The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore's lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

NOTA: Este protocolo describe la preparación (secciones 1 - 3), ejecución (Sección 4), y el análisis (Sección 4) de los ensayos de saciedad en 2-D. Luego, utilizando la estimulación dopaminérgica como ejemplo, la sección 5 muestra la forma de combinar la estimulación thermogenetic con los ensayos de saciedad 2-D para inducir hipersexualidad. Sección 6 describe 3 maneras de verificar los resultados de los ensayos de saciedad en 2-D. Por último, la sección 7 muestra cómo medir la recuperación de la unidad de apareamiento en las moscas macho. 1. La fabricación de 8 y 32 de la cámara de Arenas del Comportamiento NOTA: Cada escenario conductual consiste en varias capas de láminas de plástico cortadas con láser se mantienen unidas por tornillos hexagonales y tuercas de mariposa en cada una de las cuatro esquinas (Figura 1A). <ol><li> Fabricar las capas de la arena. Fabricar cada capa usando un cortador láser para cortar láminas de plástico acrílico a la forma apropiada (véase la figura 1B, 1C de los productos). NOTA: Muchos institutio investigaciónns tienen cortadoras láser en sus talleres de máquinas o espacios fabricante. Si la institución tiene acceso a un cortador láser, continúe con los siguientes pasos. Si no es así, a continuación, siga las instrucciones del paso 1.2 en su lugar. <ol><li> Para cada capa, abra el patrón de diseño en el software de la cortadora láser. NOTA: Los diseños se pueden encontrar en los archivos PDF con nombres correspondientes (por ejemplo, 8-Sala Arena - Capa 2 - Doors.pdf) en el material suplementario 1. Este archivo también contiene anotaciones para el tipo de plástico que se utiliza (por ejemplo, 1 / 8 pulgadas (es decir, 3,175 mm) acrílico transparente). El espesor exacto de cada capa no es crítico. El requisito principal es permitir a 0,12 pulgadas (3 mm) o más de espacio vertical libre en las cámaras. </li><li> Ajustar los ajustes del láser (energía, enfoque, etc.) para el tipo y grosor de plástico para ser utilizado. Coloque objetos de plástico en la cama cortador láser y ejecutar el cortador láser. NOTA: Esta configuración puede variar ampliamente basado en el láser cutteModelo R y la fuerza de su láser. Encuentra los ajustes adecuados en función de la experiencia pasada o al hacer cortes de prueba en el plástico de desecho. Los grabados profundos hexagonales se incluyen en el diseño al recreo las cabezas de los tornillos hexagonales. Esta característica permite una sola mano apriete de las tuercas de mariposa y permite a los escenarios para descansar plana sobre el banco (sin sobresalir cabezas de los tornillos). Sin embargo, haciendo grabados profundos es a menudo difícil de lograr, y requiere mucho tiempo, usando un cortador láser. Este paso es opcional y se puede omitir sin afectar los resultados de comportamiento. </li><li> Al cortar el marco de la puerta (Capa 2, Figura 1 A), también utilizar la configuración de láser adecuados para grabar los números de cámara incluye en el diseño (como en la Figura 1B, 1C). </li></ol></li><li> Hacer un pedido con un fabricante de corte por láser en línea. Cargar todos los archivos de diseño de PDF para la arena de 8 y / o 32 de cámara y especificar el tipo de material (por ejemplo, 1/8 de pulgada (es decir, 3,175 mm) CLEAr acrílico) sobre la base de las anotaciones en los archivos. Los resultados aparecerán como en las figuras 1B (arena de 8 cámaras) y 1C (arena de 32 cámaras). </li><li> Montar arenas utilizando cuatro tornillos de cabeza hexagonal y cuatro tuercas de mariposa para alinear y mantener unidas las capas de plástico (Figura 1A). Las arenas aparecerá como en la figura 1D, 1E (8-cámara) y la Figura 1F, 1G (32 cámaras). NOTA: La pared de alimentos (Capa 4 en la figura 1A) se utiliza sólo para ensayos de saciedad 2-D y se omite en arenas 32 de cámara, que se utilizan en ensayos de cortejo. </li></ol> 2. Preparación de Alimentos para 2-D saciedad Ensayo NOTA: Debido a un ensayo de saciedad 2-D se extiende por 4,5 h, la mosca de alimentos se utiliza en la arena para proporcionar la nutrición y el agua. Este protocolo utiliza, pero no se limita a, la harina de maíz-agar convencional vuela alimentos. <ol><li> Parcialmente montar el campo de la saciedad 2-D (8-cámara) con capas 3 - 6(véase la Figura 1A para asignaciones de capa) y apretarlo con tuercas de mariposa y tornillos hexagonales. </li><li> Coloque los