Ce protocole fournit une solution pour l’échange et la concentration automatisés fermés de tampon pour la fabrication de cellules à petite échelle. Fait important, l’échange tampon peut être effectué avec une récupération élevée et la livraison d’un très petit volume de produits concentrés. Les nouveaux utilisateurs peuvent avoir du mal à suivre toutes les étapes d’automatisation.
La pratique de la programmation de ces étapes et l’exécution de tests avec moyen sont de bonnes façons de se familiariser avec l’appareil. Avant de commencer l’échange tampon, dans une tête d’écoulement laminaire de classe deux, utilisez une seringue et un assemblage d’aiguilles pour retirer 50 millilitres de solution saline d’un sac salin de 500 millilitres. Remplacez ce volume par 50 millilitres d’albumine sérique 20% humaine et récoltez les cellules d’intérêt de leurs vaisseaux culturels.
Après comptage, utilisez la seringue pour charger les cellules dans un sac de transfert, et utilisez la serrure Luer pour connecter le sac de transfert à un kit de traitement à usage unique. Connectez ensuite le sac de tampon de lavage préparé précédemment à la trousse de traitement à usage unique. Pour configurer un échange tampon automatisé, ouvrez l’interface utilisateur graphique de l’appareil et cliquez sur le bouton de démarrage.
Cliquez neuf pour créer un nouveau protocole, et cliquez sur le contrôle pour sélectionner les vannes à ouvrir et à fermer, les vitesses centrifuges et de pompe, la direction de la pompe et les déclencheurs d’action. Lorsque tous les paramètres ont été définis, cliquez sur enregistrer. Accrochez les sacs appropriés connectés sur l’appareil et placez le kit de traitement à usage unique sur la machine.
Cliquez ensuite sur le bouton connectez-vous et téléchargez le programme enregistré. Lorsque le bouton de jeu s’allume, le protocole est prêt à être lancé. Pour effectuer l’échange de tampon automatisé, ouvrez les pinces manuelles pour le tube sac de transfert, et cliquez sur commencer à lancer le programme d’échange tampon.
À la fin de l’étape six de l’automatisation, le processus s’arrêtera en raison du déclenchement du capteur de bulle par l’air dans le sac maintenant vide. Si le sac est effectivement vide, appuyez sur à côté pour déplacer le processus à l’étape suivante. Lorsque le processus automatisé est terminé, fermez toutes les pinces à tubes et ouvrez la porte de l’appareil.
Retirez ensuite le kit à usage unique de l’appareil et déconnectez la seringue pour permettre aux cellules d’être collectées pour une analyse ultérieure. En règle générale, le lit cellulaire fluidisé apparaît comme représenté dans cette image avec les cellules s’accumulant au milieu et vers l’avant du cône, un petit espace à la pointe de la chambre dans lequel les cellules ne s’accumulent pas, et une ouverture visible à l’intérieur de l’entrée de chargement cellulaire. Le lit cellulaire fluidisé peut être comprimé lors de l’introduction d’un nouveau tampon qui est à une viscosité ou une densité différente.
Un débit élevé peut être appliqué pour sélectionner les cellules vivantes car les cellules mortes sont plus petites et plus légères et peuvent être forcées de quitter la chambre en augmentant le débit. Le processus automatisé de traitement des échanges tampons est plus court que celui du processus manuel d’échange de tampons. Dans cette analyse, les taux de récupération entre le manuel et les processus automatisés étaient similaires pour les deux types de cellules testées, et la viabilité cellulaire n’a pas été affectée par l’un ou l’autre processus.
Les cellules récupérées ont démontré des taux de prolifération similaires, des capacités pour produire des cytokines, et des idéo-activités, indépendamment du type de traitement. Il est important de se rappeler que ce protocole ne sert que de ligne directrice, et donc les utilisateurs ont besoin de programmer le débit et la vitesse de centrifugation en fonction de leur type de cellule et tampon. L’échange tampon est une étape intermédiaire dans la fabrication cellulaire qui peut suivre l’expansion de la culture cellulaire ou la cryopréservation et la formulation.
L’objectif est de développer des moyens d’enfermer l’ensemble du processus. La centrifugation de contre-flux est une plate-forme très polyvalente. Les études futures exploreront des applications dans la sélection cellulaire, telles que l’enlèvement de cellules mortes et l’isolement cellulaire mononucléaire d’un produit chorisis.
