Combining Microscopy with a Stimulant Delivery System to Monitor Live Sperm from an AcroSensE Model Mouse

Comience por cubrir los cubreobjetos de 35 milímetros con poli-D-lisina o PDL. Para ello, dispense una gota de 0,5 microlitros de PDL en el centro de un cubreobjetos. Con una pipeta graduada de 10 microlitros, unte la gota de PDL en el cubreobjetos.

Deje que el cubreobjetos recubierto se seque a 37 grados centígrados durante 10 minutos. Para obtener imágenes de los espermatozoides recién recolectados de un modelo de ratón que exprese AcroSensE, agregue 80 microlitros de la suspensión de espermatozoides preparada en el centro de la placa protectora recubierta de PDL. Luego, agregue lentamente tres mililitros de medios base de Whitten modificados y suplementados precalentados a 37 grados Celsius al plato.

Proceda a realizar las imágenes utilizando una combinación de un microscopio con la configuración de administración de estimulante de una sola célula. Primero, monte el plato que contiene los espermatozoides en el microscopio. Luego, usando el micromanipulador, coloque la punta capilar del sistema de administración de estimulantes a unos 100 micrones hacia un lado y de cinco a 10 micrones por encima del plano de la célula de interés.

Coloque el capilar a menos de 100 micras de la cabeza del espermatozoide. A continuación, inicie la secuencia de imágenes en el microscopio. Obtenga imágenes de espermatozoides a una alta velocidad de fotogramas, preferiblemente superior a 10 fotogramas por segundo.

10 segundos después de iniciar la adquisición de la imagen, active el sistema de administración de una sola célula para administrar una bocanada de estimulante durante 10 segundos. Continúe capturando imágenes de células durante un período de 10 a 15 minutos. De manera similar, imagine varias celdas de un solo plato de acuerdo con las ubicaciones que se muestran en la pantalla.