Este método ayuda a determinar si las células tumorales invadieron más allá de la lámina elástica en el cáncer gástrico pT3. erosión de lamina elástica en el cuadro pronóstico para el cáncer gástrico pT3. La principal ventaja de esta técnica es que es conveniente, y un enfoque preciso para identificar la lámina elástica, lo que hace que sea más preciso para el patólogo evaluar si las células tumorales invaden más allá de la lámina elástica en el cáncer gástrico pT3.
Esta técnica puede ser hacia un diagnóstico patológico en estadio de cáncer de pulmón y cáncer. Este método también podría aplicarse al sistema de estadio TNM de cáncer de pulmón y cáncer colo-rectal. Primero, sumerge los portaobjetos en xileno en un tarro de Coplin durante 10 minutos.
Retire los portaobjetos de este frasco y sumerjalos en xileno fresco en un tarro de Coplin diferente durante otros 10 minutos. Sumerja los portaobjetos en 100% etanol durante cinco minutos y, a continuación, transfiéralos a 100% de etanol fresco durante otros cinco minutos. A continuación, sumerja las diapositivas en 95% etanol durante dos minutos.
Transfiera las diapositivas a un frasco que contenga 70% de etanol durante dos minutos. Después de esto, enjuague los portaobjetos brevemente con agua destilada en un frasco nuevo de Coplin. En primer lugar, utilice papel tisú para limpiar cualquier exceso de solución en la diapositiva o alrededor del tejido.
Coloque los portaobjetos en condiciones que coincidan con la temperatura ambiente y la humedad. Agregue unas gotas de permanganato de potasio a cada diapositiva para oxidarlos, asegurándose de que el volumen añadido sea suficiente para cubrir la sección de tejido en cada diapositiva. Después de cinco minutos, enjuague los portaobjetos oxidados con agua destilada en frascos de Coplin, repitiendo el enjuague de dos a tres veces y usando un frasco nuevo de agua para cada enjuague.
El tejido debe tener un color marrón observable. Ahora, agregue unas gotas de ácido oxálico a cada diapositiva para blanquearlos, asegurándose de que el volumen añadido es suficiente para cubrir la sección de tejido en cada diapositiva. Después de cinco minutos, enjuague los portaobjetos blanqueados con agua destilada, repitiendo el enjuague de dos a tres veces y usando un frasco nuevo de agua para cada enjuague.
Lave brevemente los portaobjetos en 95% de alcohol. Sumerja los portaobjetos lavados en solución de elastina durante ocho a 24 horas. A continuación, sumerja las diapositivas directamente en 95%etanol durante uno o dos minutos para diferenciar bien cada sección del tejido.
Enjuague los portaobjetos completamente con agua destilada. Compruebe microscópicamente la tinción de fibras elásticas azul-negro y el fondo gris. Contrate los portaobjetos en una solución van Gieson durante un minuto, asegurándose de que el volumen utilizado es suficiente para cubrir completamente la sección de tejido en cada diapositiva.
A continuación, baje rápidamente 95% de etanol sobre las rodajas de tejido durante unos segundos para diferenciar bien cada sección del tejido. Para empezar, sumerge los portaobjetos en 95% de alcohol durante cinco minutos para deshidratarlos rápidamente. Transfiera los portaobjetos al 100% de alcohol durante cinco minutos para continuar con la deshidratación.
Luego, transfiera los portaobjetos a alcohol 100% fresco durante cinco minutos adicionales. Sumerja las diapositivas en dos cambios diferentes de xileno con cada inmersión durando tres minutos. Después de esto, agregue una gota de medio de montaje resinoso a la diapositiva y coloque un resbalón de cubierta en la parte superior.
Usando un microscopio, observe las secciones del tejido como se describe en el protocolo de texto. En este estudio, la tinción elástica se utiliza para identificar visualmente la lámina elástica subserosal. Una tinción exitosa representativa revela que después de la tinción de la solución de elastina, pero antes de la contramancha de Van Gieson, la lámina elástica se puede ver claramente en forma de filamentos que se tiñen de color azul-negro.
Están cerca de las células mesoteliales serosales, y todavía se observa una cierta cantidad de distancia entre la lámina elástica y las células tumorales. Las manchas elásticas típicas con la contramancha de van Gieson demuestran que la lámina elástica está teñida de color azul-negro. Las fibras de colágeno se tiñen de rojo, y las fibras musculares y las células cancerosas se tiñen de amarillo.
Las células cancerosas que penetran la lámina elástica se consideran invasión elástica de láminas. Mientras que las células cancerosas que están cerca pero no invadiendo la lámina elástica se considera lamina elástica no invasión. Si la tinción revela una estructura repetitiva indicativa de múltiples capas de lámina elástica, y el tumor no invade más allá de la capa más externa, la muestra debe diagnosticarse como lámina elástica no invasión.
La solución de elastina es una y el tiempo de tinción es relativamente largo, por lo que es mejor sumergir todos los portaobjetos con la tinción de elastina en un recipiente sellado. Después de la tinción de la solución de elastina, se debe lavar con agua destilada.
