Выделение клеток с морфологической и пространственной информацией из образцов субмукозного фиброза полости рта методом лазерной микродиссекции

Резюме

Лазерная микродиссекция субмукозных фиброзных тканей полости рта позволяет точно извлекать клетки из интересующих гистологических областей для анализа мультиомиксных данных с морфологической и пространственной информацией.

Аннотация

Субмукозный фиброз полости рта (ОСФ) является распространенным типом потенциально злокачественного заболевания полости рта. Атрофия эпителия и фиброз собственной пластинки и подслизистой оболочки часто обнаруживаются на гистопатологических предметных стеклах. Было высказано предположение, что дисплазия эпителия, атрофия эпителия и стареющие фибробласты связаны со злокачественной трансформацией OSF. Однако из-за гетерогенности потенциально злокачественных заболеваний полости рта и плоскоклеточного рака полости рта трудно выявить специфические молекулярные механизмы злокачественной трансформации при ОСФ. В данной работе представлен метод получения небольшого количества эпителиальных или мезенхимальных клеток, несущих морфологические данные и пространственную информацию, методом микродиссекции с лазерным захватом на фиксированных формалином предметных стеклах, залитых парафином. С помощью микроскопа мы можем точно захватить микромасштабную (~500 клеток) диспластическую или атрофическую эпителиальную ткань и фиброзную субэпителиальную ткань. Извлеченные клетки могут быть оценены с помощью секвенирования генома или транскриптома для получения геномных и транскриптомных данных с морфологической и пространственной информацией. Этот подход устраняет гетерогенность массового секвенирования тканей OSF и интерференцию, вызванную клетками в непораженных областях, что позволяет проводить точный пространственно-омиксный анализ тканей OSF.

Введение

Субмукозный фиброз полости рта (ОСФ) – это хроническое коварное заболевание, которое развивается преимущественно в слизистой оболочке щек и приводит к ограничению открывания рта¹. В то время как OSF является многофакторным заболеванием, жевание ореха ареки или ореха бетеля является основной причиной OSF ^2,3. Из-за этой географически специфической привычки OSF преимущественно концентрируется в популяциях в Юго-Восточной и Южной Азии³. Общие гистологические признаки OSF включают аномальное отложение коллагена в соединительной ткани под эпителием слизистой оболочки ....

протокол

Это исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом школы и больницы Пекинского университета. От пациентов было получено информированное согласие. Образцы тканей, использованные в этом исследовании, были обезличены. Схема исследования показана на рисунке 1.

1. Пробоподготовка

1. Разрезать на микротоме ткани ротовой полости с парафином, залитые парафином, на непрерывные участки толщиной 3 мкм и 10 мкм.
2. Разложите секции в воде, а затем выловите рыбу на горках. Зафиксируйте участки 3 мкМ и 10 мкм на предметных стеклах адгезионного микроскопа (слайд А) и PEN-мем....

Результаты

Выполняя лазерную микродиссекцию тканей OSF, мы получили образцы диспластического эпителия, стромы под диспластическим эпителием, атрофического эпителия и стромы под атрофической эпителиальной тканью (рис. 1). Благодаря выделению ДНК и низкоглубинному секвенированию в?.......

Обсуждение

В этом протоколе сообщалось о конвейере для захвата образцов тканей OSF с морфологической и пространственной информацией для дальнейшего пространственно-омического анализа с помощью лазерной микродиссекции. Исходя из репрезентативных результатов, мы идентифицировали различные патт?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adhesion microscope slides	CITOTEST	REF.188105
Div-haematoxylin	YiLi	20230326
Eosin solution	BASO	BA4098
Ethanol	PEKING REAGENT	No.32061
Harris hematoxylin dye solution	YiLi	20230326
Hot plate	LEICA	HI1220
Laser capture microdissection system	LEICA	LMD7	Machine
Laser microdissection microsystem	LEICA	8.2.3.7603	Software
Micromount mounting medium	LEICA	REF.3801731
Microscope cover glass	CITOTEST	REF.10212450C
Microtome	LEICA	RM2235
PCR tubes	AXYGEN	16421959
PEN-membrane slides	LEICA	No.11505158
Re-blue solution	YiLi	20230326
Ultrapure distilled water	Invitrogen	REF.10977-015
Xylene	PEKING REAGENT	No.33535