El nuevo ensayo de tanques se combinará con potentes herramientas genéticas en Zebrafish ofrece un método para diseccionar cómo el cerebro modula el estrés y cómo los circuitos neuronales pueden ser desregulados. Las vías de señalización genética y neuronal están altamente conservadas entre el pez cebra y los mamíferos y esta técnica puede ayudar a una mayor comprensión de los mecanismos subyacentes a la respuesta al estrés. El método no es específico del pez cebra y se ha utilizado con los peces de cueva ciegos mexicanos y, por lo tanto, potencialmente puede extenderse a otras especies de peces.
Una prueba puede ser útil para determinar la iluminación adecuada y el contraste del animal en un fondo para lograr un seguimiento exitoso. El ensayo rara vez se usa, pero puede ser un proceso involucrado. Visualizar los pasos ayudará a otros investigadores a ejecutar con éxito el procedimiento.
Jacqueline Chin, una post-doc en el laboratorio, y Lydia Albert, una estudiante de pregrado, demostrarán este procedimiento. Comience llenando un vaso de precipitados de 250 mililitros y al menos dos tanques de retención con agua del sistema de peces. En la mañana de la prueba, transfiera al menos 10 peces Zebra adultos por cada condición experimental a tanques de retención individuales antes de transferir todos los peces a la sala de comportamiento para la aclimatación durante al menos una hora.
Etiqueta los tanques de tal manera que la condición o el genotipo de los animales sea ciego al experimentador y usa una red para colocar suavemente a un solo adulto en el vaso de precipitados. Permita que el pez adulto se aclimate en el vaso de precipitados durante 10 minutos antes de verter suavemente el agua y los peces del vaso de precipitados en el tanque de novela experimental. Tan pronto como el pez esté en el tanque, comience la grabación de la cámara y aléjese de la configuración para evitar problemas adicionales a los peces.
Cuando la grabación haya terminado, retire al individuo del tanque de la novela y coloque el pez en un nuevo tanque de retención. Para evaluar los efectos de fármacos específicos de interés, diluir el fármaco a una concentración de trabajo en 250 mililitros de agua del sistema. Usar un vaso de precipitados con agua del sistema sólo como control.
Enmascarar las identidades de los vasos de control y drogas para asegurarse de que el probador está ciego a las condiciones de tratamiento hasta el post-análisis y realizar una nueva prueba de tanque como se ha demostrado para obtener una respuesta de estrés conductual basal. Al final de la grabación de línea de base, utilice una red para transferir inmediatamente el pescado a uno de los vasos de prueba durante 10 minutos antes de transferir el pescado a un vaso de precipitados de lavado que contenga solo agua dulce del sistema. Es importante utilizar redes separadas designadas para cada vaso de precipitados de tratamiento para evitar la dosificación accidental de los peces de control, especialmente cuando intervienen varios tratamientos farmacológicos.
Después de 10 minutos, coloque el pez en un nuevo tanque de novela para una segunda prueba de tanques novedosos. Al final de la prueba, transfiera el pez Zebra adulto a un nuevo tanque de retención y sustituya el agua del sistema en el segundo tanque novedoso por agua fresca del sistema para el siguiente paso para evitar la contaminación cruzada del medicamento experimental. Al final de todas las pruebas, devuelva a los individuos a la instalación de peces.
Aquí se muestra la actividad locomotora de un solo pez cebra durante el primer y último minuto de una prueba de tanque novedoso de 10 minutos. Cuando se introduce por primera vez en el tanque, los peces suelen pasar la mayor parte del tiempo en el fondo del nuevo tanque. Con el tiempo, sin embargo, los peces adultos demuestran un aumento gradual en la cantidad de tiempo pasado en la parte superior del tanque.
De hecho, el tiempo total pasado en la parte superior del tanque durante el primer minuto es significativamente más corto en comparación con el último minuto de la nueva prueba del tanque. Por el contrario, la distancia total recorrida entre el primer y el último minuto no revela diferencias significativas. En este experimento representativo, el análisis de las rutas locomotoras adultas Zebrafish reveló poca diferencia entre la actividad de natación de peces Zebra antes y después del tratamiento para grupos de adultos expuestos solo al vehículo.
Por el contrario, los adultos expuestos a un fármaco ansiolítico pasaron una gran cantidad de tiempo en la parte superior del tanque en comparación con las rutas locomotoras del mismo pez antes de la exposición a la droga. Estas diferencias no se debieron a una menor locomoción en general, ya que no se midieron diferencias significativas en la distancia recorrida para ninguno de los grupos. Como los ritmos conductuales se ven afectados por procesos circadianos, asegúrese de llevar a cabo réplicas experimentales realizadas en diferentes días durante la misma hora del día para cada experimento.
Se pueden realizar ensayos conductuales adicionales, como la prueba de campo abierto u otras mediciones fisiológicas del estrés, para validar aún más los resultados obtenidos de la nueva prueba de buceo en tanques. Este método se puede utilizar un ensayo de alto rendimiento para abordar preguntas relacionadas con el estrés, el miedo y la ansiedad.
