Desenvolvemos um método altamente sensível para detectar essas proteínas de células hospedeiras pouco abundantes a partir do produto farmacêutico usando as esferas de enriquecimento de proteoma. Esta abordagem ajuda-nos a encontrar a causa raiz e o risco associado ao produto farmacêutico. Existem várias maneiras de melhorar o limite de detecção da análise de HCP, o método não direcionado, incluindo, mas não limitado a, depleção de proteína A, a digestão limitada, o corte de peso molecular, a imunoprecipitação.
A maneira direcionada de detectar a proteína da célula hospedeira, incluindo cromatografia líquida, monitoramento de reação múltipla e monitoramento de reação paralela por cromatografia não líquida. O maior desafio associado a essas análises de PCH é a faixa dinâmica significativa entre a droga de anticorpos e as proteínas da célula hospedeira. Assim, a maioria dos métodos visa reduzir a quantidade de anticorpos e enriquecer o HCP antes da análise do LCMS para diminuir a faixa dinâmica entre peptídeos de anticorpos e peptídeos de HCP.
Assim, a tecnologia ProteoMiner e o protocolo de digestão limitada melhoram significativamente o limite de detecção da análise de HCP em comparação com outros métodos. Não é tendencioso em comparação com a imunoprecipitação e pode ser aplicado a diferentes módulos de drogas em comparação com o método de depleção de proteína A. Este protocolo também é simples e direto.
Assim, a tecnologia ProteoMiner e o protocolo de digestão limitada nos ajudam a identificar vários HCPs que degradam o polissorbato e a droga de anticorpos fragmentados. Em combinação com o método nano LCMPRM, o método de enriquecimento também pode fornecer resultados quantitativos para encontrar a concentração biologicamente relevante de proteínas problemáticas da célula hospedeira.
