Todos los protocolos han sido aprobados por el institucional Animal Care y el Comité uso (IACUC) por el búfalo de la Universidad Estatal de Nueva York. Una ilustración de la metodología que representa la invasión y la monitorización no invasiva se muestra en la figura 1.
1. los animales
<ol><li>Uso tiempo fecha, fiebre Q seronegativos, embarazadas ovejas (raza mezclada, Suffolk-Dorset-Katahdin raza) con corderos fetales en la gestación de 127 – 143 días. Nota: La gestación de término de ovejas es de 145 días y 127 de la gestación de corderos se comportan como prematuros extremos.</li>
</ol>2. pre-operatorio preparación
<ol><li>Retener el alimento de la oveja 12 h antes de la cirugía.</li>
	<li>Sedar a la oveja con diazepan intravenoso (IV) (0.25-1.5 mg/kg) y ketamina (4 mg/kg).</li>
	<li>Guía de la oveja en recumbency lateral en un carro de elevación.</li>
	<li>Hacia la oveja recumbency dorsal sobre una mesa quirúrgica de V.</li>
</ol>3. anestesia
Nota: Antes de la cesárea, la oveja es sedada con diazepam y ketamina e intubada seguido por la inhalación continua de isoflurano (1-4%). Adecuación de la anestesia es supervisado por la evaluación de los reflejos de tono y ojo músculo junto con el monitoreo continuo del nivel de oxígeno de la sangre con un oxímetro de pulso y el ritmo cardíaco. Durante la instrumentación, será bajo la influencia de la anestesia materna y recibirá anestesia local para sitios de instrumentación.
<ol><li>
Intubación la oveja con un tubo endotraqueal de 10,0 mm manguito (ETT). Avance de la ETT a través de las voces cuerdas 1-2 cm más allá de la banda. Inflar el manguito ETT y atar la ETT alrededor de la mandíbula de la oveja para asegurarlo en su lugar.
	<ol>
<li>Cuando la respuesta palpebral está ausente, ajustar el isoflurano (2 – 3% es suficiente).</li>
		<li>Proporcionar respiración artificial por la ventilación mecánica convencional (VMC) con una fracción de oxígeno inspirado (FIO2) de 0,21. Conjunto del ventilador para proporcionar volúmenes corrientes de 10-15 mL/kg.</li>
		<li>Monitorear continuamente la saturación de oxihemoglobina mediante un oxímetro de pulso colocado en la lengua de la oveja.</li>
		<li>Medir el dióxido de carbono (EtCO2) fin-de marea con un capnógrafo.</li>
		<li>Ajustar la FIO2 y CMV para mantener la saturación de oxihemoglobina entre 90-97% y de CO espirado2 entre 35 – 45 mm Hg, respectivamente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Garantizar miembros de oveja a la mesa quirúrgica con amarre quirúrgico.
	<ol>
<li>Ajuste la mesa quirúrgica para invertir la posición de Trendelenburg para aliviar la presión sobre el feto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque un tubo orogástrico para descomprimir y drenar el contenido gástrico.</li>
	<li>Suplemento líquido IV (solución salina normal o solución de timbres de lactato) a 10 mL/kg/h.</li>
	<li>Colocar una sonda de temperatura rectal para obtener temperatura continua.</li>
</ol>4. cirugía
Nota: Los procedimientos fetales y cesárea se consideran cirugías agudas en la que los animales son sacrificados mediante la administración IV de 100 mg/kg de pentobarbital de sodio. Las ovejas son sacrificadas después de la entrega de los corderos y los corderos son sacrificados después de la realización de los experimentos. Eutanasia es confirmada por asistolia. También se emplea un método secundario de toracotomía bilateral o exsanguinación. En este caso, la técnica aséptica no se practica durante la cirugía. Personal todavía necesita usar vestimenta de protección durante el contacto animal.
<ol><li>Afeitarse la lana del abdomen ventral.</li>
	<li>
Utilizar el cauterio para hacer una incisión abdominal superficial de 15 – 18 cm sobre la linea alba para exponer la fascia.
	<ol>
<li>Crear una pequeña abertura en el abdomen usando presión con una pinza con punta Roma.</li>
		<li>Mantener esta apertura mientras desliza una tijera con punta Roma en la pared abdominal.</li>
		<li>Utilice las tijeras para completar la incisión de la línea alba.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Localice y exteriorizar la cabeza fetal dentro del útero desde el abdomen.
	<ol>
<li>Mantenga la cabeza fetal con una mano y usar el cauterio para hacer una incisión de 10 cm a través de la pared uterina (en frente del cordero). Asegúrese de evitar cualquier cotiledones.</li>
		<li>Utilizar pinzas de Babcock para apretar las capas del útero y la placenta juntos en cuatro esquinas opuestas.</li>
		<li>Exponer la cabeza del cordero a través del útero y fuera del abdomen de la oveja.</li>
		<li>Deje las pinzas de Babcock tendido fuera del abdomen durante la cirugía fetal.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. vía aérea fetal
<ol><li>
Intubación parcialmente expuesta cordero fetal de 3.5 – 4.5 mm manguito ETT. Avanzar en la ETT a través de las cuerdas vocales 1 cm más allá de la banda.
	<ol>
<li>Inflar el manguito y asegure la ETT atando una cinta umbilical alrededor del tubo y luego alrededor de la cabeza.</li>
		<li>Deje que el fluido pulmonar fetal exceso en la ETT para drenar pasivamente inclinando la cabeza hacia el lado. Esto simula la salida del líquido pulmonar durante el parto.</li>
		<li>Ocluir la ETT para evitar intercambio de gases durante el jadeo en el período de asphyxial.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. cuello barco instrumentación
<ol><li>
