Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser

Resumen

La microdisección por captura láser de tejidos de fibrosis submucosa oral permite la extracción precisa de células de regiones histológicas de interés para el análisis de datos multiómicos con información morfológica y espacial.

Resumen

La fibrosis submucosa oral (FSO) es un tipo común de trastorno potencialmente maligno en la cavidad oral. La atrofia del epitelio y la fibrosis de la lámina propia y la submucosa se encuentran a menudo en los portaobjetos histopatológicos. Se ha propuesto que la displasia epitelial, la atrofia epitelial y los fibroblastos senescentes se asocian con la transformación maligna de la FSO. Sin embargo, debido a la heterogeneidad de los trastornos orales potencialmente malignos y del carcinoma oral de células escamosas, es difícil identificar los mecanismos moleculares específicos de la transformación maligna en la FSO. Aquí, presentamos un método para obtener un pequeño número de células epiteliales o mesenquimales portadoras de datos morfológicos e información espacial mediante microdisección por captura láser en portaobjetos de tejido fijados en formol e incluidos en parafina. Usando un microscopio, podemos capturar con precisión tejido epitelial displásico o atrófico a microescala (~500 células) y tejido subepitelial fibrótico. Las células extraídas pueden ser evaluadas mediante secuenciación genómica o transcriptómica para adquirir datos genómicos y transcriptómicos con información morfológica y espacial. Este enfoque elimina la heterogeneidad de la secuenciación de tejido OSF a granel y la interferencia causada por las células en áreas no lesionadas, lo que permite un análisis espacio-ómico preciso del tejido OSF.

Introducción

La fibrosis submucosa oral (FSO) es una enfermedad crónica e insidiosa que se desarrolla principalmente en la mucosa bucal y provoca una apertura bucal restringida¹. Si bien la OSF es una enfermedad multifactorial, la masticación de la nuez de areca o la nuez de betel es la principal causa de la OSF ^2,3. Debido a este hábito geográficamente específico, la PPO se concentra predominantemente en poblaciones del sudeste y sur de Asia³. Las características histológicas comunes de la OSF incluyen la deposición anormal de colágeno en el tejido conectivo debajo del epite....

Protocolo

Este estudio fue aprobado por la junta de revisión institucional de la Escuela y Hospital de la Universidad de Pekín. Se obtuvo el consentimiento informado de los pacientes. Las muestras de tejido utilizadas en este estudio fueron desidentificadas. El esquema de estudio se muestra en la Figura 1.

1. Preparación de la muestra

1. Corte tejidos de fibrosis submucosa oral fijados en formol e incluidos en parafina en secciones continuas de 3 μm y 10 μm de espesor en un micrótomo.
2. Despliega las secciones en el agua y luego pesca en los toboganes. Fije las secciones de 3 μM y 10 μm en....

Discusión

Este protocolo reportó una tubería para capturar muestras de tejido OSF con información morfológica y espacial para posteriores análisis espaciales-ómicos a través de microdisección láser. A partir de los resultados representativos, se identificaron diferentes patrones de CNA entre varias muestras relacionadas con la morfología.

La OSF, un tipo de OPMD, es una afección precancerosa común del carcinoma oral de células escamosas⁶. Se ha descrito que la inesta.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adhesion microscope slides	CITOTEST	REF.188105
Div-haematoxylin	YiLi	20230326
Eosin solution	BASO	BA4098
Ethanol	PEKING REAGENT	No.32061
Harris hematoxylin dye solution	YiLi	20230326
Hot plate	LEICA	HI1220
Laser capture microdissection system	LEICA	LMD7	Machine
Laser microdissection microsystem	LEICA	8.2.3.7603	Software
Micromount mounting medium	LEICA	REF.3801731
Microscope cover glass	CITOTEST	REF.10212450C
Microtome	LEICA	RM2235
PCR tubes	AXYGEN	16421959
PEN-membrane slides	LEICA	No.11505158
Re-blue solution	YiLi	20230326
Ultrapure distilled water	Invitrogen	REF.10977-015
Xylene	PEKING REAGENT	No.33535