La comprensione della fisiopatologia dell'ictus ischemico è limitata a causa dell'assenza di dati tissutali di alta qualità nell'uomo. Poiché tali campioni sono impossibili da acquisire, studi su modelli animali ben controllati possono fungere da surrogato. Il modello di coniglio utilizzato in questo protocollo fornisce dati coerenti di alta qualità per l'interrogazione dell'ictus ischemico.
La tecnica qui descritta consente un controllo preciso e la modulazione dei fattori emodinamici per valutare il loro impatto sulla fisiopatologia dell'ictus ischemico. Una procedura ben pianificata può portare a risultati di alta qualità, in particolare impiegando strategie per mitigare il vasospasmo nelle arterie, attraverso una combinazione di profilassi farmacologica e tecniche angiografiche efficaci. Per iniziare, posizionare il coniglio in posizione supina su un tavolo operatorio compatibile con fluoroscopia.
Estendi la testa in quanto ottimizza il posizionamento per le successive viste angiografiche. Per mitigare il vasospasmo, posizionare 0,5 pollici di nitroglicerina transdermica all'interno dell'orecchio dopo l'induzione dell'anestesia. Dopo aver rimosso la pelliccia da entrambe le regioni inguinali usando tagliatrici elettriche, preparare la pelle con scrub di clorexidina e alcool.
Coprire la pelle nel solito modo sterile e palpare gli impulsi arteriosi femorali bilaterali. Fai un'incisione chirurgica di cinque centimetri con una lama numero 10 nel sito in cui è stata iniettata la lidocaina. Utilizzare la dissezione smussata per esporre il fascio neurovascolare e, se necessario, estendere l'incisione per esporre un segmento arterioso abbastanza grande da poter accedere.
Dopo l'isolamento del fascio neurovascolare, far cadere diverse gocce di 1% di lidocaina sull'arteria per prevenire il vasospasmo. Separare delicatamente l'arteria dalla vena e dal nervo adiacente usando una pinza. Identificare l'arteria dall'aspetto caratteristico della sua parete muscolare rispetto alle pareti sottili della vena.
Dopo aver isolato l'arteria, passare la pinza ad angolo retto sotto la nave. Quindi afferrare due anelli di vaso con lo strumento e passarli delicatamente sotto l'arteria. Situarne uno ciascuno alle estremità a monte e a valle del recipiente esposto.
Sottoporre l'arteria a una trazione delicata tirando i passanti del vaso e ispezionare la nave per eventuali tessuti residui da rimuovere con una delicata dissezione, aumentando le possibilità di accesso riuscito. Dopo aver sezionato il vaso e preparato l'angiocatere, gocciolare nuovamente la lidocaina sulla nave. L'arteria si dilata visibilmente, aumentando le possibilità di successo dell'accesso e del posizionamento di una guaina utilizzando la tecnica Seldinger.
Applicare una trazione delicata al circuito del vaso a valle per ingoiare l'arteria riducendo il deflusso e stabilizzando il vaso per il tentativo di accesso. Quindi, far avanzare lentamente l'ago dell'angiocatetere nel mezzo del segmento arterioso esposto. Vedendo un lampo di sangue nell'angiocatetere e nella camera del mozzo, far avanzare il catetere nel lume arterioso.
Dopo aver posizionato con successo l'angiocatere, far avanzare un microfilo di cope attraverso il lume dell'angiocatetere e nell'aorta. Quindi rimuovere l'angiocatetere sul filo e sostituirlo con una guaina idrofila sottile cinque francesi. Confermare il ritorno del sangue arterioso attraverso il tubo dell'arma laterale aprendo la valvola a tre vie.
Bloccare la valvola chiusa e lavare la guaina con soluzione salina allo 0,9%. Fissare il mozzo della guaina alla pelle adiacente con un'ulteriore sutura di seta 3.0 e ripetere questo processo per l'arteria femorale controlaterale. Sotto la visualizzazione fluoroscopica, far avanzare un catetere a quattro scorrimento francese su un filo di scorrimento da 0,035 pollici inserito attraverso la guaina femorale sinistra.
Posizionata la punta del catetere a scorrimento nell'arteria vertebrale sinistra prossimale. Dopo aver rimosso il filo, lavare il catetere con soluzione salina eparinizzata allo 0,9%. Eseguire l'angiografia iniettando l'arteria vertebrale sinistra con contrasto iodato sotto ingrandimento del lobo per visualizzare l'intera testa e il collo.