Afeitarse la lana e infiltrarse en 1 – 2 mL de clorhidrato de bupivacaína subcutánea (0.25%) en todos los sitios de incisión.
	<ol>
<li>Hacer dos incisiones de piel de 3 cm a cada lado del cuello (aproximadamente de 6 cm distal a la cabeza) adyacente a la tráquea. Las incisiones deben transversales del cuello.</li>
		<li>Realizar la incisión con el cauterio y acampar la piel, para evitar lacerar el tejido profundo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Separar la fascia con pinzas de Kelly o mosquito curvadas.</li>
	<li>
Aislar la vena yugular interna derecha y la arteria carótida común derecha.
	<ol>
<li>Lugar dos 20 cm, las suturas de seda 0 en ambos vasos.</li>
		<li>Dejar un espacio (proximal a distal) de 1 cm entre las suturas de seda.</li>
		<li>Levante con cuidado cada sutura que rodea el vaso, superficialmente, a restringir el flujo sanguíneo y a hacer un corte transversal de 1 – 2 mm en el vaso usando una tijeras quirúrgicas Iris.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
De la arteria carótida, inserte un catéter previamente enrojecida (15 – 17 G) en la arteria carótida derecha caudalmente hacia el arco aórtico para control de presión arterial y tomar muestras de sangre.
	<ol>
<li>Utilizar la ligadura proximal para ligar la arteria completamente.</li>
		<li>Repita los pasos 6.3.2 - 6.3.3.</li>
		<li>Inserte el catéter arterial carótido previamente enjuagado y utilizar la sutura distal de seda para atar alrededor de la arteria y el catéter con 3 nudos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uso una técnica similar, para insertar un catéter previamente enrojecida (14 – 16 G) en la vena yugular, repita los pasos 6.3.2–6.3.3, avance 7 – 10 cm caudalmente para descansar dentro de la entrada torácica (hacia la aurícula derecha). Esto se utiliza para administración de fluidos y medicación así como las mediciones de la presión venosa.<ol>
<li>Revise el catéter permeabilidad con solución salina heparinizada y luego completa el lazo de sutura alrededor de la embarcación y el catéter (con la sutura proximal) usando 2-3 nudos.</li>
		<li>Inserte el segundo catéter (14 – 16 G) aproximadamente 5 cm rostral para recolectar sangre de la circulación cerebral. Usar el mismo corte para la colocación de dos catéteres.</li>
		<li>Repita el paso 6.5.1 lo que respecta a la sutura distal y el catéter y luego atar las suturas de seda alrededor de las líneas opuestas de catéter para fijarlos en su lugar para evitar la torsión.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Extender la incisión previamente hecha en una forma de T (1-2 cm) en el lado izquierdo.
	<ol>
<li>Elevar la arteria carótida izquierda mediante un hemostato curvo abierto.</li>
		<li>Lugar una sonda de flujo 2 mm perivascular alrededor de la nave para medir el flujo de sangre.</li>
		<li>Cubierta de la sonda de flujo con una funda de polímero flexible de 1 cm para estabilizar la sonda en posición.</li>
		<li>Coloque la línea de cable de sonda de flujo en la incisión en forma de T, permitiendo que el cable de paralelo con el buque.</li>
		<li>Cerrar la incisión de la piel. Atar alrededor del cable y alrededor de un lazo de cable, para evitar restringir el flujo si.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. gran vaso instrumentación
<ol><li>Extraer el cordero fetal para exponer el pecho y cubrir la piel expuesta con envoltura de polietileno para evitar pérdida de calor.</li>
	<li>Colocar el cordero en recumbency lateral derecho.</li>
	<li>Posición del miembro anterior izquierdo alrededor del cuello para exponer el campo quirúrgico.</li>
	<li>
Infiltrarse en 3 mL de bupivacaína clorhidrato (0,25%) a lo largo de los 4 espacio intercostalth y haga una incisión de piel de 6 cm con el cauterio.
	<ol>
<li>Cuidadosamente perforar el músculo intercostal con pinzas curvas contundentes, círculo debajo de la costilla 3rd y salir entre el siguiente espacio intercostal. Asegúrese de no dañar el pulmón o el corazón.</li>
		<li>Abra la pinza para una pieza corta de seda 0 y pase a través para rodear a la costilla.</li>
		<li>Repita los pasos 7.4.1–7.4.2 para asegurar la sutura en el 4th costilla.</li>
		<li>Amarrar los lazos alrededor de cada costilla. Suavemente tire e insertar un aplicador con punta de algodón en el pecho bajo el 4 espacio intercostal de lath .</li>
		<li>Use el aplicador para proteger el contenido del pecho mientras utiliza la cauterización para abrir el espacio intercostal en 1 cm para una abertura final de 6-8 cm. Asegúrese de que el pulmón no es atrapado en los lazos de la costilla.</li>
		<li>Coloque un separador costilla en la abertura del pecho. Abrir el pecho revelará los lóbulos superiores izquierdos del pulmón, la arteria pulmonar principal (PA) y el conducto arterioso.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Utilizar gasas de 2 x 2 pulgadas que envuelve el pulmón y empuje suavemente cualquier tejido expuesto fuera de la zona quirúrgica.
	<ol>
<li>Usar un retractor manual pequeño para mejorar el campo de visión (si es necesario).</li>
		<li>Lugar una cinta umbilical (anchura de 1/4 pulgadas, 6 pulgadas de longitud) previamente remojados amnion alrededor de los grandes vasos. Remojo la cinta umbilical disminuye la fricción (y daño) en las paredes del recipiente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Con unas pinzas, levantar el pericardio y cortar a lo largo de la arteria pulmonar principal, teniendo cuidado de no para cortar el nervio vagal. Utilizar una varilla aplicadora para mantener a la aurícula derecha de interferir con un corte lateral del pericardio a lo largo del nervio vagal.</li>