alimentos frescos mosca en una botella limpia, apto para microondas. Añadir agua suficiente para cubrir la superficie inferior de la botella (Figura 2A). </li><li> comida de microondas a máxima potencia durante 30 - 45 s. Comprobar el progreso y remover cada 15 s hasta que se derrita (Figura 2B). ¡PRECAUCIÓN! Fly alguna olla fácilmente sobre. </li><li> Utilice una punta de pipeta embotado de 1.000 l (Figura 2C) para transferir lentamente ~ 1 ml derritió los alimentos en cada cámara (Figura 2D). </li><li> Permita que los alimentos se vuelvan a solidificar a 4 ° C durante ~ 10 minutos (Figura 2E) antes de ensamblar completamente la arena (Figura 2F). </li><li> Utilice la arena completado para experimentos (véase la Sección 4) o se almacena a 4 ° C. </li><li> Almacenar la comida sobrante a 4 ° C y la reutilización. </li></ol> 3. Preparación Vírgenes Las hembras de la Conducta Ensayos NOTA: 2-D ensayos de saciedad utilizan un gran número de moscas hembras vírgenes (~ 120 - 160 para un campo de comportamiento completo) que son difíciles de recoger usando métodos estándar. En esta sección se describe un enfoque alternativo utilizando el transgén hs-HID en el cromosoma Y 28, que ha sido utilizado con éxito en ensayos de cortejo 25, 29. La acción usada para generar hembras vírgenes de ojos blancos tiene el genotipo w1118 (X) / hs-HID (Y); + / +; + / + (Bloomington código RS 24638). <ol><li> Flip vuela en una nueva botella una vez 20 - 50% de las pupas han eclosed (véase la Figura 3A, por ejemplo) y hay suficientes machos (5 - 10) para propagar los valores. </li><li> Choque térmico de la botella original en un baño de agua caliente 37 ° C durante 1 h para activar suficientemente hs-HID para matar a los machos (Figura 3B). Después del choque térmico, solamente las hembras eclose de estas botellas y así permanecerán hasta que la virgenensayos. NOTA: Asegúrese de que se calientan de manera uniforme todos los lados de la botella (véase la figura 3A para la línea de agua). Prolongar este tiempo para un máximo de 2 horas 1 hora si no es suficiente para practicar la eutanasia a todos los varones. </li><li> Aislar hembras colectadas durante al menos 3 d antes de los experimentos para asegurarse de que son lo suficientemente mayor como para ser sexualmente receptivas 25, 29. NOTA: los machos para el cromosoma Y menos de vez en cuando surgen de esta población. Estos machos tienen ojos en blanco y no se ven afectados por el choque térmico, ya que no contienen el transgén hs-HID. No pueden producir esperma y por lo tanto no puede disminuir la receptividad en las hembras 30, 31. </li></ol> 4. Realización y anotando 2-D saciedad Ensayos NOTA: Es importante controlar la edad del macho vuela como los cambios de unidad de acoplamiento con la edad. Este protocolo utiliza los machos que son 3 - 4 días de edad 25 </sup&gt;. <ol><li> Ajustar la incubadora a la temperatura deseada (por ejemplo, 23 ° C para el estándar, los experimentos de RT) y humedad (&gt; 30%). Para las incubadoras sin control de la humedad, dejando un vaso de agua en la incubadora es suficiente. </li><li> Colocar una arena ensayo de saciedad 2-D en la incubadora durante ~ 30 min para equilibrar la temperatura y para evitar la condensación en las cámaras durante el curso del experimento. Las puertas giratorias deben estar en la posición abierta. </li><li> Utilice un aspirador para aspirar mosca 32 15 - 20 hembras vírgenes en cada cámara de la arena (Figura 4). NOTA: Es importante que las hembras y los machos no se anestesian en el mismo día como el ensayo. En nuestra experiencia, si lo hace puede afectar la receptividad femenina y el comportamiento de apareamiento masculino. </li><li> Aspirar 1 macho en cada cámara. </li><li> Coloque la arena cargada en la incubadora bajo una videocámara de consumo normal (Figura 5) y el cine durante 4,5 h. </li><li> Puntuación vídeos observando cuando cada mosca macho empieza y termina cada apareamiento (es decir, la cópula). Este paso puede llevar mucho tiempo al principio. Con la práctica, se puede marcar los vídeos a velocidad de 5x o superior. NOTA: Como moscas se aparean para ~ 20 min a ~ 23 ° C (más corta duración a temperaturas más altas) 29, uno puede leerlo a través de la primera 15 min de cada acoplamiento. </li><li> Tras registrar todos los tiempos de apareamiento, sumar el número de apareamientos para cada mosca (ver resultados representativos). </li><li> Utilice el código proporcionado para generar una ethogram. Ver material