이 방법은 무릎 골관절염에 대한 새로운 임상 전략으로 활용될 가능성이 있습니다. 이 기술은 국소 주사에 안전하고 간단하며 동물 실험에 효과적입니다. 은 나노 입자는 다른 염증 질환에 적용 할 수 있으며 추가 연구가 필요합니다.
마우스의 무릎 크기를 주사 할 때주의하여 올바른 절차를 보장하는 것이 중요합니다. 무릎에서 무릎 관절의 손 채우기를 평가하고 약물 누출을 방지합니다. 마취된 쥐를 수술대 위에 올려놓는 것으로 시작합니다.
쥐의 팔다리에 테이프를 붙인 다음 면도기로 털을 면도합니다. 그런 다음 면도 부위를 0.1% 요오드포름과 알코올을 번갈아 가며 스크럽하여 세 번 소독합니다. 가위를 사용하여 피부를 절개하여 피하 조직과 슬개골 인대를 순차적으로 노출시킵니다.
1밀리리터 인슐린 주사기로 제2형 콜라겐분해효소 10유닛을 관절강에 주사합니다. 피하 조직을 봉합한 다음 피부를 봉합합니다. 이제 봉합된 부위를 0.1% 요오드형으로 살균합니다.
쥐가 마취에서 깨어나면 개별적으로 환기되는 케이지에 넣습니다. 얼음 위에 놓인 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브에 400마이크로리터의 1형 콜라겐을 추가하는 것으로 시작합니다. 이제 PBX 200마이크로리터를 넣고 잘 섞은 다음 튜브를 얼음 위에 놓습니다.
이 현탁액에 400 마이크로 리터의은 나노 입자를 첨가하여 최종 나노 입자 농도를 1 밀리 몰로 만듭니다. 서스펜션을 잘 섞는다. 콜라겐 분해 효소 주입 일주일 후, 케이지에서 KOA 마우스를 꺼냅니다.
은 나노 입자를 주입하기 전에 이전에 시연 된대로 마우스를 마취하고 외과적으로 준비합니다. 가위를 사용하여 피부, 피하 조직 및 무릎 인대를 순차적으로 노출시킵니다. 그런 다음 1밀리리터 인슐린 주사기의 바늘을 사용하여 15도 각도로 관절강에 들어가 20마이크로리터의 은 나노입자 콜라겐 혼합물을 천천히 주입합니다.
주사하는 동안 무릎 관절이 부풀어 올라 성공적인 약물 주입이 보장됩니다. 이전과 같이 수술 부위를 봉합하고 살균한 후 마취가 풀리면 쥐를 개별 환기 케이지에 넣습니다. 안락사된 쥐의 팔다리를 외과적으로 불임하고 해부합니다.
대퇴골과 경골을 포함한 무릎 관절을 적출하고 근육 조직을 제거합니다. 대퇴골과 경골 및 주변 연인대를 포함한 무릎 관절 조직을 수집합니다. 보존과 기정을 위한 10%formin에서 캡슐.
하룻밤 동안 조직을 고정한 후 파라핀에 절편을 삽입합니다. 마이크로톰을 사용하여 내장된 조직을 0.4마이크로 두께의 절편으로 자릅니다. 조직에 다양한 염색 기술을 적용합니다.
KOA 마우스의 평균 체중은 대조군의 마우스보다 현저히 낮았습니다. 제2형 콜라겐분해효소 및 은나노입자 군에서 마우스의 평균 체중은 KOA 마우스에 비해 높았다. HE 염색 결과 KOA 그룹 마우스의 활막 두께가 대조군에 비해 유의하게 높은 것으로 나타났습니다.
나노입자로 처리한 군의 활액 두께는 KOA군에 비해 감소하였다. 활막의 혈관 증식은 KOA 그룹에서 관찰되었으며, 나노입자 처리군에서는 유의하게 감소된 것으로 나타났다. Safranin-O 염색은 KOA 마우스에서 파괴된 연골 기질을 나타낸 반면, 나노 입자 콜라겐 혼합물로 처리한 마우스는 훨씬 더 나은 연골 기질을 보여주었습니다.
형태학적 특징 점수는 대조군에 비해 콜라겐 II 처리군이 더 높았다. 면역조직화학적 염색은 KOA 그룹에 비해 나노입자 처리된 마우스의 활막 영역에서 호중구 침윤이 감소했음을 보여주었습니다. II형 콜라겐분해효소와 여러 나노입자를 주입하는 동안 약물 막힘을 피하는 것이 중요합니다.
여러 나노 입자의 치료 효과는 전방 십자 인대 손상의 동물 모델에서 시도 될 수 있습니다.