	<li>
Con unas pinzas de Géminis, mover las pinzas lentamente desde la muesca ductal/PA alrededor y detrás del izquierda PA que "rodean" y emergen en el otro lado del izquierda PA. Muchos tejidos delicados bajo esta área y proceden sólo si no hay ninguna resistencia.
	<ol>
<li>Cuando se observa la punta de las pinzas, abierta solamente lo suficiente para agarrar uno de los extremos de la cinta umbilical previamente humedecida. Abrazadera con 1 posición haga cliqueada en el lugar. Es posible que tejido circundante podría ser atrapado en las pinzas, y si bien afianzado con abrazadera ese tejido puede ser cogido con la cinta umbilical, lesiones de vasos.</li>
		<li>Suavemente se retiran las pinzas para tirar de la cinta en posición. Esto sirve para abrir un espacio para la sonda de flujo y ayuda a dirigir la inserción de las sondas de flujo (figura 2). Cuidado para proteger la ranura porción de cualquier barco es imprescindible ya que es la parte más frágil del tejido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Coloque una de 4 – 6 mm perivascular flujo-sonda suavemente levantando la cinta umbilical y guiando la parte metálica (soporte) de la sonda alrededor de la nave a lo largo de la apertura establecida.
	<ol>
<li>Directa de la cinta hacia la parte posterior de la sonda para ayudar a la nave en el lugar de asiento y a visualizar el final del L soporte permitiendo el cierre deslizante para fijarse.</li>
		<li>Asegúrese de que el buque es > 75% del tamaño de la punta de prueba para asegurar un flujo forma y preciso medidas.</li>
		<li>Cuidadosamente corte el extremo de la cinta umbilical cerca de la sonda y tire el otro extremo para retirar la cinta de la nave. La cinta va a interferir con las mediciones si no se.</li>
		<li>Aplique el gel de ultrasonido y ajustar la posición de la sonda y el cable para mejorar la calidad y la intensidad de la señal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Repita los pasos 7.6 – 7.7.4 lo que respecta a la colocación de una sonda 6-8 mm perivascular flujo por el ductus arterioso.</li>
	<li>Saque cualquier gasa 2 x 2 protector del tórax y el pulmón se vuelva a colocar.</li>
	<li>Colocar una nueva gasa 2 x 2 alrededor de cada soporte metálico de la sonda de flujo para proteger el pulmón.</li>
	<li>Cerrar el pecho en capas usando una aguja cónica y sutura de monofilamento sintético 2.0. Asegure los cables de las sondas de flujo a la piel externa con un bucle usando una aguja de corte y sutura de seda 2.0.</li>
</ol>8. no-medición invasiva
<ol><li>Conecte los conductores de EKG en el axilla derecho, axila izquierda y área inguinal correcta (ECG de tres derivaciones). Saturación de oxihemoglobina arterial pre y post ductal (SpO2) se controla con un oxímetro de pulso colocado en la extremidad delantera derecha y sea trasera, respectivamente. Fije a un monitor de espectroscopia de infrarrojo cercano (NIRS) en la frente con las suturas y un vendaje opaco.</li>
</ol>9. recolección de datos
<ol><li>Recoger y registrar datos utilizando un software de adquisición de datos. La figura 1 ilustra los parámetros invasivos y no invasivos incluyendo: presión de la sangre venosa central y arterial, flujo de sangre arterial pulmonar y ductal izquierda, carótida común izquierda, ECG, SpO2, NIRS, ETCO2. Nota: La configuración de software y equipo para colección de datos puede variar y está fuera del alcance de este artículo.</li>
</ol>10. protocolo experimental
<ol><li>Ocluir y corte el cordón umbilical y hacia el cordero desde el abdomen materno un calentador radiante.</li>
	<li>Durante el período de asphyxial, inserte un catéter umbilical venoso para la administración de epinefrina (0.01 – 0.03 mg/kg IV, según las recomendaciones de NRP).</li>
	<li>Insertar un catéter arterial umbilical para recoger gases de sangre arterial post ductal.</li>
	<li>Supervisar el cordero para asistolia inminente, que puede definirse como la ausencia de flujo detectado de la carótida y la presión.</li>
	<li>Garantizar la adecuada personal y dedicar a cada persona a las siguientes tareas: (1) manejo de ventilación y las vías respiratorias (2) realice las compresiones, (3) administrar medicamentos, (4) extraer muestras de sangre, (5) llevar el código.</li>
	<li>Iniciar reanimación proporcionando ventilación con presión positiva (PPV) con un resucitador de pieza en T con presiones de 35/5 cm H2O. iniciar el temporizador de 20 minutos para el protocolo de reanimación experimental.</li>
	<li>
Después de 30 s de ventilación, iniciar compresiones de pecho colocando el pulgar y los dedos de una mano en los lados opuestos del pecho.
	<ol>
<li>Proporcionar compresiones apretando los dedos y pulgar juntos a una profundidad de aproximadamente 1/3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Administrar epinefrina a intervalos de 3 minutos.</li>
	<li>Continuar con los esfuerzos de reanimación hasta el regreso de la circulación espontánea o hasta 20 minutos.</li>
	<li>En el retorno de la circulación espontánea, líquidos IV continuadas (5 cc/kg/hr) y fentanilo (0.5-2.0 mcg/kg/hr; valorada al efecto), se dan a través del catéter venoso yugular previamente establecido. Después del período de resucitación de 20 minutos, el animal es eutanasia. Si los corderos no alcanzan ROSC por 20 min, proceder con la eutanasia.</li>
</ol>

