Este protocolo proporciona un método fácil y fiable para medir automáticamente el diámetro de los vasos de la retina en ratones anestesiados debido a mutaciones genéticas o enfermedades de la retina. La principal ventaja de esta técnica es que el programa MATLAB escrito a medida es práctico, fácil de usar, cómodo y fiable. Los cambios en el diámetro de los vasos de la retina ocurren comúnmente en enfermedades degenerativas como la RP y otras afecciones vasculares de la retina.
Los modelos de ratón ofrecen información sobre la eficacia del tratamiento y su impacto en los vasos de la retina. El método puede ser potencialmente útil como marcadores clínicos cuantificables tras la progresión de los trastornos vasculares en el ojo, y para el seguimiento de posibles tratamientos. Para comenzar, prepare una jeringa con solución de trabajo de fluoresceína y adminístrela por vía intraperitoneal al animal anestesiado y aplique una gota de gel de metilcelulosa al 2% en la superficie corneal.
A continuación, coloque al animal en la platina de posicionamiento del sistema de imágenes. Coloque la lente de la cámara del fondo de ojo de la retina para tocar directa y suavemente la córnea del ratón, y ajuste ligeramente la alineación para colocar la cabeza del nervio óptico en el centro del campo visual. A continuación, cambie al canal de fluorescencia verde de la cámara de fondo de ojo y concéntrese en los vasos de la retina para tomar las imágenes.
Capture imágenes en los puntos de tiempo deseados después de la inyección de fluoresceína para determinar el punto de tiempo ideal y visualizar la imagen del fondo de ojo con fluoresceína. En primer lugar, abra el programa MATLAB. A continuación, descargue y guarde el diámetro del fondo de ojo.
Código M. A continuación, abra la carpeta de análisis de imágenes de fondo de ojo y arrastre y suelte el diámetro del fondo de ojo. m en la carpeta de análisis.
Arrastre y suelte una imagen FFA en la carpeta de análisis de imagen. En el programa MATLAB, haga clic dos veces en el archivo de código para activarlo. Seleccione la opción Ejecutar.
Aparecerá un menú emergente para seleccionar la imagen. Seleccione la imagen y aparecerá en la pantalla un menú emergente para los parámetros de análisis. Establezca los parámetros de análisis en el menú emergente y pulse OK. Seleccione el centro del disco óptico y, a continuación, seleccione el borde del disco óptico.
El análisis se realizará en segundo plano y los resultados del análisis aparecerán en la pantalla. La tabla contiene los valores de media, desviación estándar y error estándar para cada recipiente. Guarde la tabla.
Y luego guarde la figura con el grosor medio establecido. Abra la carpeta de análisis con los archivos guardados y, a continuación, abra la figura guardada. Abra la tabla guardada, copie los valores y péguelos en un archivo de Excel.
Después de la inyección de fluoresceína, se obtuvieron imágenes de un ratón de control y un ratón MITFMI-VGA9/mutante, para los cuales se midió la distancia más corta desde el centro del disco óptico hasta los puntos finales de los vasos en el sentido de las agujas del reloj. El diámetro medio de los vasos se obtuvo en función del número de vasos para los ratones de tipo salvaje y mutantes. Lo más importante que hay que recordar es la posición de la cámara del fondo de ojo y el centrado del disco óptico en la imagen del fondo de ojo.
Además de esta técnica, se pueden realizar técnicas moleculares para explorar nuevos fármacos, diagnosticar diferentes afecciones vasculares en el ojo y comprender mejor el funcionamiento de la vasculatura retiniana.