suplementario 2 para el código, instrucciones y datos de ejemplo. </li><li> Utilice CO2 o temperatura fría para anestesiar las moscas antes de retirarlas. </li></ol> 5. El uso de la manipulación thermogenetic para revertir la saciedad en 2-D saciedad Ensayos NOTA: Este protocolo pruebas si la estimulación thermogenetic de una población neuronal definida puede superar la sensación de saciedad. El Fli experimentales expresar el canal catiónico sensible al calor TRPA1 en poblaciones definidas de neuronas (UAS-TRPA1). Los pasos siguientes se aplican a la estimulación de las neuronas dopaminérgicas (TH-Gal4), que se ha demostrado para promover la unidad de acoplamiento 25. Estos pasos se pueden utilizar en conjunción con otros conductores neuronales para descubrir otras poblaciones que promueven la unidad de acoplamiento. <ol><li> Para inducir comportamientos de acoplamiento thermogenetically en las moscas saciadas, aumentar la temperatura de la incubadora (por ejemplo, de 23 ° C a 28,5 ° C) después de completar un experimento 4,5 h plena saciedad 2-D. </li><li> Después de la incubadora alcanza la temperatura deseada, continuar la estimulación de calor y la puntuación de los apareamientos (es decir. Cópulas) de los machos durante 1 h (ver resultados representativos). NOTA: La temperatura y la duración de la estimulación puede variar en función del genotipo por lo que es necesario solucionar las condiciones óptimas que evitan que la sobreestimulación de las neuronas y seguir produciendo una robufenotipo st. </li></ol> 6. El uso de cortejo y la locomoción para Verificar Saciedad NOTA: En esta sección se describen 3 métodos opcionales que se pueden utilizar para verificar los resultados de los ensayos de saciedad en 2-D. Ellos no son necesarios para cada ensayo. <ol><li> Utilizar ensayos de cortejo para verificar la saciedad. <ol><li> Aspirar un macho y una hembra virgen en cada una de las 32 cámaras en una arena de cortejo. </li><li> Filmar las moscas de ~ 20 min utilizando una videocámara de consumo normal. </li><li> Puntuación del índice de cortejo (CI) para cuantificar el cortejo 25; esta es la fracción de tiempo de la realización de comportamiento de cortejo (canto, siguiente, etc.) y el apareamiento (es decir, la copulación) sobre una ventana de 5 min. Esta ventana se inicia desde la primera instancia del comportamiento de cortejo. Si una mosca macho no se inicia el cortejo en el primero 15 min, su CI es 0. Naïve WT moscas deben mostrar un CI mayor de 0.9, mientras que una mosca completamente saciado debe tener un CI bElow 0.2. Otras medidas de cortejo también pueden ser considerados 23, 33. </li></ol></li><li> Anotando el cortejo en ensayos de saciedad 2-D <ol><li> Puntuación de la cantidad de tiempo que una mosca macho gasta cortejo, durante un período de tiempo de un ensayo de saciedad 2-D (por ejemplo, la primera h). El cortejo se define como el macho de realizar cualquier etapa del ritual (cantando, siguiendo, etc.). A diferencia de en la Sección 6.1.3, este paso no incluye el tiempo de apareamiento el macho pasa. </li><li> Dividir el tiempo de cortejo anterior por el tiempo total que el macho no se aparea (es decir, no copular) en el mismo período de tiempo. Por ejemplo, si una mosca macho tribunales para 15 min y compañeros durante 20 minutos sobre la primera h, la proporción es de 15 min / (60 min - 20 min) = 0,375. La relación se muestra como &quot;Fracción de tiempo en el cortejo nonmating&quot; en resultados representativos. </li></ol></li><li> Usando el ensayo de locomoción para evaluar agotamiento <ol><li> Parcialmente montar el 32-Arena de cámara con todas las partes, pero la hoja de contraste. </li><li> Aspirar una mosca macho (no hay moscas hembras) en cada una de las 32 cámaras en una arena de cortejo. </li><li> Filmar las moscas de ~ 10 min utilizando una videocámara de consumo normal. </li><li> Realizar un seguimiento de las moscas con el plugin MTrack2 en ImageJ (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html). </li></ol></li></ol> 7. Recuperación de acoplamiento de unidad después de 2-D saciedad Ensayo <ol><li> Realizar un ensayo de saciedad 2-D como se describe en la Sección 4, pero aspirar el macho despega al final del ensayo. </li><li> Aislar las moscas macho a 23 ° C para el número deseado de días. </li><li> Realizar un ensayo de saciedad 2-D con los machos recuperados y anotar sus apareamientos (es decir, cópulas) por tan sólo 1 hora (ver resultados representativos). </li></ol>

