Este protocolo fornece um método fácil e confiável para medir automaticamente o diâmetro dos vasos da retina em camundongos anestesiados devido a mutações genéticas ou doenças da retina. A principal vantagem dessa técnica é que o programa MATLAB escrito personalizado aqui é prático, fácil de usar, conveniente e confiável. As alterações no diâmetro dos vasos retinianos geralmente ocorrem em doenças degenerativas como FR e outras condições vasculares da retina.
Os modelos de camundongos oferecem informações sobre a eficácia do tratamento e seu impacto nos vasos da retina. O método pode ser potencialmente útil como marcadores clínicos quantificáveis após a progressão de distúrbios vasculares no olho e para monitorar possíveis tratamentos. Para começar, prepare uma seringa com solução de trabalho de fluoresceína e administre-a intraperitonealmente ao animal anestesiado e aplique uma gota de gel de metilcelulose a 2% na superfície da córnea.
Em seguida, coloque o animal no estágio de posicionamento do sistema de imagem. Posicione a lente da câmera de fundo de olho de imagem da retina para tocar direta e suavemente a córnea do mouse e ajuste levemente o alinhamento para colocar a cabeça do nervo óptico no meio do campo visual. Em seguida, mude para o canal de fluorescência verde na câmera do fundo do olho e concentre-se nos vasos da retina para tirar as imagens.
Capture imagens nos pontos de tempo desejados após a injeção de fluoresceína para determinar o ponto de tempo ideal e visualizar a imagem de fundo de fluoresceína. Primeiro, abra o programa MATLAB. Em seguida, baixe e salve o diâmetro do fundo de olho.
código m. Em seguida, abra a pasta de análise da imagem do fundo de olho e arraste e solte o diâmetro do fundo de olho. m na pasta de análise.
Arraste e solte uma imagem FFA na pasta de análise de imagem. No programa MATLAB, clique duas vezes no arquivo de código para ativá-lo. Selecione a opção Executar.
Um menu pop-up para selecionar a imagem aparecerá. Selecione a imagem e um menu pop-up para parâmetros de análise aparecerá na tela. Defina os parâmetros de análise no menu pop-up e pressione OK. Selecione o centro do disco óptico e, em seguida, selecione a borda do disco óptico.
A análise será realizada em segundo plano e os resultados da análise aparecerão na tela. A tabela contém os valores de média, desvio padrão e erro padrão para cada vaso. Salve a tabela.
Em seguida, salve a figura com a espessura média definida. Abra a pasta de análise com os arquivos salvos e, em seguida, abra a imagem salva. Abra a tabela salva, copie os valores e cole-os em um arquivo do Excel.
Após a injeção de fluoresceína, foram obtidas imagens de um camundongo controle e de um camundongo mutante MITFMI-VGA9/mutante, para os quais a menor distância foi medida do centro do disco óptico aos pontos finais dos vasos no sentido horário. O diâmetro médio do vaso foi obtido em função do número de vasos para os camundongos selvagens e mutantes. As coisas mais importantes a serem lembradas são o posicionamento da câmera do fundo do olho e a centralização do disco óptico na imagem do fundo do olho.
Além dessa técnica, técnicas moleculares podem ser realizadas para explorar novos medicamentos, diagnosticar diferentes condições vasculares no olho e entender melhor o funcionamento da vasculatura retiniana.
