zeigte. Der Blutdruck wurde mit einem Fogarty-Ballonkatheter in der infrarenalen Aorta gemessen, und die Daten aus einer etwa einstündigen Überwachung zeigen Änderungen des arteriellen Drucks in Echtzeit mit Änderungen des Ballonaufblasens.
Die Kurzzeitmessung des Blutdrucks zeigt die Druckveränderungen während des Herzzyklus. Darüber hinaus wurden kleine schnelle Veränderungen der respiratorischen Variabilität festgestellt, die physiologisch normal ist. Nach dem Aufblasen des Ballons wurde eine sofortige Beinahe-Verdoppelung des gemessenen Blutdrucks festgestellt.
Beim Versuch dieses Verfahrens ist eine sorgfältige stumpfe Dissektion und das Abtropfen von Lidocain, um einen Vasospasmus während des Zugangs zum Angiokatheter zu verhindern, von entscheidender Bedeutung. Darüber hinaus bietet die Angiographie der linken Wirbelarterie einen Fahrplan für einen effizienten endovaskulären Zugang zur Zielarterie intrakraniell. Die Hämodynamik kann pharmakologisch oder durch Aufblasen eines Ballonkatheters in der Aorta moduliert werden.
Die entnommenen Hirnproben können mit einer Vielzahl von Techniken, wie z.B. Histopathologie oder räumlicher Transkriptomik, analysiert werden.
