Stratégies d’évaluation des comportements de type autistique chez la souris

Résumé

Les modèles de rongeurs sont des outils précieux pour étudier les comportements de base liés aux troubles du spectre autistique (TSA). Dans cet article, nous nous penchons sur deux tests comportementaux permettant de modéliser les principales caractéristiques des TSA chez la souris : l’auto-toilettage, qui évalue le comportement répétitif, et le test d’interaction sociale à trois chambres, qui documente les déficiences sociales.

Résumé

Le trouble du spectre autistique (TSA) est une affection neurobiologiquement complexe avec une étiologie génétique hétérogène. Cliniquement, les TSA sont diagnostiqués par des troubles de la communication sociale et des comportements restrictifs ou répétitifs, tels que battre des mains ou aligner des objets. Ces modèles comportementaux peuvent être observés de manière fiable dans des modèles murins avec des mutations génétiques liées aux TSA, ce qui en fait des outils très utiles pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires sous-jacents dans les TSA. Comprendre comment les changements génétiques affectent la neurobiologie et les comportements observés dans les TSA facilitera le développement de nouveaux composés thérapeutiques ciblés pour améliorer les troubles comportementaux de base. Notre laboratoire a utilisé plusieurs protocoles englobant des procédures de formation et de test bien décrites qui reflètent un large éventail de déficits comportementaux liés aux TSA. Ici, nous détaillons deux tests pour étudier les principales caractéristiques des TSA dans des modèles murins : l’auto-toilettage (une mesure du comportement répétitif) et le test d’interaction sociale à trois chambres (une mesure de l’approche d’interaction sociale et de la préférence pour la nouveauté sociale).

Introduction

Le trouble du spectre autistique (TSA) est un trouble du développement cérébral qui se manifeste par des troubles de la communication ou de l’interaction sociale et des modèles restreints et répétitifs de comportements ou d’intérêts ^1,2. En 2022, environ 1 enfant sur 100 a été diagnostiqué avec un TSA dans le monde³. Selon les Centers for Disease Control and Prevention (CDC, États-Unis), la prévalence des TSA a augmenté de 30 % depuis 2008 et a plus que 2 fois augmenté depuis 2000 ^4,5. Les personnes atteintes de TSA peuvent également présenter des comorbidités, telles qu’une déficience intellectuelle (DI) (35,2 %, QI ≤ 70), un trouble déficitaire de l’attention/hyperactivité (TDAH) (50 % à 70 %) et d’autres syndromes génétiques2,4,6.

L’utilisation de modèles animaux dans la recherche sur les TSA, en particulier les rongeurs, a fourni des informations significatives sur l’impact de divers facteurs environnementaux, notamment l’alimentation, les médicaments, l’exercice et l’enrichissement 7,8,9,10, ainsi que des mutations génétiques telles que Shank, Fmr1, Mecp2, Pten et Tsc ^mutant 11,12,13 , sur les symptômes du TSA. Les modèles murins sont couramment utilisés pour étudier les TSA en raison de leur nature sociale et de leurs caractéristiques génétiques, biochimiques et électrophysiologiques partagées avec les humains. Par exemple, par la délétion d’un gène spécifique (tel que Shank3, Fmr1, Cntnap2 et Pten), les comportements sociaux et répétitifs aberrants peuvent être récapitulés, ce qui confère une forte validité à l’étude 14,15,16. Ici, nous fournissons des protocoles pour étudier les parallèles entre les modèles génétiques animaux et les symptômes humains des TSA¹⁷. Nous décrivons l’auto-toilettage et le test d’interaction sociale à trois chambres, qui reflètent deux symptômes principaux chez les patients atteints de TSA, à savoir des modèles de comportement restreints et répétitifs et des troubles de l’interaction sociale (communication), respectivement.