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	<li>Sturtevant, A. H., Bridges, C. B., Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+relations+of+genes.">The spatial relations of genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 5 (5), 168-173 (1919).</li><li>Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems+Approaches+to+Biological+Rhythms+in+Drosophila.">Systems Approaches to Biological Rhythms in Drosophila.</a> Methods in Enzymology. 393, 61-185 (2005).</li><li>Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+GTPases+in+neuronal+morphogenesis.">Rho GTPases in neuronal morphogenesis.</a> Nature reviews. Neuroscience. 1 (3), 173-180 (2000).</li><li>Schmucker, D., Clemens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Dscam+Is+an+Axon+Guidance+Receptor+Exhibiting+Extraordinary+Molecular+Diversity.">Drosophila Dscam Is an Axon Guidance Receptor Exhibiting Extraordinary Molecular Diversity.</a> Cell. 101 (6), 671-684 (2000).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLH+proteins,+fly+neurogenesis,+and+vertebrate+myogenesis.">HLH proteins, fly neurogenesis, and vertebrate myogenesis.</a> Cell. 75 (5), 827-830 (1993).</li><li>Stockinger, P., Kvitsiani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+circuitry+that+governs+Drosophila+male+courtship+behavior.">Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior.</a> Cell. 121 (5), 795-807 (2005).</li><li>Yu, J. Y., Kanai, M. I., Demir, E., Jefferis, G. S. X. E., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Organization+of+the+Neural+Circuit+that+Drives+Drosophila+Courtship+Behavior.">Cellular Organization of the Neural Circuit that Drives Drosophila Courtship Behavior.</a> Current biology. 20 (18), 1602-1614 (2010).</li><li>Zhou, C., Pan, Y., Robinett, C. C., Meissner, G. W., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+Brain+Neurons+Expressing+doublesex+Regulate+Female+Receptivity+in+Drosophila.">Central Brain Neurons Expressing doublesex Regulate Female Receptivity in Drosophila.</a> Neuron. 83 (1), 149-163 (2014).</li><li>Rideout, E. J., Dornan, A. J., Neville, M. C., Eadie, S., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+sexual+differentiation+and+behavior+by+the+doublesex+gene+in+Drosophila+melanogaster.">Control of sexual differentiation and behavior by the doublesex gene in Drosophila melanogaster.</a> Nature neuroscience. 13 (4), 458-466 (2010).</li><li>Manoli, D. S., Foss, M., Villella, A., Taylor, B. J., Hall, J. C., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific+fruitless+specifies+the+neural+substrates+of+Drosophila+courtship+behaviour.">Male-specific fruitless specifies the neural substrates of Drosophila courtship behaviour.</a> Nature. 436 (7049), 395-400 (2005).</li><li>Kimura, K. I., Ote, M., Tazawa, T., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruitless+specifies+sexually+dimorphic+neural+circuitry+in+the+Drosophila+brain.">Fruitless specifies sexually dimorphic neural circuitry in the Drosophila brain.</a> Nature. 438 (7065), 229-233 (2005).</li><li>Cachero, S., Ostrovsky, A. D., Yu, J. Y., Dickson, B. J., Jefferis, G. S. X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+the+fly+brain.">Sexual dimorphism in the fly brain.</a> Current biology. 20 (18), 1589-1601 (2010).</li><li>Clowney, E. J., Iguchi, S., Bussell, J. J., Scheer, E., Ruta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Chemosensory+Circuits+Controlling+Male+Courtship+in+Drosophila.">Multimodal Chemosensory Circuits Controlling Male Courtship in Drosophila.</a> Neuron. 87 (5), 1036-1049 (2015).</li><li>Kallman, B. R., Kim, H., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation+and+inhibition+onto+central+courtship+neurons+biases+Drosophila+mate+choice.">Excitation and inhibition onto central courtship neurons biases Drosophila mate choice.</a> eLife. 4, e11188 (2015).</li><li>von Philipsborn, A. C., Liu, T., Yu, J. Y., Masser, C., Bidaye, S. S., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+Drosophila+courtship+song.">Neuronal control of Drosophila courtship song.</a> Neuron. 69 (3), 509-522 (2011).</li><li>Zhou, C., Franconville, R., Vaughan, A. G., Robinett, C. C., Jayaraman, V., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neural+circuitry+mediating+courtship+song+perception+in+male+Drosophila.">Central neural circuitry mediating courtship song perception in male Drosophila.</a> eLife. 4, e08477 (2015).</li><li>Kohatsu, S., Koganezawa, M., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+contact+activates+male-specific+interneurons+that+trigger+stereotypic+courtship+behavior+in+Drosophila.">Female contact activates male-specific interneurons that trigger stereotypic courtship behavior in Drosophila.</a> Neuron. 69 (3), 498-508 (2011).</li><li>Kohatsu, S., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visually+induced+initiation+of+Drosophila+innate+courtship-like+following+pursuit+is+mediated+by+central+excitatory+state.">Visually induced initiation of Drosophila innate courtship-like following pursuit is mediated by central excitatory state.</a> Nature Communications. 6, 6457 (2015).</li><li>Fan, P., Manoli, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+neural+mechanisms+that+inhibit+Drosophila+from+mating+with+other+species.">Genetic and neural mechanisms that inhibit Drosophila from mating with other species.</a> Cell. 154 (1), 89-102 (2013).