<ol>
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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pulmonary+vascular+response+to+oxygen.">Development of pulmonary vascular response to oxygen.</a> Am J Physiol. 254 (3 Pt 2), H542-H546 (1988).</li><li>Rawat, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+resuscitation+adhering+to+oxygen+saturation+guidelines+in+asphyxiated+lambs+with+meconium+aspiration.">Neonatal resuscitation adhering to oxygen saturation guidelines in asphyxiated lambs with meconium aspiration.</a> Pediatr Res. , (2015).</li><li>Chandrasekharan, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+End-Tidal+Carbon+Dioxide+Monitoring+during+Resuscitation+of+Asphyxiated+Term+Lambs.">Continuous End-Tidal Carbon Dioxide Monitoring during Resuscitation of Asphyxiated Term Lambs.</a> Neonatology. 109 (4), 265-273 (2016).</li><li>Lakshminrusimha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+suctioning+improves+gas+exchange+but+not+hemodynamics+in+asphyxiated+lambs+with+meconium+aspiration.">Tracheal suctioning improves gas exchange but not hemodynamics in asphyxiated lambs with meconium aspiration.</a> Pediatr Res. 77 (2), 347-355 (2015).</li><li>Meuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+surgery+rescues+neurological+function+at+birth+in+sheep+with+spina+bifida.">In utero surgery rescues neurological function at birth in sheep with spina bifida.</a> Nat Med. 1 (4), 342-347 (1995).</li><li>Meuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+myelomeningocele+in+utero:+a+model+of+functional+damage+from+spinal+cord+exposure+in+fetal+sheep.">Creation of myelomeningocele in utero: a model of functional damage from spinal cord exposure in fetal sheep.</a> J Pediatr Surg. 30 (7), 1028-1032 (1995).</li><li>Adzick, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+congenital+diaphragmatic+hernia+in+utero.+IV.+An+early+gestational+fetal+lamb+model+for+pulmonary+vascular+morphometric+analysis.">Correction of congenital diaphragmatic hernia in utero. IV. An early gestational fetal lamb model for pulmonary vascular morphometric analysis.</a> J Pediatr Surg. 20 (6), 673-680 (1985).</li><li>Harrison, M. R., Bressack, M. A., Churg, A. M., de Lorimier, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+congenital+diaphragmatic+hernia+in+utero.+II.+Simulated+correction+permits+fetal+lung+growth+with+survival+at+birth.">Correction of congenital diaphragmatic hernia in utero. II. Simulated correction permits fetal lung growth with survival at birth.</a> Surgery. 88 (2), 260-268 (1980).</li><li>Turley, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrauterine+cardiothoracic+surgery:+the+fetal+lamb+model.">Intrauterine cardiothoracic surgery: the fetal lamb model.</a> Ann Thorac Surg. 34 (4), 422-426 (1982).</li><li>Reddy, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+placement+of+aortopulmonary+shunts.+A+model+of+postnatal+pulmonary+hypertension+with+increased+pulmonary+blood+flow+in+lambs.">In utero placement of aortopulmonary shunts. A model of postnatal pulmonary hypertension with increased pulmonary blood flow in lambs.</a> Circulation. 92 (3), 606-613 (1995).</li><li>Hemway, R. J., Christman, C., Perlman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3:1+is+superior+to+a+15:2+ratio+in+a+newborn+manikin+model+in+terms+of+quality+of+chest+compressions+and+number+of+ventilations.">The 3:1 is superior to a 15:2 ratio in a newborn manikin model in terms of quality of chest compressions and number of ventilations.</a> Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 98 (1), F42-F45 (2013).</li><li>Solev&#229;g, A. L., Schm&#246;lzer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+Chest+Compression+Rate+and+Compression+to+Ventilation+Ratio+in+Delivery+Room+Resuscitation:+Evidence+from+Newborn+Piglets+and+Neonatal+Manikins.">Optimal Chest Compression Rate and Compression to Ventilation Ratio in Delivery Room Resuscitation: Evidence from Newborn Piglets and Neonatal Manikins.</a> Frontiers in Pediatrics. 5 (3), (2017).</li><li>Solev&#229;g, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chest+compressions+in+newborn+animal+models:+A+review.">Chest compressions in newborn animal models: A review.</a> Resuscitation. 96, 151-155 (2015).</li></ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses

El modelo de cordero es comparable en tamaño a los recién nacidos humanos y permite fácil instrumentación para medir las variables hemodinámicas invasivas. El modelo fetal, recién nacido Cordero ha sido una herramienta invaluable que rico ha contribuido a entender la transición de la circulación, así como la fisiología pulmonar y cardiovascular del recién nacido. Varios modelos experimentales de cordero se han establecido durante los años para estudiar estrategias de ventilación óptima en prematuros cordero...

Asfixia perinatal ocurre en aproximadamente 4 por cada 1.000 nacidos de término en los Estados Unidos y es responsable de aproximadamente el 25% de los 4 millones de muertes neonatales en todo el mundo1,2. A lo largo del desarrollo natural del feto, varias adaptaciones deben ocurrir durante el parto y al nacimiento para permitir una transición sin problemas desde el intra - al ambiente extrauterino cuando los pulmones toman el papel de la placenta como órgano de intercambio gaseoso. Cualquier falla del recién nacido a la adecuada transición al nacer más compromete esfuerzos de resucitación. Casos al pulmón fetal es incompleta o retrasada3,4y las circunstancias que resultan en un impacto de5 de la resistencia vascular pulmonar alta persistente (PVR) la eficacia de la ventilación, que sigue siendo el más intervención importante en la reanimación de los recién nacidos asfixiados6. Además, el pinzamiento inmediato del cordón umbilical y extracción de la placenta de baja resistencia puede conducir a cambios bruscos en volumen cardiaco que puede causar la disfunción miocardio7,8.
Debido a la frecuente necesidad de resucitación agresiva (necesidad de compresiones o administración de epinefrina)1,9, hay una falta de evidencia fuerte de grandes ensayos clínicos para apoyar la corriente requisitos del programa (PNR) de la reanimación neonatal. Muchos estudios de investigación traslacional en la reanimación neonatal son efectuados por el postnatales modelos animales (especialmente cerdos) que no representan adecuadamente la transición de circulación fetal y en los pulmones llenos de líquido inherentes al recién nacido en la entrega habitación. Dado los desafíos relacionados con la transición de circulación fetal a la circulación neonatal, el modelo de cordero fetal cardiaco asfixia perinatal es ideal para estudiar la fisiología de resucitación neonatal.
Los estudios de Joseph Barcroft en fetal corderos, ya en la década de 1930, sentó las bases de fisiología fetal y neonatal10. En la segunda mitad delsiglo 20 , experimentos innovadores y meticulosos de Geoffrey Dawes en fetal cordero modelos, y más adelante ésos por Abraham Rudolph han contribuido enormemente al conocimiento de la fisiología cardiovascular y pulmonar en el feto 11 , 12. en los últimos años, estudios en modelos de cordero fetal y neonatal han proporcionado una mejor comprensión del impacto de la ventilación sobre la hemodinámica13,14, los efectos de la oxigenación en PVR15,16, así como de los cambios circulatorios que ocurren durante el cable de sujeción de7,17. Finalmente, en el último año, el cordero recién nacido ha servido como un modelo novedoso para el estudio de los efectos hemodinámicos durante la resucitación18,19,20. Un relato paso a paso de lo que está implicado en la realización de un experimento de cordero, así como una descripción detallada de la instrumentación quirúrgica y se presentará la metodología experimental.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="819">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Babcock forceps</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>16-44</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Blood pressure transducer</td>
			<td style="width:192px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:211px;">P23XL-1</td>
			<td style="width:200px;">Used with saline filled diaphragm domes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blunt tipped scissors</td>
			<td style="width:192px;">Miltex</td>
			<td style="width:211px;">98SCS50-56</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Capnograph</td>
			<td style="width:192px;">Philips</td>
			<td style="width:211px;">7900</td>
			<td style="width:200px;">Used with Neonatal Flow Sensors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cautery pencil</td>
			<td style="width:192px;">Valley Lab</td>
			<td style="width:211px;">287879</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cautery unit</td>
			<td style="width:192px;">Valley Lab</td>
			<td style="width:211px;">SSE2K</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Curved Forceps</td>
			<td style="width:192px;">Everost</td>
			<td style="width:211px;">711714</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Data acquisition software</td>
			<td style="width:192px;">Biopac Systems Inc.</td>
			<td style="width:211px;">ACK100W</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EKG</td>
			<td style="width:192px;">Biopac Systems Inc.</td>
			<td style="width:211px;">ECG100C</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Endotracheal tube -cuffed</td>
			<td style="width:192px;">Rusch</td>
			<td style="width:211px;">111780035</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Flow modulator</td>
			<td style="width:192px;">Transonic Systems Inc.&#160;</td>
			<td style="width:211px;">T403</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Flow-probe</td>
			<td style="width:192px;">Transonic Systems Inc.&#160;</td>
			<td style="width:211px;">MC4PSS-LS-WC100-CM4B-GA</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gastric tube</td>
			<td style="width:192px;">Jorgensen Labs Inc.</td>
			<td style="width:211px;">J0106LE</td>
			<td style="width:200px;">To decompress and drain ewe stomach</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hair clipper</td>
			<td style="width:192px;">Andis Company</td>
			<td style="width:211px;">65340</td>
			<td style="width:200px;">&#160;# 40 Clipper Blade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Infant radiant warmer</td>
			<td>GE healthcare</td>
			<td>7810</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Intravenous catheters</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>381234</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Iris surgical scissors</td>
			<td style="width:192px;">Patterson</td>
			<td style="width:211px;">510585</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kelly Foreceps</td>
			<td style="width:192px;">Patterson</td>
			<td style="width:211px;">510535</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mosquito Forceps</td>
			<td style="width:192px;">RICA Surgical Products INC</td>
			<td style="width:211px;">1-74</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Near-infrared spectroscopy</td>
			<td style="width:192px;">Nonin Medical Inc.&#160;</td>
			<td style="width:211px;">X-100M</td>
			<td style="width:200px;">Sensmart Equanox &#38; PureSAT</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RSO2 Sensor</td>
			<td style="width:192px;">Nonin Medical Inc.&#160;</td>
			<td style="width:211px;">8004CB-NA</td>
			<td style="width:200px;">Neonatal&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel handle and blade</td>
			<td style="width:192px;">Everost</td>
			<td>707203</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sutures -silk 2-0</td>
			<td style="width:192px;">Covidien</td>
			<td style="width:211px;">SS-695</td>
			<td style="width:200px;">Used for tying catheters to vessels</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sutures -vicryl&#160; 2-0</td>
			<td style="width:192px;">Ethicon</td>
			<td style="width:211px;">J269H</td>
			<td style="width:200px;">Used for closing thoracotomy&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">T-piece resuscitator</td>
			<td>Neo-Tee</td>
			<td>MCM1050812</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Umbilical ties</td>
			<td style="width:192px;">Jorgensen Labs Inc.</td>
			<td>J0025UA</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Weitlander Retractor</td>
			<td style="width:192px;">Miltex</td>
			<td style="width:211px;">11-625</td>
			<td style="width:200px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the perinatal asphyxiated lamb model: a model for newborn resuscitation

