Wir haben eine hochempfindliche Methode entwickelt, um diese Wirtszellproteine mit geringer Häufigkeit aus dem Arzneimittel mit Hilfe der Proteom-Anreicherungskügelchen nachzuweisen. Dieser Ansatz hilft uns, die Grundursache und das mit dem Arzneimittel verbundene Risiko zu finden. Es gibt mehrere Möglichkeiten, die Nachweisgrenze der HCP-Analyse zu verbessern, die ungezielte Methode, einschließlich, aber nicht beschränkt auf die Protein-A-Depletion, die begrenzte Verdauung, die Molekulargewichtsgrenze, die Immunpräzipitation.
Die gezielte Methode zum Nachweis des Wirtszellproteins, einschließlich Flüssigkeitschromatographie, Mehrfachreaktionsüberwachung und der parallelen Reaktionsüberwachung der Nicht-Flüssigkeitschromatographie. Die größte Herausforderung bei diesen HCP-Analysen ist der signifikante dynamische Bereich zwischen Antikörper-, Wirkstoff- und Wirtszellproteinen. Daher zielen die meisten Methoden darauf ab, die Menge an Antikörpern zu reduzieren und das HCP vor der LCMS-Analyse anzureichern, um den dynamischen Bereich zwischen Antikörperpeptiden und HCP-Peptiden zu verringern.
So verbessern die ProteoMiner-Technologie und das begrenzte Aufschlussprotokoll die Nachweisgrenze der HCP-Analyse im Vergleich zu anderen Methoden erheblich. Es ist im Vergleich zur Immunpräzipitation unvoreingenommen und kann im Vergleich zur Protein-A-Depletionsmethode auf verschiedene Wirkstoffmodule angewendet werden. Auch dieses Protokoll ist einfach und unkompliziert.
Die ProteoMiner-Technologie und das begrenzte Verdauungsprotokoll helfen uns dabei, mehrere HCPs zu identifizieren, die Polysorbat und das Fragment-Antikörper-Medikament abbauen. In Kombination mit der Nano-LCMPRM-Methode kann die Anreicherungsmethode auch quantitative Ergebnisse liefern, um die biologisch relevante Konzentration problematischer Wirtszellproteine zu finden.