</li><li>Kurtovic, A., Widmer, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+class+of+olfactory+neurons+mediates+behavioural+responses+to+a+Drosophila+sex+pheromone.">A single class of olfactory neurons mediates behavioural responses to a Drosophila sex pheromone.</a> Nature. 446 (7135), 542-546 (2007).</li><li>Ejima, A., Smith, B. P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalization+of+Courtship+Learning+in+Drosophila+Is+Mediated+by+cis-Vaccenyl+Acetate.">Generalization of Courtship Learning in Drosophila Is Mediated by cis-Vaccenyl Acetate.</a> Current Biology. 17, 599-605 (2007).</li><li>Keleman, K., Vrontou, E., Kr&#252;ttner, S., Yu, J. Y., Kurtovic-Kozaric, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+modulate+pheromone+responses+in+Drosophila+courtship+learning.">Dopamine neurons modulate pheromone responses in Drosophila courtship learning.</a> Nature. 489 (7414), 145-149 (2012).</li><li>Pan, Y., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Identification+and+Separation+of+Innate+and+Experience-Dependent+Courtship+Behaviors+in+Drosophila.">Genetic Identification and Separation of Innate and Experience-Dependent Courtship Behaviors in Drosophila.</a> Cell. 156 (1-2), 236-248 (2014).</li><li>Zhang, S. X., Rogulja, D., Crickmore, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Circuitry+Underlying+Mating+Drive.">Dopaminergic Circuitry Underlying Mating Drive.</a> Neuron. 91 (1), 168-181 (2016).</li><li>Bowers, M. B., Van Woert, M., Davis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+behavior+during+L-dopa+treatment+for+Parkinsonism.">Sexual behavior during L-dopa treatment for Parkinsonism.</a> The American journal of psychiatry. 127 (12), 1691-1693 (1971).</li><li>Sacks, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Awakenings. , (1999).</li><li>Dietzl, G., Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li><li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+dopaminergic+and+GABAergic+neurons+control+the+duration+and+persistence+of+copulation+in+Drosophila.">Opposing dopaminergic and GABAergic neurons control the duration and persistence of copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li><li>Peng, J., Chen, S., Busser, S., Liu, H., Honegger, T., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradual+Release+of+Sperm+Bound+Sex-Peptide+Controls+Female+Postmating+Behavior+in+Drosophila.">Gradual Release of Sperm Bound Sex-Peptide Controls Female Postmating Behavior in Drosophila.</a> Current biology. 15 (3), 207-213 (2005).</li><li>Yapici, N., Kim, Y. J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour.">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li><li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Sensillum+Recordings+in+the+Insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae.">Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36 (36), 1-5 (2010).</li><li>Cook, R., Cook, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Attractiveness+to+males+of+female+Drosophila+melanogaster:+effects+of+mating,+age+and+diet.">The Attractiveness to males of female Drosophila melanogaster: effects of mating, age and diet.</a> Animal behaviour. 23, 521-526 (1975).</li><li>Toates, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Motivational Systems (Problems in the Behavioural Sciences). , (1986).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mating+of+a+fly.">The mating of a fly.</a> Science. 264 (5166), 1702-1714 (1994).</li><li>Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+and+manipulating+neural+circuits+in+the+fly+brain.">Mapping and manipulating neural circuits in the fly brain.</a> Advances in genetics. 65 (9), 79-143 (2009).</li><li>Venken, K. J. T., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Manipulation+of+Genes+and+Cells+in+the+Nervous+System+of+the+Fruit.">Genetic Manipulation of Genes and Cells in the Nervous System of the Fruit.</a> Neuron. 72 (2), 202-230 (2011).</li><li>Klapoetke, N. C., Murata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Bellen, H. J., Levis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BDGP+gene+disruption+project:+single+transposon+insertions+associated+with+40%+of+Drosophila+genes.">The BDGP gene disruption project: single transposon insertions associated with 40% of Drosophila genes.</a> Genetics. 167 (2), 761-781 (2004).</li><li>Spradling, A. C., Stern, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Berkeley+Drosophila+Genome+Project+gene+disruption+project:+Single+P-element+insertions+mutating+25%+of+vital+Drosophila+genes.">The Berkeley Drosophila Genome Project gene disruption project: Single P-element insertions mutating 25% of vital Drosophila genes.</a> Genetics. 153 (1), 135-177 (1999).</li><li>Parks, A. L., Cook, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36 (3), 288-292 (2004).</li><li>Matthews, K. A., Kaufman, T. C., Gelbart, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resources+for+Drosophila:+the+expanding+universe.">Research resources for Drosophila: the expanding universe.</a> Nature reviews. Genetics. 6 (3), 179-193 (2005).</li><li>Ni, J. Q., Liu, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Estados motivacionales pueden ser saciados, mantienen, y se recuperaron 34. Presentamos un ensayo de saciedad 2-D de forma rápida y robusta que mide todos estos aspectos de apareamiento unidad en la marcha. Este ensayo se abre la posibilidad de utilizar manipulaciones genéticas mosca avanzada para estudiar los componentes moleculares y de circuito de un comportamiento motivado. El ensayo de saciedad se basa en la capacidad del varón a la corte con éxito y copular,...

