Este método puede ayudar a responder preguntas clave relacionadas con el control biológico de patógenos vegetales transmitidos por el suelo. El estándar de oro para probar materiales como el compost es tener un bioensayo vegetal para probar si es tóxico para las plantas. Sin embargo, eso toma tres semanas.
Este método se puede hacer en aproximadamente dos o tres días. La principal ventaja de esta técnica es que es simple, asequible y eficaz. Este ensayo es un cribado rápido de compost específico para suprimir el crecimiento de Rhizoctonia solani.
Sin embargo, este ensayo también se puede utilizar contra otros patógenos de plantas transmitidos por el suelo, como Fusariums, Pythiums, y Phytophthoras. La demostración visual de este método es fundamental porque tiene cuidado de aislar y mantener un cultivo puro de un hongo evitando la contaminación. Demostrando el procedimiento de aislamiento estará Taylor Readyhough, un estudiante graduado de mi laboratorio.
Emma Wright, una estudiante de pregrado de mi laboratorio, demostrará el ensayo de competencia. Para empezar, siembra semillas de rábano rojo en el suelo que se sabe que tienen antecedentes de enfermedad causada por R.solani. Después de tres a cuatro semanas, retire las plántulas del suelo y enjuáguelas con agua del grifo.
Con una cuchilla de afeitar, corta segmentos de un centímetro del hipocotilo y la raíz que tienen un color marrón. A continuación, utilice fórceps esterilizados con llama para sumergir los segmentos en una solución de 10% de lejía durante un minuto. Después de esto, enjuague los segmentos en agua estéril.
A continuación, utilice fórceps esterilizados con llama para transferir los segmentos a una toalla de papel. Seque los segmentos y transfieralos a un plato de Petri con agar de agua. Coloque el plato Petri dentro de un recipiente con una tapa e incubar los segmentos a temperatura ambiente.
Para establecer una cultura hija, transfiera uno de los segmentos al centro de un plato fresco de agar dextrosa de patata. Después de esto, tubos de ensayo de autoclave de 25 mililitros que contienen 10 mililitros de agua. Agregue dos muestras de 0,5 gramos de cada muestra de ensayo a un par de tubos de ensayo autoclavados con 10 mililitros de agua estéril, y agite los tubos de ensayo durante la noche.
Después de 24 horas, añadir 1,5 gramos de agar liso y 90 mililitros de agua destilada a un par de matraces cónicos. Después de autoclavar los matraces, colóquelos en un baño de agua Celsius de 45 grados durante 30 minutos. A continuación, vierta la muestra de referencia autoclave y la muestra viva en el agar fundido.
Vierta las mezclas de cada matraz en cinco platos de Petri. Para proteger a los microbios indígenas, es importante no añadir el compost mientras el agar está demasiado caliente. Por lo tanto, deje que el agar se enfríe a 45 grados Celsius antes de agregar el compost.
Usando la técnica aséptica, transfiera piezas de R.solani a cada par de placas de muestra. Luego, incubar las placas a temperatura ambiente durante uno o dos días. Por último, utilice una regla clara y plana y un microscopio estéreo para medir el radio del micelio en cada placa al milímetro más cercano.
En este protocolo, los extractos de compost vivos suprimieron el crecimiento de R.solani significativamente más que las muestras autoclaves, demostrando que el efecto era microbiano y no basado en nutrientes. La supresión se mide como una reducción en el crecimiento en comparación con el control autoclaviado. El crecimiento no se vio afectado por la duración de la maduración o el curado del compost.
El crecimiento se vio significativamente afectado por el método de compost y los ingredientes de la receta, específicamente con vermicompost, procesos de hileras y recetas con corteza de madera. Después de su desarrollo, esta técnica puede ser candidata a la certificación comercial de compost para propiedades supresoras de enfermedades.