Sur la base du DSM-V (Manuel diagnostique et statistique des troubles mentaux de l’American Psychiatric Association 5^e édition) et de la CIM-11 (Classification internationale des maladies 11e révision), les patients atteints de TSA adoptent des modèles de comportement restreints, répétitifs et stéréotypés, en particulier des comportements répétitifs non fonctionnels centrés sur le corps (BFRB), tels que le balancement, le timming, le rongeage des ongles, l’arrachage des cheveux, le grattage de la peau ou la marche des orteils18^{, 19}. Planche à billets Chez les animaux, le comportement répétitif se manifeste par un toilettage prolongé et répétitif. Le toilettage est l’une des activités innées les plus courantes chez les rongeurs, avec environ 40 % de leur temps de réveil consacré au toilettage^20,21. Il est instinctif pour les souris de lécher leur peau ou leur fourrure pour éliminer la saleté étrangère de la surface du corps, ce qui sert à maintenir la propreté du corps, à prévenir les blessures, à éliminer les parasites et à réguler la température. Le toilettage est classé en deux types : le toilettage social (allo-grooming), impliquant le toilettage par une autre souris, et l’auto-toilettage. L’auto-toilettage montre un modèle de séquençage stéréotypé et conservé composé de quatre étapes (la plupart du temps discrètes et non séquentielles)^22,23. Au stade I (nage elliptique), les souris initient le toilettage en léchant d’abord les deux pattes, puis en toilettant le nez avec leurs pattes. Au stade II (AVC unilatéral), les souris utilisent leurs pattes pour essuyer leur visage de manière asymétrique. Au stade III (AVC bilatéral), les souris s’essuient symétriquement la tête et les oreilles. Au stade IV (léchage du corps), les souris passent au léchage du corps en déplaçant leur tête vers l’arrière et peuvent étendre le toilettage à la queue et aux organes génitaux. Lorsque les souris sont placées individuellement dans une cage transparente, le comportement d’auto-toilettage peut être facilement reconnu et observé. Les souris augmentent leur comportement d’auto-toilettage lorsqu’elles sont confrontées au stress, à la douleur ou à des perturbations sociales, ce qui rend le test d’auto-toilettage crucial lors de la recherche sur les troubles neurologiques^. Différents modèles murins de TSA, y compris ceux présentant des mutations génétiques (telles que Fmr1^−/y, Shank3B^−/-, NL1^−/−), des interventions pharmacologiques (telles que DO34, PolyI :C) et des souches consanguines spécifiques (comme BTBR et C58/J), ont démontré un comportement d’auto-toilettage répétitif excessif 24,25,26,27.

Les altérations du comportement social servent de critère d’évaluation des TSA. Selon le DSM-V et la CIM-11, les patients atteints de TSA présentent des troubles persistants de la communication sociale et de l’interaction sociale^{1 8,19}. Ceux-ci peuvent se manifester par des déficits de communication verbale et non verbale (c’est-à-dire un contact visuel, des gestes et une expression faciale anormaux), un manque de partage d’intérêt et d’émotions avec les autres, une inconscience des indices contextuels sociaux ou des difficultés à développer des relations. Conformément aux symptômes de déficience sociale, diverses tâches comportementales ont été conçues et optimisées pour évaluer les interactions sociales chez la souris, telles que le test d’interaction sociale directe, l’approche sociale à trois chambres et le test de préférence pour la nouveauté sociale, et l’analyse des vocalisations ultrasonores (USVs)^16,28. Le test d’interaction sociale à trois chambres est une expérience largement utilisée pour évaluer les comportements liés aux TSA 17,29,30,31. L’appareil comprend trois chambres reliées entre elles ; Les chambres gauche et droite contiennent une cage grillagée qui peut être vide ou occupée par une souris, ce qui permet à la souris de test d’interagir librement avec les deux cages. Deux mesures permettent d’évaluer différents aspects du comportement social chez la souris de test au cours de l’expérience à trois chambres. Tout d’abord, la souris test est notée en fonction du temps passé à interagir avec la cage vide (nouvel objet) par rapport à une cage contenant une nouvelle souris. Cette partie de la tâche donne un aperçu de la sociabilité de la souris. Ensuite, une souris inconnue est placée dans la cage grillagée précédemment vide. La différence de temps dans l’interaction de la souris test entre la souris inconnue et la souris familière mesure la préférence pour la nouveauté sociale. Dans cette partie de la tâche, une souris de contrôle préfère interagir avec une souris inconnue plutôt qu’avec la souris précédemment rencontrée, qui était déjà présente dans la partie sociabilité du test. Des déficits dans l’interaction sociale et une diminution de la motivation à interagir avec de nouvelles souris sont généralement trouvés dans le modèle murin de TSA. Le test à trois chambres s’est avéré robuste depuis son invention. Il a été utilisé pour étudier les phénotypes sociaux dans divers modèles murins de TSA, notamment Fmr1^−/−, Shank3B^−/-, Cntnap2^−/− et la souche consanguine BTBR^{32,33,34,35,36}.

Les deux tests utilisent le comportement naturel et spontané des souris comme outils méritoires pour étudier le comportement de type TSA. Puisqu’ils sont considérés comme des tests à faible stress, il est possible d’effectuer les deux tests au sein du même groupe de souris pour mesurer le comportement de type TSA, le test d’auto-toilettage étant effectué en premier et le test d’interaction sociale à trois chambres les jours suivants. Les protocoles que nous fournissons représentent un outil essentiel pour l’évaluation du comportement de type TSA et le développement de nouvelles thérapies 29,30,31. En fin de compte, ils contribueraient à améliorer les résultats pour les personnes touchées par les TSA.