El trabajo en Drosophila ha proporcionado la penetración profunda y pionera en muchos fenómenos biológicos, incluyendo la naturaleza del gen 1, los principios del desarrollo embrionario 2, 3 ritmos circadianos, y el desarrollo y el cableado del sistema nervioso 4, 5, 6. La motivación sigue siendo mucho menos conocido que estos fenómenos, tal vez debido a las limitaciones de los sistemas que se han estudiado hasta el momento. La motivación en la mosca se estudia principalmente en el contexto de hambre, que presenta muchos retos debido a su extremadamente pequeña ingesta de alimentos por combate alimentación y exoesqueleto que impide signos manifiestos de la deposición de grasa. En consecuencia, hay una necesidad de ampliar los sistemas utilizados para estudiar la motivación en la marcha. Se describe un marco de comportamiento para el estudio de la unidad de acoplamiento enDrosophila. Este sistema se aprovecha de las herramientas neurogenéticas en la mosca, así como la accesibilidad 7, 8, 9, 10, 11, 12 y la conectoma putativo de su circuito de dimorfismo sexual 8, 13. Además, gran parte de la innata 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 y aprendimos 22, 23, 24 circuitos sensorio-motor que controla el cortejo se ha trabajado de manera detallada, proporcionando una oportunidad únicapara localizar el nodo de circuito exacta sobre la que incide la motivación. Recientemente hemos informado de que, en la marcha, al igual que en los seres humanos, los niveles de dopamina son fundamentales para la unidad de acoplamiento 25, 26, 27. Hemos tenido acceso a la genética a nivel de circuito molecular- y detallada productora de dopamina y la recepción de las neuronas en la marcha, lo que facilita los análisis pertinentes de este fenómeno conservada usando los ensayos que aquí describimos 25. Añadimos a los ensayos de comportamiento en Zhang et al. 25 una nueva arena de comportamiento plana que permite la creación de vídeo, lo que llamamos un ensayo de saciedad de 2 dimensiones (2-D), una mejora importante sobre los métodos anteriores. En consecuencia, el nuevo ensayo es más escalable y cuantificable, y por tanto más adecuado para pantallas genéticas de los genes y las neuronas implicadas en la motivación. Utilizamos este nuevo ensayo, junto con ensayos de cortejo y neurogemanipulaciones néticas, para demostrar cómo medir y alterar la unidad de acoplamiento de la marcha.

