Bu protokol, gen mutasyonları veya retina hastalığı nedeniyle anestezi uygulanmış farelerde retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçmek için kolay ve güvenilir bir yöntem sağlar. Bu tekniğin temel avantajı, burada özel olarak yazılmış MATLAB programının pratik, kullanımı kolay, kullanışlı ve güvenilir olmasıdır. Retina damar çapı değişiklikleri genellikle RP ve diğer retinal vasküler durumlar gibi dejeneratif hastalıklarda ortaya çıkar.
Fare modelleri, tedavinin etkinliği ve retina damarları üzerindeki etkileri hakkında bilgi verir. Yöntem, gözdeki vasküler bozuklukların ilerlemesini takiben ölçülebilir klinik belirteçler olarak ve potansiyel tedavilerin izlenmesi için potansiyel olarak yararlı olabilir. Başlamak için, floresein çalışma solüsyonu içeren bir şırınga hazırlayın ve anestezi uygulanmış hayvana intra-peritoneal olarak uygulayın ve kornea yüzeyine bir damla% 2 metil selüloz jel uygulayın.
Ardından hayvanı görüntüleme sisteminin konumlandırma aşamasına yerleştirin. Retina görüntüleme fundus kamera merceğini, farenin korneasına doğrudan ve nazikçe dokunacak şekilde konumlandırın ve optik sinir başını görme alanının ortasına yerleştirmek için hizalamayı hafifçe ayarlayın. Ardından fundus kamerasındaki yeşil floresan kanalına geçin ve görüntüleri çekmek için retina damarlarına odaklanın.
İdeal zaman noktasını belirlemek ve floresein fundus görüntüsünü görselleştirmek için floresein enjeksiyonunu takiben istenen zaman noktalarında görüntüler yakalayın. İlk olarak, MATLAB programını açın. Ardından fundus çapını indirin ve kaydedin.
m kodu. Ardından, fundus görüntü analizi klasörünü açın ve fundus çapını sürükleyip bırakın. m kodunu analiz klasörüne ekleyin.
Bir FFA görüntüsünü görüntü analizi klasörüne sürükleyip bırakın. MATLAB programında, etkinleştirmek için kod dosyasına iki kez tıklayın. Çalıştır seçeneğini seçin.
Görüntüyü seçmek için bir açılır menü görünecektir. Görüntüyü seçin ve ekranda analiz parametreleri için bir açılır menü belirecektir. Açılır menüde analiz parametrelerini ayarlayın ve Tamam'a basın. Optik diskin merkezini seçin ve ardından optik diskin kenarını seçin.
Analiz arka planda gerçekleştirilecek ve analiz sonuçları ekranda görünecektir. Tablo, her gemi için ortalama, standart sapma ve standart hata değerlerini içerir. Tabloyu kaydedin.
Ve sonra şekli ortalama kalınlık seti ile kaydedin. Kaydedilen dosyaların bulunduğu analiz klasörünü açın ve ardından kaydedilen şekli açın. Kaydedilen tabloyu açın, değerleri kopyalayın ve bir Excel dosyasına yapıştırın.
Floresein enjeksiyonundan sonra, bir kontrol faresi ve bir MITFMI-VGA9 / mutant fareden görüntüler elde edildi, bunun için optik disk merkezinden damarlar üzerindeki uç noktalara kadar en kısa mesafe saat yönünde ölçüldü. Ortalama damar çapı, vahşi tip ve mutant fareler için damar sayısının bir fonksiyonu olarak elde edildi. Hatırlanması gereken en önemli şeyler, fundus kamerasının konumlandırılması ve optik diskin fundus görüntüsünde merkezlenmesidir.
Bu tekniğe ek olarak, yeni ilaçların araştırılması, gözdeki farklı damar durumlarının teşhis edilmesi ve retina damar sisteminin işleyişinin daha iyi anlaşılması için moleküler teknikler de uygulanabilir.
