Ce protocole fournit une méthode simple et fiable pour mesurer automatiquement le diamètre des vaisseaux rétiniens chez les souris anesthésiées en raison de mutations génétiques ou d’une maladie rétinienne. Le principal avantage de cette technique est que le programme MATLAB écrit sur mesure est pratique, facile à utiliser, pratique et fiable. Les modifications du diamètre des vaisseaux rétiniens se produisent fréquemment dans les maladies dégénératives comme la RP et d’autres affections vasculaires rétiniennes.
Les modèles murins offrent un aperçu de l’efficacité du traitement et de son impact sur les vaisseaux rétiniens. La méthode pourrait être potentiellement utile en tant que marqueurs cliniques quantifiables suivant la progression des troubles vasculaires dans l’œil et pour le suivi des traitements potentiels. Pour commencer, préparez une seringue avec une solution de travail à la fluorescéine et administrez-la par voie intra-péritonéale à l’animal anesthésié et appliquez une goutte de gel de méthylcellulose à 2% sur la surface cornéenne.
Placez ensuite l’animal sur la platine de positionnement du système d’imagerie. Positionnez l’objectif de la caméra d’imagerie rétinienne du fond d’œil de manière à ce qu’il touche directement et doucement la cornée de la souris, et ajustez légèrement l’alignement pour placer la tête du nerf optique au milieu du champ visuel. Passez ensuite au canal de fluorescence vert de la caméra du fond d’œil et faites la mise au point sur les vaisseaux rétiniens pour prendre les images.
Capturez des images aux points temporels souhaités après l’injection de fluorescéine pour déterminer le point temporel idéal et visualiser l’image du fond d’œil à la fluorescéine. Tout d’abord, ouvrez le programme MATLAB. Ensuite, téléchargez et enregistrez le diamètre du fond d’œil.
code M. Ensuite, ouvrez le dossier d’analyse de l’image du fond d’œil et faites glisser et déposez le diamètre du fond d’œil. m dans le dossier d’analyse.
Faites glisser et déposez une image FFA dans le dossier d’analyse d’image. Dans le programme MATLAB, cliquez deux fois sur le fichier de code pour l’activer. Sélectionnez l’option Exécuter.
Un menu contextuel pour sélectionner l’image apparaîtra. Sélectionnez l’image, et un menu contextuel pour les paramètres d’analyse apparaîtra à l’écran. Définissez les paramètres d’analyse dans le menu contextuel et appuyez sur OK. Sélectionnez le centre du disque optique, puis sélectionnez le bord du disque optique.
L’analyse sera effectuée en arrière-plan et les résultats de l’analyse apparaîtront à l’écran. Le tableau contient les valeurs de la moyenne, de l’écart-type et de l’erreur-type pour chaque navire. Enregistrez le tableau.
Et puis enregistrez la figure avec l’épaisseur moyenne définie. Ouvrez le dossier d’analyse contenant les fichiers enregistrés, puis ouvrez la figure enregistrée. Ouvrez la table enregistrée, copiez les valeurs et collez-les dans un fichier Excel.
Après l’injection de fluorescéine, des images d’une souris témoin et d’une souris MITFMI-VGA9/mutante ont été obtenues, pour lesquelles la distance la plus courte a été mesurée entre le centre du disque optique et les points d’extrémité des vaisseaux dans le sens des aiguilles d’une montre. Le diamètre moyen des récipients a été obtenu en fonction du nombre de récipients pour les souris de type sauvage et mutantes. Les choses les plus importantes à retenir sont le positionnement de la caméra de fond d’œil et le centrage du disque optique dans l’image du fond d’œil.
En plus de cette technique, des techniques moléculaires peuvent être réalisées afin d’explorer de nouveaux médicaments, de diagnostiquer différentes affections vasculaires dans l’œil et de mieux comprendre le fonctionnement du système vasculaire rétinien.
