Isolierung, Kultivierung und Charakterisierung von Stammzellen der Zahnpulpa aus menschlichen Milchzähnen und bleibenden Zähnen

Beginnen Sie damit, den extrahierten menschlichen Zahn mit einer Zahnzange zu befestigen. Schneiden Sie dann den Zahn mit einer Diamantscheibe, die mit einem zahnärztlichen Handstück und einem Wasserkühlmittel verbunden ist. Entfernen Sie mit einem Dentalbagger das Pulpagewebe vom Zahn.

Verwenden Sie anschließend eine sterile chirurgische Klinge, um das Pulpagewebe vorsichtig in kleine Fragmente zu zerkleinern. Geben Sie diese Fragmente dann in eine Mini-Tissue-Mühle mit PBS, um eine homogene Mischung zu bilden. Übertragen Sie die zerkleinerten Gewebefragmente in ein 15-Milliliter-Röhrchen und verdauen Sie sie mit einer Mischung aus Kollagenase Typ eins und Dispase.

Inkubieren Sie das Gewebe in der Enzymmischung bei 37 Grad Celsius für zwei Stunden. Nach der Inkubation neutralisieren Sie die Enzyme. Anschließend wird das verdaute Gewebe in ein 15-Milliliter-Röhrchen umgefüllt und fünf Minuten lang bei 300 g bei Raumtemperatur geschleudert.

Entsorgen Sie dann vorsichtig den Überstand und suspendieren Sie das Pellet wieder in frischem DMEM, ergänzt mit 10 bis 20 % FBS. Für die Zellkultur wird die Zellsuspension vorsichtig in einen 25 Quadratzentimeter großen Kulturkolben überführt. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in 5% Kohlendioxid.

Nach zwei bis drei Tagen wird das Medium mit einer sterilen serologischen Pipette vorsichtig abgesaugt und durch ein frisches Medium ersetzt. Schalten Sie als Nächstes für die Charakterisierung von DPSCs das Durchflusszytometer ein und bestätigen Sie die mesenchymale Stammzellnatur der isolierten Zellen. Die erfolgreiche Differenzierung von DPSCs in Osteoblasten, Adipozyten und Chondrozyten bestätigt die multipotente Natur von DPSCs.

Die Verdopplungszeit der DPSCs stimmte mit der für mesenchymale Stammzellen berichteten Zeit überein, was auf eine gesunde und proliferative Zellpopulation hindeutet. Die durchflusszytometrische Analyse zeigte, dass die Mehrheit der DPSCs positiv auf CD-90, CD-73 und CD-105 war, was ihre Identität als mesenchymale Stammzellen bestätigt. Darüber hinaus waren weniger als 2 % der Zellen positiv für CD-34, CD-45 und HLADR, was das Fehlen einer signifikanten hämatopoetischen oder endothelialen Zellkontamination bestätigt.