이 프로토콜은 소규모 셀 제조를 위한 폐쇄형 자동화 완충 교환 및 농도용 솔루션을 제공합니다. 중요한 것은, 완충 교환은 매우 적은 양의 농축 된 제품의 높은 회수 및 전달로 수행 될 수있다. 신규 사용자는 모든 자동화 단계를 따르는 데 어려움을 겪을 수 있습니다.
이러한 단계를 프로그래밍하고 매체로 테스트 실행을 수행하는 것은 장치에 익숙해지는 좋은 방법입니다. 완충 교환을 시작하기 전에 클래스 2 라미나르 플로우 헤드에서 주사기와 바늘 어셈블리를 사용하여 500 밀리리터 식염수 백에서 식염수 용액 50 밀리리터를 제거합니다. 이 부피를 20%의 인간 세럼 알부민으로 대체하고 배양 용기에서 관심 있는 세포를 수확하십시오.
계산 후 주사기를 사용하여 셀을 전송 가방에 넣고 Luer 잠금을 사용하여 전송 백을 일회용 처리 키트에 연결합니다. 그런 다음 이전에 준비된 워시 버퍼 가방을 일회용 처리 키트에 연결합니다. 자동 버퍼 교환을 설정하려면 장치의 그래픽 사용자 인터페이스를 열고 시작 단추를 클릭합니다.
새 프로토콜을 생성하려면 새 프로토콜을 클릭하고 컨트롤을 클릭하여 열고 닫을 밸브, 원심 및 펌프 속도, 펌프 방향 및 동작 트리거를 선택합니다. 모든 매개 변수가 설정된 경우 저장을 클릭합니다. 장치에 연결된 적절한 가방을 걸어서 일회용 처리 키트를 기기에 놓습니다.
그런 다음 연결 버튼을 클릭하고 저장된 프로그램을 다운로드합니다. 재생 버튼이 켜지면 프로토콜을 시작할 준비가 되었습니다. 자동 버퍼 교환을 수행하려면 전송 백 튜브에 대한 수동 클램프를 열고 버퍼 교환 프로그램을 시작하려면 먼저 클릭합니다.
자동화 6단계가 끝나면 현재 비어 있는 백의 공기에 의해 버블 센서가 트리거되어 프로세스가 일시 중지됩니다. 가방이 실제로 비어 있으면 다음 단계를 눌러 프로세스를 다음 단계로 이동합니다. 자동화된 프로세스가 완료되면 모든 튜브 클램프를 닫고 장치의 문을 엽니다.
그런 다음 장치에서 일회용 키트를 제거하고 주사기를 분리하여 후속 분석을 위해 셀을 수집할 수 있도록 합니다. 전형적으로, 유동화된 세포침대는 콘의 중간 및 전면을 향해 축적되는 세포, 세포가 축적되지 않는 챔버의 끝에 작은 공간, 셀 로딩 입구 내에서 보이는 개구부를 가진 이 이미지에서 나타나는 것으로 나타난다. 유동화된 세포 침대는 상이한 점도 또는 밀도에 있는 새로운 완충을 도입할 때 압축될 수 있다.
죽은 세포가 작고 가벼우며 유량을 증가시킴으로써 챔버 밖으로 강제될 수 있기 때문에 살아있는 세포를 선택하기 위해 높은 유량이 적용될 수 있다. 버퍼 교환 처리 시간의 자동화된 프로세스는 수동 버퍼 교환 프로세스보다 짧습니다. 이 분석에서, 수동 및 자동화된 프로세스 사이의 회수율은 테스트된 두 가지 유형의 셀에 대해 유사했으며, 세포 생존가능성은 어느 과정에 의해 영향을 받지 않았다.
회수된 세포는 처리의 종류에 관계없이 유사한 증식 비율, 사이토카인 을 생성하는 능력 및 ideo 활동을 보여주었습니다. 이 프로토콜은 지침으로만 작동하므로 사용자는 셀 유형 및 버퍼에 따라 유량 및 원심 분리 속도를 프로그래밍해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 완충교환은 세포배양 확장 또는 냉동보존 및 제형을 따를 수 있는 세포 제조의 중간 단계이다.
목표는 전체 프로세스를 둘러싸는 방법을 개발하는 것입니다. 카운터플로우 원심분리는 매우 다재다능한 플랫폼입니다. 향후 연구는 세포 선택에 응용 프로그램을 탐구합니다, 같은 죽은 세포 제거 및 chorisis 제품에서 단핵 세포 격리.