Asfixia del nacimiento representa casi 1 millón de muertes en todo el mundo cada año y es una de las principales causas de mortalidad y morbilidad neonatal temprana. Muchos aspectos de las pautas actuales de reanimación neonatal siguen siendo polémicos dadas las dificultades en la realización de ensayos clínicos aleatorios debido a la infrecuente y a menudo imprevisible necesidad de resucitación amplia. Mayoría de los estudios en la reanimación neonatal se derivan de modelos maniquí que no verdaderamente reflejar cambios fisiológicos o cochinillo modelos que han limpiado su líquido pulmonar y que han completado la transición de feto a la circulación neonatal. El presente Protocolo proporciona una descripción detallada paso a paso sobre cómo crear un modelo de cordero fetal asfixia perinatal. El modelo propuesto tiene una transición de la circulación y los pulmones llenos de líquido, que imita humanos recién nacidos después del nacimiento y es, por tanto, un excelente modelo animal para estudiar la fisiología del recién nacido. Una importante limitación a los experimentos de cordero es el mayor costo asociado.

Después de la instrumentación de los corderos fetales, variables hemodinámicas pueden ser registrados (figura 3 y figura 4), analizaron e interpretaron (figura 5). Se recogerán muestras de sangre frecuentes, y la figura 6 muestra el pH y la PaCO2 datos de uno de los experimentos. En ocasiones, catéteres o sondas de flujo pueden funcionar mal o conseguirá...

