Este protocolo fornece uma solução para troca de buffer automatizada fechada e concentração para fabricação de células de pequena escala. É importante ressaltar que a troca de buffers é capaz de ser realizada com uma alta recuperação e uma entrega de um volume muito pequeno de produto concentrado. Novos usuários podem ter dificuldade em seguir todas as etapas de automação.
Praticar a programação dessas etapas e realizar testes com meio são boas maneiras de se familiarizar com o dispositivo. Antes de iniciar a troca de tampão, em uma cabeça de fluxo laminar classe dois, use uma seringa e um conjunto de agulhas para remover 50 mililitros de solução salina de um saco salino de 500 mililitros. Substitua este volume por 50 mililitros de albumina de soro humano de 20%, e colmeia as células de interesse de seus vasos culturais.
Após a contagem, use a seringa para carregar as células em um saco de transferência e use a trava Luer para conectar o saco de transferência a um kit de processamento de uso único. Em seguida, conecte o saco previamente preparado de tampão de lavagem ao kit de processamento de uso único. Para configurar uma troca de buffer automatizada, abra a interface gráfica do usuário do dispositivo e clique no botão iniciar.
Clique novo para criar um novo protocolo e clique no controle para selecionar as válvulas a serem abertas e fechadas, as velocidades centrífugas e da bomba, a direção da bomba e os gatilhos de ação. Quando todos os parâmetros tiverem sido definidos, clique em salvar. Pendure os sacos apropriados conectados no dispositivo e coloque o kit de processamento de uso único na máquina.
Em seguida, clique no botão conectar e baixe o programa salvo. Quando o botão de reprodução acender, o protocolo está pronto para ser iniciado. Para realizar a troca de buffer automatizada, abra os grampos manuais para a tubulação da bolsa de transferência e clique em iniciar o programa de troca de buffer.
No final da etapa de automação seis, o processo fará uma pausa devido ao acionamento do sensor de bolha pelo ar no saco agora vazio. Se o saco estiver realmente vazio, pressione ao lado para mover o processo para o próximo passo. Quando o processo automatizado estiver concluído, feche todos os grampos de tubulação e abra a porta do dispositivo.
Em seguida, remova o kit de uso único do dispositivo e desconecte a seringa para permitir que as células sejam coletadas para análise posterior. Normalmente, o leito celular fluidizado aparecerá como representado nesta imagem com as células acumuladas no meio e em direção à frente do cone, um pequeno espaço na ponta da câmara em que as células não se acumulam, e uma abertura visível dentro da entrada de carregamento celular. O leito celular fluidizado pode ser comprimido ao introduzir um novo tampão que esteja em uma viscosidade ou densidade diferente.
Uma alta taxa de fluxo pode ser aplicada para selecionar células vivas, pois as células mortas são menores e mais leves e podem ser forçadas a sair da câmara aumentando a taxa de fluxo. O processo automatizado de tempo de processamento de troca de buffer é menor do que o do processo manual de troca de buffer. Nesta análise, as taxas de recuperação entre o manual e os processos automatizados foram semelhantes para ambos os tipos de células testadas, e a viabilidade celular não foi afetada por nenhum dos processos.
As células recuperadas demonstraram taxas de proliferação semelhantes, habilidades para produzir citocinas e ideo-atividades, independentemente do tipo de processamento. É importante lembrar que este protocolo serve apenas como uma diretriz e, portanto, os usuários precisam programar a taxa de fluxo e a velocidade de centrifugação de acordo com seu tipo de célula e buffer. O intercâmbio tampão é um passo intermediário na fabricação de células que pode seguir a expansão da cultura celular ou a criopreservação e formulação.
O objetivo é desenvolver formas de incluir todo o processo. A centrifugação de contrafluxo é uma plataforma muito versátil. Estudos futuros explorarão aplicações na seleção celular, como remoção de células mortas e isolamento de células mononucleus a partir de um produto de corísis.
