Por lo tanto, en nuestro protocolo, la instilación intracolónica de TNBS conduce a la inflamación transmural en el sitio de instilación y la distensión mecánica en el segmento proximal a la inflamación. Así que esto imita la enfermedad de Crohn estenótica. Como el segmento proximal está distendido mecánicamente pero no muestra una inflamación visible, un estudio comparativo del segmento proximal y el sitio de inflamación ayuda a determinar si el estrés mecánico juega un papel en la colitis de Crohn.
Los estudios anteriores se centran solo en el sitio de la inflamación. Nuestro protocolo que trabaja en diferentes sitios en el modelo destaca un papel crítico del estrés mecánico en la enfermedad de Crohn, particularmente en la enfermedad de Crohn estenótica. Para comenzar, coloque las ratas en la mesa de anestesia en posición supina.
Para inducir la colitis, inserte un catéter de poliuretano de grado médico, abierto, a través del ano durante aproximadamente siete a ocho centímetros desde el borde anal, e instile suavemente TNBS en el colon. Administrar las ratas de control simuladas con 250 microlitros de solución salina. Para ayudar a la distribución de TNBS o solución salina y evitar derrames, mantenga a las ratas en posición supina con la cabeza hacia abajo en un ángulo de aproximadamente 30 grados, con el ano cerrado durante dos minutos.
Abra el abdomen de la rata con tijeras y fórceps de grado quirúrgico. Retire cuidadosamente todo el colon por encima del canal anal y transfiera el colon inmediatamente al tampón 1x HBSS helado. Enderece los dos puntos en el búfer y mide la longitud de los dos puntos con una regla.
Tome un hilo de nylon y rodee alrededor del colon para medir la circunferencia externa de los segmentos de colon en control y las ratas tratadas con TNBS. Tome tejidos de espesor completo para histología. Abra el colon a lo largo de la placa mesentérica y limpie el colon a fondo con el tampón HBSS.
Evalúe el colon para la puntuación de inflamación macroscópica en función de los criterios predefinidos con modificaciones mínimas. Recolectar muestras de tejido colónico de ratas tratadas con TNBS en los sitios P, I y D.Site P es la porción de dos a tres centímetros antes del margen oral del sitio de inflamación. El sitio I es el sitio de inflamación donde se inculca TNBS, generalmente de cuatro a seis centímetros del extremo del colon.
Finalmente, el sitio D es la porción de uno a dos centímetros distal al margen aboral del sitio de inflamación. La instilación intracolónica de TNBS en ratas indujo una inflamación transmural localizada de aproximadamente dos centímetros de longitud con pared intestinal engrosada y luz estrechada en el sitio de instilación en el colon distal. El sitio de instilación de TNBS se denominó sitio I.As resultado de la inflamación transmural y la estenosis, tanto la inflamación como el estrés mecánico estaban presentes en el sitio I.La estenosis en el sitio I condujo a una marcada distensión de la luz en el segmento proximal al sitio de instilación de TNBS, conocido como sitio P.La circunferencia del colon aumentó significativamente en los sitios P e I en comparación con el colon de control simulado.
Aunque mecánicamente distendido, el sitio P no mostró inflamación visible. Por el contrario, el segmento colónico distal a la instilación TNBS denominada sitio D no presentó inflamación ni distensión mecánica. La puntuación macroscópica de la inflamación en el sitio I en las ratas tratadas con TNBS aumentó dramáticamente en comparación con los controles simulados en los sitios P y D de ratas con colitis.
Las puntuaciones de inflamación en los sitios P y D no aumentaron significativamente en comparación con la simulación. Por lo tanto, es importante estudiar no solo el sitio I, sino también los sitios P y D en el modelo, ya que esto ayuda a reconocer la importancia patogénica del estrés mecánico en la enfermedad de Crohn. Para determinar aún más si el estrés mecánico es un factor patógeno en la inflamación intestinal, también se puede tratar de liberar la distensión mecánica alimentando a los animales exclusivamente con dieta líquida y ver si esto ayuda con la inflamación y la función intestinal.