<table><tbody><tr><td>1/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K12</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/8 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K42</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>3/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K219</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/32 inch black delrin</td><td>McMaster-Carr</td><td>8575K132</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>Hex screws, 1 inch long (50x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92314A115&amp;nbsp;</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.</td></tr><tr><td>Thumb nuts (25x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92741A100</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).</td></tr><tr><td>Camcorder</td><td>Canon</td><td>Vixia HF R700</td><td>Can be replaced by any consumer comcorder.</td></tr></tbody></table>

measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster

A pesar de décadas de investigación, las bases neuronales y moleculares de los estados motivacionales siguen siendo un misterio. Recientemente hemos desarrollado una novela, reduccionista, y un sistema escalable para la investigación en profundidad de la motivación de utilizar la unidad de acoplamiento macho de Drosophila melanogaster (Drosophila), los métodos para los que detallamos aquí. El paradigma de comportamiento se centra en el descubrimiento de que la unidad de apareamiento masculino disminuye junto con la fertilidad a lo largo de cópulas repetidas y recupera más de ~ 3 d. En este sistema, las herramientas neurogenéticas potentes disponibles en la mosca convergen con la accesibilidad genética y diagrama de cableado putativo disponible para el comportamiento sexual. Esta convergencia permite un rápido aislamiento e interrogatorio de pequeñas poblaciones neuronales con funciones específicas de motivación. A continuación detallamos el diseño y ejecución del ensayo de saciedad que se utiliza para medir la motivación y alterar el cortejo en la mosca macho. Usando estoensayo, también demostramos que la unidad de apareamiento masculino baja puede ser superada mediante la estimulación de las neuronas dopaminérgicas. El ensayo de saciedad es simple, asequible y robusta a las influencias de los antecedentes genéticos. Esperamos que el ensayo de saciedad para generar muchos nuevos conocimientos sobre la neurobiología de los estados motivacionales.

Para la caracterización de la unidad de apareamiento de Drosophila, 3 días de edad, WT Cantón-S machos se probaron en un ensayo de saciedad 2-D. En el transcurso del ensayo (4,5 h), los machos se aparean un promedio de 4,8 ± 0,3 (media ± error estándar de la media, SEM) veces. Apareamientos inician sobre todo en las primeras 2 h (78%) (Figura 6A, 6B) y se vuelven menos frecuentes a medida que avanza el ensayo (Figura 6A, 6B). Esta disminuc...