Per l'iniezione vertebrale sinistra, iniettare il 50% di contrasto, diluito in soluzione salina normale, con un delicato crescendo da una siringa da tre CC. Determinare la quantità di iniezione controllando il reflusso lungo l'arteria vertebrale destra e nell'arteria succlavia destra. Durante questa iniezione, notare anche l'arteria cerebrale posteriore o l'arteria cerebrale superiore, uno dei quali sarà il bersaglio da occludere con il microcatetere.
Preparare un microcatetere a flusso diretto francese da 2,4 con un microfilo da 0,010 pollici e creare una forma a C sulla punta del microfilo. Sotto la guida della roadmap, far avanzare il microcatetere all'interno di un catetere a quattro scorrimento francese utilizzando la guaina femorale destra e oltre il filo nell'arteria vertebrale destra. Far avanzare il microcatetere attraverso il segmento cervicale dell'arteria vertebrale sinistra.
Per superare la brusca virata come è meglio dal segmento V2 a V3, far avanzare il microcatetere da solo mentre il microfilo è tornato prossimale alla sua punta. Dopo aver superato la brusca virata da V2 a V3, il microcatetere passa spesso facilmente alla base o all'arteria prossimale. A questo punto, far avanzare il microfilo e selezionare le arterie cerebrali posteriori e cerebellari superiori desiderate, poiché le iniezioni di microcatetere non sono consigliate a causa della natura fragile delle arterie intracraniche.
Avanzare ulteriormente il microcatetere sul microfilo nell'arteria bersaglio e scegliere una posizione prossimale, poiché è in genere più sicuro nella parte posteriore comunicare a causa della sua angolazione alla sua origine. Una posizione più profonda è fattibile nell'arteria cerebellare superiore. Ripetere l'angiogramma iniettando il catetere dell'arteria vertebrale sinistra con alto ingrandimento sopra la testa per confermare l'occlusione dell'arteria bersaglio.
Per un'imaging ottimale, iniettare un contrasto a piena forza, in genere non più di un CC, che è adeguato per la pacificazione di tutte le arterie intracraniche. Rimuovere delicatamente il microfilo dal microcatetere sotto visualizzazione fluoroscopica per confermare una posizione stabile. Posizionare un rubinetto sul mozzo del microcatetere e chiudere il rubinetto di arresto per evitare la perdita di sangue dal flusso sanguigno retrogrado.
Rimuovere il catetere vertebrale sinistro per rendere disponibile la guaina di accesso femorale sinistra. Durante il successivo periodo di occlusione, acquisire immagini fluoroscopiche intermittenti per confermare la posizione stabile del microcatetere occlusivo. Rimuovere il microcatetere occlusivo dopo tre ore.
E poi continuare la misurazione e la modulazione della pressione arteriosa per il periodo aggiuntivo desiderato. Gonfiare e sgonfiare il catetere a palloncino nell'aorta per monitorare la variabilità della pressione sanguigna. Nelle procedure acute con raccolta cerebrale immediata, rimuovere il calvario in modo frammentario con rongeurs, iniziando dalla cresta occipitale e lavorando anteriormente fino a quando il cervello può essere raccolto intatto.
Mettere il cervello in formalina o congelamento flash, a seconda del tipo di analisi tissutale desiderata. In tutti gli animali, il cervello è stato raccolto con successo e sono state effettuate analisi istopatologiche, dimostrando l'infarto nel cervelletto destro. La pressione sanguigna è stata tracciata da un catetere a palloncino Fogarty posizionato nell'aorta infrarenale e i dati di circa un'ora di monitoraggio dimostrano cambiamenti della pressione arteriosa in tempo reale con cambiamenti nel gonfiaggio del palloncino.
Il tracciamento a breve termine della pressione sanguigna dimostra i cambiamenti di pressione durante il ciclo cardiaco. Inoltre, sono stati notati piccoli cambiamenti rapidi dalla variabilità respiratoria, che è fisiologicamente normale. Un immediato quasi raddoppio della pressione sanguigna misurata è stato notato dopo il gonfiaggio del palloncino.
Durante il tentativo di questa procedura, la meticolosa dissezione smussata e la lidocaina gocciolante per prevenire il vasospasmo durante l'accesso all'angiocatetere sono fondamentali. Inoltre, l'angiografia dell'arteria vertebrale sinistra fornisce una tabella di marcia per un efficiente accesso endovascolare all'arteria intracranica mirata. L'emodinamica può essere modulata in modo farmacologico o gonfiando un catetere a palloncino nell'aorta.
I campioni cerebrali raccolti possono essere analizzati con una varietà di tecniche, come l'istopatologia o la trascrittomica spaziale.