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The Perinatal Asphyxiated Lamb Model: A Model for Newborn Resuscitation

Instrumentación invasiva del cordero fetal proporciona mediciones precisas fisiológicas de la circulación de transición en un modelo que imita muy de cerca al bebé recién nacido.

La Perinatal asfixia cordero modelo: Un modelo para la reanimación de recién nacido

Birth asphyxia accounts for nearly one million deaths worldwide each year, and is one of the primary causes of early neonatal morbidity and mortality. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

10.7K vistas.  University of California Davis. Instrumentación invasiva del cordero fetal proporciona mediciones precisas fisiológicas de la circulación de transición en un modelo que imita muy de cerca al bebé recién nacido.

Video: The Perinatal Asphyxiated Lamb Model: A Model for Newborn Resuscitation

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Arresto normotérmica cardiaca y reanimación cardiopulmonar: un modelo de ratón de la lesión por isquemia-reperfusión

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Investigación

Medicina

A Rat Model of Ventricular Fibrillation and Resuscitation by Conventional Closed-chest Technique

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic components of cardiopulmonary resuscitation in humans is herein described. The model was developed in 1988 and has been used in approximately 70 peer-reviewed publications examining a myriad of resuscitation aspects including its physiology and pathophysiology, determinants of resuscitability, pharmacologic interventions, and even the effects of cell therapies. The model featured in this presentation includes: (1) vascular catheterization to measure aortic and right atrial pressures, to measure cardiac output by thermodilution, and to electrically induce ventricular fibrillation; and (2) tracheal intubation for positive pressure ventilation with oxygen enriched gas and assessment of the end-tidal CO2. A typical sequence of intervention entails: (1) electrical induction of ventricular fibrillation, (2) chest compression using a mechanical piston device concomitantly with positive pressure ventilation delivering oxygen-enriched gas, (3) electrical shocks to terminate ventricular fibrillation and reestablish cardiac activity, (4) assessment of post-resuscitation hemodynamic and metabolic function, and (5) assessment of survival and recovery of organ function. A robust inventory of measurements is available that includes &#8211; but is not limited to &#8211; hemodynamic, metabolic, and tissue measurements. The model has been highly effective in developing new resuscitation concepts and examining novel therapeutic interventions before their testing in larger and translationally more relevant animal models of cardiac arrest and resuscitation.

This article describes a rat model of electrically-induced ventricular fibrillation and resuscitation by chest compression, ventilation, and delivery of electrical shocks that simulates an episode of sudden cardiac arrest and conventional cardiopulmonary resuscitation. The model enables gathering insights on the pathophysiology of cardiac arrest and exploration of new resuscitation strategies.

Un modelo de rata de la fibrilación ventricular y Reanimación por Convencional cerrado pecho Técnica

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

Un modelo del cochinillo de Neonatología encefalopatía hipóxico-isquémica

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to establish human enteroid ex vivo culture systems are important to model intestinal pathophysiology and to study the particular cellular responses involved. In recent years, enteroids from mice and humans are being cultured, passaged, and banked away for future use in several laboratories across the world. This enteroid platform can be used to test the effects of various treatments and drugs and what effects are exerted on different cell types in the intestine. Here, a protocol for establishing primary stem cell-derived small intestinal enteroids derived from neonatal mice and premature human intestine is provided. Moreover, this enteroid culture system was utilized to test the effects of species-specific breast milk. Mouse breast milk can be obtained efficiently using a modified human breast pump and expressed mouse milk can then be used for further research experiments. We now demonstrate the effects of expressed mouse, human, and donor breast milk on the growth and proliferation of enteroids derived from neonatal mice or premature human small intestine.

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

This protocol describes how to establish an enteroid culture system from neonatal mouse or premature human intestine as well as an efficient method to collect milk from mice.

La leche materna mejora el crecimiento de Enteroids: un modelo Ex Vivo de la proliferación celular

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

The Lower Body Positive Pressure Treadmill for Knee Osteoarthritis Rehabilitation

Here, based on a clinician&rsquo;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in addition to a clinical, functional assessment methodology, including details for further encouragement of the development of non-drug surgical intervention strategies in knee osteoarthritis patients. However, we only present the effect of LBPP training in improvement of pain and knee function in one patient through three-dimensional gait analysis. The exact, long-term effects of this approach should be explored in future studies.

Here, based on a clinician&#8217;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in addition to a clinical, functional assessment methodology, including details for further encouragement of the development of non-drug surgical intervention strategies in knee osteoarthritis patients. However, we only present the effect of LBPP training in improvement of pain and knee function in one patient through three-dimensional gait analysis. The exact, long-term effects of this approach should be explored in future studies.

La cinta de correr de presión positiva del cuerpo inferior para la rehabilitación de la osteoartritis de rodilla

Here, based on a clinician&rsquo;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in ...