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Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

En este artículo se describe un ensayo de comportamiento que utiliza la unidad de apareamiento masculino en Drosophila melanogaste R a estudiar la motivación. Usando este método, los investigadores pueden utilizar técnicas de neurogenéticas mosca avanzada para descubrir los mecanismos genéticos, moleculares y celulares que subyacen a esta motivación.

La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

11.0K vistas.  Boston Children’s Hospital.  En este artículo se describe un ensayo de comportamiento que utiliza la unidad de apareamiento masculino en Drosophila melanogaste R a estudiar la motivación. Usando este método, los investigadores pueden utilizar técnicas de neurogenéticas mosca avanzada para descubrir los mecanismos genéticos, moleculares y celulares que subyacen a esta motivación. 

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Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are also a useful scientific model to study motion vision and flight dynamics in a controlled laboratory setting. As the larvae develop in organically polluted water, they are useful models for investigating investment in microbial immunity. While large scale commercial breeding for agriculture already occurs, there are no standardized protocols for maintaining captive populations for scientific studies. This is important as commercial captive breeding programs focusing on mass output during peak pollination periods may fail to provide a population that is consistent, stable and robust throughout the year, as is often needed for other research purposes. Therefore, a method to establish, maintain and refresh a captive research population is required. Here, we describe the utilization of an artificial hibernation cycle, in addition to the nutritional and housing requirements, for long term maintenance of Eristalis tenax. Using these methods, we have significantly increased the health and longevity of captive populations of E. tenax compared to previous reports. We furthermore discuss small scale rearing methods and options for optimizing yields and manipulating population demographics.

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

The overall goal of these procedures is to establish, maintain and refresh a captive population of Eristalis tenax in a research setting.

Cría y el mantenimiento a largo plazo de Eristalis tenax Tamaki para estudios de investigación

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

Investigación

Medio ambiente

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Un método para probar el efecto de las señales ambientales sobre el comportamiento de apareamiento en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Comportamiento

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Métodos de ensayo a Drosophila Comportamiento

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Neurociencias

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Ensayo sencillo para cuantificación de Prevención Social en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Teñido Insectos de la Conducta ensayos: el comportamiento de apareamiento de anestesiada<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Condiciones que afectan Espacio Social en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

Un nuevo enfoque que elimina el manejo para el estudio de la agresión y el efecto &quot;Loser&quot; en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Una manera sencilla de medir alteraciones en el comportamiento de búsqueda de recompensa Uso<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Drosophila condicionamiento del corte como una medida de aprendizaje y memoria

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the number of successful mating events rather than on maximizing survival and viability 1. Sperm competition represents the competition between males after copulating with the same female 2, in which their sperm are coincidental in time and space. This phenomenon has been reported in multiple species of plants and animals 3. For example, wild-caught D. melanogaster females usually contain sperm from 2-3 males 4. The sperm are stored in specialized organs with limited storage capacity, which might lead to the direct competition of the sperm from different males 2,5.
Comparing sperm competitive ability of different males of interest (experimental male types) has been performed through controlled double-mating experiments in the laboratory 6,7. Briefly, a single female is exposed to two different males consecutively, one experimental male and one cross-mating reference male. The same mating scheme is then followed using other experimental male types thus facilitating the indirect comparison of the competitive ability of their sperm through a common reference. The fraction of individuals fathered by the experimental and reference males is identified using markers, which allows one to estimate sperm competitive ability using simple mathematical expressions 7,8. In addition, sperm competitive ability can be estimated in two different scenarios depending on whether the experimental male is second or first to mate (offense and defense assay, respectively) 9, which is assumed to be reflective of different competence attributes.
Here, we describe an approach that helps to interrogate the role of different genetic factors that putatively underlie the phenomenon of sperm competitive ability in D. melanogaster.

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Differential sperm competitive ability among Drosophila males with distinct genotypes can be ascertained through double-mating experiments. Each of these experiments involves one of the males of interest and a reference male. Readily identifiable markers in the progeny allow inference of the fraction of individuals fathered by each male.

Diferencias Evaluación de Capacidad Competitiva de espermatozoides en<em&gt; Drosophila</em

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the ...

La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male

Resumen

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