Utilizando el kit recomendado, proceda a preparar 95 microlitros de la solución de nucleofección en un tubo de 1,5 mililitros para cada condición de nucleofección deseada. Prepare también un matraz T25 lleno de cuatro mililitros de medio completo precalentado por condición y manténgalo en la incubadora hasta su uso. Para realizar la nucleofección, centrifugar el número deseado de células durante cinco minutos a 300 G antes de eliminar el sobrenadante.
Agregue un mililitro de DPBS y vuelva a suspender el pellet de manera homogénea pipeteando hacia arriba y hacia abajo 10 veces. Después de repetir la centrifugación, vuelva a suspender el pellet en 95 microlitros de solución de nucleofección. Combine los 95 microlitros de células con una solución premezclada que contenga cinco microlitros de cada plásmido seleccionado para la nucleofección.
Después de transferir esta solución a una cubeta, colóquela en el dispositivo nucleofector para nucleofectar las células con los plásmidos utilizando el programa optimizado de células madre neurales del sistema nucleofector. Después de completar la electroporación, utilizando la pipeta Pasteur suministrada en el kit, introduzca con cuidado el medio completo tibio en la cubeta. Transfiera el contenido de la cubeta al matraz T25 previamente preparado que contenga medio completo precalentado.
Incubar las células nucleofectadas en una incubadora humidificada a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante tres a cinco días y visualizar las neuroesferas nucleofectadas.