Noninvasive Electrocardiography in the Perinatal Mouse

Electrocardiography (ECG) has long been relied upon as an effective and reliable method of assessing cardiovascular (and cardiopulmonary) function in both human and animal models of disease. Individual heart rate, rhythm, and regularity, combined with quantitative parameters collected from ECG, serve to assess the integrity of the cardiac conduction system as well as the integrated physiology of the cardiac cycle. This article provides a comprehensive description of the methods and techniques used to perform a noninvasive ECG on perinatal and neonatal mouse pups as early as the first postnatal day, without requiring the use of anesthetics. This protocol was designed to directly address a need for a standardized and repeatable method for obtaining ECG in newborn mice. From a translational perspective, this protocol proves to be entirely effective for characterization of congenital cardiopulmonary defects generated using transgenic mouse lines, and particularly for analysis of defects causing lethality at or during the first postnatal days. This protocol also aims to directly address a gap in the scientific literature to characterize and provide normative data associated with maturation of the early postnatal cardiac conduction system. This method is not limited to a specific postnatal timepoint, but rather allows for ECG data collection in neonatal mouse pups from birth to postnatal day 10 (P10), a window that is of critical importance for modeling human diseases in vivo, with particular emphasis on congenital heart disease (CHD).

Here, we present a noninvasive electrocardiography (ECG) protocol, optimized for early postnatal mice, that does not require the use of anesthetics.

Electrocardiografía no invasiva en el ratón perinatal

Electrocardiography (ECG) has long been relied upon as an effective and reliable method of assessing cardiovascular (and cardiopulmonary) function in both ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.

Un modelo murino de exposición fetal a la inflamación materna para estudiar los efectos de la coleamnionitis aguda en el desarrollo intestinal neonatal

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Sterile Pericarditis in Aachener Minipigs As a Model for Atrial Myopathy and Atrial Fibrillation

Atrial fibrillation (AF) is the most common arrhythmia caused by structural remodeling of the atria, also called atrial myopathy. Current therapies only target the electrical abnormalities and not the underlying atrial myopathy. For the development of novel therapies, a reproducible large animal model of atrial myopathy is necessary. This paper presents a model of sterile pericarditis-induced atrial myopathy in Aachener minipigs. Sterile pericarditis was induced by spraying sterile talcum and leaving a layer of sterile gauze over the atrial epicardial surface. This led to inflammation and fibrosis, two crucial components of the pathophysiology of atrial myopathy, making the atria susceptible to the induction of AF. Two pacemaker electrodes were positioned epicardially on each atrium and connected to two pacemakers from different manufacturers. This strategy allowed for repeated non-invasive atrial programmed stimulation to determine the inducibility of AF at specified time points after surgery. Different protocols to test AF inducibility were used. The advantages of this model are its clinical relevance, with AF inducibility and the rapid induction of inflammation and fibrosis-both present in atrial myopathy-and its reproducibility. The model will be useful in the development of novel therapies targeting atrial myopathy and AF.

We describe a sterile pericarditis model in minipigs to study atrial myopathy and atrial fibrillation (AF). We present surgical and anesthetic techniques, strategies for vascular access, and a protocol to study the inducibility of AF.

Pericarditis estéril en minicerdos de Aachener como modelo para la miopatía auricular y la fibrilación auricular

Atrial fibrillation (AF) is the most common arrhythmia caused by structural remodeling of the atria, also called atrial myopathy. Current therapies only ...

Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers

In vitro scratch wound assays are commonly used to investigate the mechanisms and characteristics of epithelial healing in a variety of tissue types. Here, we describe a protocol to generate a two-dimensional (2D) monolayer from three-dimensional (3D) non-human primate enteroids derived from intestinal crypts of the terminal ileum. These enteroid-derived monolayers were then utilized in an in vitro scratch wound assay to test the ability of hyaluronan 35 kDa (HA35), a human milk HA mimic, to promote cell migration and proliferation along the epithelial wound edge. After the monolayers were grown to confluency, they were manually scratched and treated with HA35 (50 &#181;g/mL, 100 &#181;g/mL, 200 &#181;g/mL) or control (PBS). Cell migration and proliferation into the gap were imaged using a transmitted-light microscope equipped for live-cell imaging. Wound closure was quantified as percent wound healing using the Wound Healing Size Plugin in ImageJ.&#160;The scratch area and rate of cell migration and the percentage of wound closure were measured over 24 h. HA35 in vitro accelerates wound healing in small intestinal enteroid monolayers, likely through a combination of cell proliferation at the wound edge and migration to the wound area. These methods can potentially be used as a model to explore intestinal regeneration in the preterm human small intestine.

Effect of Hyaluronic Acid 35 kDa on an In Vitro Model of Preterm Small Intestinal Injury and Healing Using Enteroid-Derived Monolayers

This protocol describes a method to establish and perform a scratch wound assay on two-dimensional (2D) monolayers derived from three-dimensional (3D) enteroids isolated from non-human primate ileum.

Efecto del ácido hialurónico 35 kDa en un modelo in vitro de lesión prematura del intestino delgado y curación utilizando monocapas derivadas de enteroides

In vitro scratch wound assays are commonly used to investigate the mechanisms and characteristics of epithelial healing in a variety of tissue types. ...