Este protocolo proporciona una solución para el intercambio automatizado cerrado de búferes y la concentración para la fabricación de células a pequeña escala. Es importante destacar que el intercambio de búferes es capaz de realizarse con una alta recuperación y una entrega de un volumen muy pequeño de producto concentrado. Los nuevos usuarios pueden tener dificultades para seguir todos los pasos de automatización.
Practicar la programación de estos pasos y realizar ejecuciones de prueba con el medio son buenas maneras de familiarizarse con el dispositivo. Antes de comenzar el intercambio de tampón, en un cabezal de flujo laminar de clase dos, utilice una jeringa y un conjunto de agujas para extraer 50 mililitros de solución salina de una bolsa salina de 500 mililitros. Sustituya este volumen por 50 mililitros de albúmina sérica 20% humana, y recoja las células de interés de sus recipientes de cultivo.
Después del conteo, utilice la jeringa para cargar las células en una bolsa de transferencia y utilice el bloqueo Luer para conectar la bolsa de transferencia a un kit de procesamiento de un solo uso. A continuación, conecte la bolsa de tampón de lavado previamente preparada al kit de procesamiento de un solo uso. Para configurar un intercambio de búfer automatizado, abra la interfaz gráfica de usuario del dispositivo y haga clic en el botón de inicio.
Haga clic en nuevo para crear un nuevo protocolo y haga clic en el control para seleccionar las válvulas que se abrirán y cerrarán, las velocidades centrífugas y de la bomba, la dirección de la bomba y los disparadores de acción. Cuando se hayan establecido todos los parámetros, haga clic en Guardar. Cuelgue las bolsas apropiadas conectadas en el dispositivo y coloque el kit de procesamiento de un solo uso en la máquina.
A continuación, haga clic en el botón de conexión y descargue el programa guardado. Cuando se enciende el botón de reproducción, el protocolo está listo para iniciarse. Para realizar el intercambio automatizado de búferes, abra las abrazaderas manuales para el tubo de la bolsa de transferencia y haga clic en Iniciar para iniciar el programa de intercambio de búferes.
Al final del paso seis de automatización, el proceso se detendrá debido a la activación del sensor de burbujas por el aire en la bolsa ahora vacía. Si la bolsa está realmente vacía, presione a continuación para mover el proceso al siguiente paso. Cuando finalice el proceso automatizado, cierre todas las abrazaderas de tubo y abra la puerta del dispositivo.
A continuación, retire el kit de un solo uso del dispositivo y desconecte la jeringa para permitir que las células se recojan para su posterior análisis. Típicamente, el lecho celular fluidizado aparecerá como se representa en esta imagen con las celdas que se acumulan en el medio y hacia la parte delantera del cono, un pequeño espacio en la punta de la cámara en el que las células no se acumulan, y una abertura visible dentro de la entrada de carga de la celda. El lecho celular fluidizado se puede comprimir al introducir un nuevo tampón que se encuentra en una viscosidad o densidad diferente.
Se puede aplicar un alto caudal para seleccionar celdas vivas, ya que las células muertas son más pequeñas y ligeras y se pueden forzar a salir de la cámara aumentando el caudal. El proceso automatizado del tiempo de procesamiento de intercambio de búfer es más corto que el del proceso de intercambio de búfer manual. En este análisis, las tasas de recuperación entre el manual y los procesos automatizados fueron similares para ambos tipos de células probadas, y la viabilidad celular no se vio afectada por ninguno de los procesos.
Las células recuperadas demostraron tasas de proliferación similares, capacidades para producir citoquinas e ideo-actividades, independientemente del tipo de procesamiento. Es importante recordar que este protocolo sirve sólo como una guía, y por lo tanto los usuarios necesitan programar el caudal y la velocidad de centrifugación de acuerdo con su tipo de celda y búfer. El intercambio de búferes es un paso intermedio en la fabricación celular que puede seguir la expansión del cultivo celular o la criopreservación y formulación.
El objetivo es desarrollar formas de encerrar todo el proceso. La centrifugación de contraflujo es una plataforma muy versátil. Estudios futuros explorarán aplicaciones en la selección de células, como la eliminación de células muertas y el aislamiento de células mononucleosas de un producto de chorisis.
