Diese Methode hat das Potenzial, als neue klinische Strategie für Kniearthrose eingesetzt zu werden. Diese Technik ist sicher, einfach für lokale Injektionen und die Behandlung ist im Tierversuch wirksam. Silbernanopartikel könnten auch bei anderen Entzündungskrankheiten eingesetzt werden und müssen weiter erforscht werden.
Es ist daher wichtig, bei der Injektion der Kniegröße der Mäuse vorsichtig zu sein, um das richtige Verfahren zu gewährleisten. Beurteilung der Handfüllung des Kniegelenks an den Knien und Vermeidung von Medikamentenleckagen. Beginnen Sie damit, eine betäubte Maus auf einen Operationstisch zu legen.
Klebe die Gliedmaßen der Maus ab und rasiere dann das Fell mit einem Rasiermesser. Desinfizieren Sie anschließend die rasierte Region dreimal mit abwechselnden Peelings mit 0,1 % Jodoform und Alkohol. Machen Sie mit einer Schere einen Schnitt in die Haut, wobei das Unterhautgewebe und das Ligamentum infra patella nacheinander freigelegt werden.
Injizieren Sie mit einer Ein-Milliliter-Insulinspritze 10 Einheiten Kollagenase vom Typ 2 in die Gelenkhöhle. Naht das Unterhautgewebe und vernäht dann die Haut. Sterilisieren Sie nun den vernähten Bereich mit 0,1 % Jodform.
Legen Sie die Maus in einzeln belüftete Käfige, sobald sie aus der Narkose erwacht. Beginnen Sie mit der Zugabe von 400 Mikrolitern Typ-1-Kollagen in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen, das auf Eis gestellt wird. Fügen Sie nun 200 Mikroliter PBX hinzu, mischen Sie sie gut und legen Sie die Röhrchen auf Eis.
Fügen Sie dieser Suspension 400 Mikroliter Silbernanopartikel hinzu, wodurch die endgültige Nanopartikelkonzentration auf ein Millimol steigt. Mischen Sie die Suspension gut. Eine Woche nach der Kollagenase-Injektion entfernen Sie die KOA-Mäuse aus ihren Käfigen.
Vor der Injektion von Silbernanopartikeln sollte die Maus wie zuvor demonstriert anästhesiert und chirurgisch vorbereitet werden. Verwenden Sie eine Schere, um die Haut, das Unterhautgewebe und die Kniebänder nacheinander freizulegen. Führen Sie dann mit der Nadel einer Ein-Milliliter-Insulinspritze in einem Winkel von 15 Grad in die Gelenkhöhle ein und injizieren Sie langsam 20 Mikroliter der Silber-Nanopartikel-Kollagenmischung.
Während der Injektion schwillt das Kniegelenk an, was eine erfolgreiche Injektion des Medikaments gewährleistet. Nachdem Sie die Operationsstelle wie zuvor genäht und sterilisiert haben, setzen Sie die Mäuse in einzeln belüftete Käfige, sobald die Anästhesie nachlässt. Chirurgische Sterilisation und Sezierung der Gliedmaßen der euthanasierten Maus.
Entnehmen Sie die Kniegelenke einschließlich des Oberschenkelknochens und des Schienbeins und entfernen Sie das Muskelgewebe. Sammeln Sie das Gewebe des Kniegelenks, einschließlich des Oberschenkelknochens und des Schienbeins und des umgebenden weichen Bandes. Kapseln Sie mit 10% Formalin zur Konservierung und Fixierung.
Nach der nächtlichen Fixierung des Gewebes betten Sie die Schnitte in Paraffin ein. Schneiden Sie das eingebettete Gewebe mit einem Mikrotom in 0,4 Mikro dicke Abschnitte. Unterziehen Sie das Gewebe verschiedenen Färbetechniken.
Das durchschnittliche Körpergewicht der KOA-Mäuse war signifikant niedriger als das der Mäuse in der Kontrollgruppe. Das durchschnittliche Körpergewicht der Mäuse in der Gruppe der Kollagenase- und Silber-Nanopartikel vom Typ zwei war im Vergleich zu den KOA-Mäusen höher. Die HE-Färbung zeigte, dass die Synovialdicke der Mäuse in der KOA-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant höher war.
Die Synovialdicke der mit Nanopartikeln behandelten Gruppe war im Vergleich zur KOA-Gruppe reduziert. Eine vaskuläre Hyperplasie des Synoviums wurde in der KOA-Gruppe beobachtet und war in der mit Nanopartikeln behandelten Gruppe signifikant reduziert. Die Safranin-O-Färbung zeigte eine zerstörte Knorpelmatrix bei KOA-Mäusen, während die Mäuse, die mit der Nanopartikel-Kollagenmischung behandelt wurden, eine signifikant bessere Knorpelmatrix aufwiesen.
Die morphologischen Merkmalswerte waren in der mit Kollagen II behandelten Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe höher. Immunhistochemische Färbungen zeigten eine reduzierte Neutrophileninfiltration in den Synovialregionen der mit Nanopartikeln behandelten Mäuse im Vergleich zur KOA-Gruppe. Es ist wichtig, eine Verstopfung des Arzneimittels während der Injektion von Typ-II-Kollagenase und mehreren Nanopartikeln zu vermeiden.
Die therapeutische Wirkung mehrerer Nanopartikel konnte an Tiermodellen für Verletzungen des vorderen Kreuzbandes versucht werden.