Protocole

Toutes les procédures et expériences impliquant des sujets animaux ont été approuvées par les règlements du Comité de protection des animaux de l’établissement (FACC), qui suivent les lignes directrices établies par le Conseil canadien de protection des animaux, le Comité de protection des animaux de l’Université McGill et le Bureau du bien-être des animaux de laboratoire des NIH (OLAW). Le numéro d’assurance du Service de santé publique (PHS) de l’Université McGill est le F-16-00005(A5006-01).

1. Préparation des animaux

1. Souris d’essai : Choisissez des souris mâles et/ou femelles âgées de 2 à 3 mois (8 à 13 semaines). Toutes les souris utilisées dans les expériences ici sont issues du fond C57BL/6J. Pour le comportement d’auto-toilettage et les tests d’interaction sociale à trois chambres, la gamme généralement acceptable de souris par groupe suggérée est n = 10-15, avec un minimum de n = 8.
   1. Pour les souris génétiquement modifiées, ajoutez toujours des compagnons de portée de type sauvage comme témoin. Associez le groupe témoin au groupe expérimental en termes de patrimoine génétique, d’âge, de sexe et de conditions de logement. Les souris transgéniques homozygotes utilisées dans cette étude sont de taille normale et ne présentent aucune anomalie physique grossière.
      REMARQUE : Dans certains cas plus complexes, les chercheurs peuvent vouloir évaluer plus de deux génotypes (c.-à-d. type sauvage, hétérozygote, homozygote), étudier les effets des médicaments (c.-à-d. traitement, traitement par véhicule, non-traitement) ou comparer les mâles et les femelles. Lorsque l’on travaille avec des souris femelles, il est crucial de prendre en compte leurs cycles œstraux. Bien que les cycles œstraux féminins n’influencent pas de manière significative les comportements d’auto-toilettage, des études ont indiqué que ces cycles peuvent avoir un impact sur l’approche sociale et la préférence pour la nouveauté sociale^37,38.
2. Souris étrangères : Utilisez au moins 8 souris de type sauvage pour le test à trois chambres. Utilisez 2 cages, 4 souris par cage, du même âge, du même sexe et le même patrimoine génétique (C57BL/6J) que les souris testées. Assurez-vous que les souris étrangères n’ont pas eu d’interaction préalable avec les souris testées.
3. Logement : Hébergez en groupe 3 à 5 souris par cage domestique (7 po L x 11 po L x 5 po H) et maintenez-les sur un cycle lumière/obscurité de 12 h. Fournir aux souris un accès à la nourriture et à l’eau dans la cage ad libitum.
   REMARQUE : Dans les pièces de logement de ce bureau, les lumières s’allument à 7h00.
4. Transférer les souris vers l’installation d’essai comportemental sur les animaux pendant au moins 1 semaine avant les expériences^39,40.
5. Manipulation et tests comportementaux : Effectuez le test à un moment constant de la journée. Ajustez l’heure de début en fonction du cycle d’éclairage dans les pièces du logement de la souris. Tout d’abord, transférez les souris dans la salle de test et laissez-les s’habituer à la salle de test pendant au moins 30 minutes sous un éclairage tamisé avant de commencer les tests comportementaux.
   REMARQUE : Dans cette étude, les expériences sur les souris ont été systématiquement effectuées entre 7h00 et 15h00 (par rapport à 7h00 lumière allumée et 19h00 lumière éteinte). Par conséquent, le lancement réel du test de comportement a lieu vers 8 heures du matin.

2. Préparation de la salle et de l’équipement

1. Préparez une petite pièce dont la surface totale au sol se situe entre 16 et 36 pieds (5 à 12 m² ; pièce de 6 m² dans ce bureau). Maintenir des niveaux constants de température, d’éclairage (éclairage tamisé réglable) et de bruit (idéalement insonorisé) pour toutes les expériences.
   1. Si vous utilisez des lampadaires (ampoules 23 W, 120 V), placez-les à des endroits symétriques et de chaque côté, à au moins 1 m de l’appareil à trois chambres, de manière à éclairer les deux chambres latérales de manière égale.
2. Placez l’appareil sur une table blanche portable. Pour l’expérience d’auto-toilettage, utilisez des cages propres et transparentes (7 po L x 11 po L x 5 po H) ; Utilisez une cage par souris de test. Remplissez les cages avec environ 1 cm de litière fraîche sans matériau de nidification. Utilisez le même type de litière que dans la cage domestique (ici, litière d’épis de maïs frais ([1/4" Corncob bedding]).
   REMARQUE : Les cages doivent être de la même taille que les cages domestiques, avec un couvercle de filtre placé sur le dessus, mais sans grille métallique (qui est normalement utilisée pour contenir des bouteilles et la livraison de nourriture).
3. Pour l’expérience sociale, utilisez un ensemble d’appareils à trois chambres⁴¹. Chaque chambre mesure 20 cm x 40 cm x 22 (h) cm et est entourée de murs en plexiglas. Chaque chambre latérale est accessible par le centre par des portes coulissantes transparentes qui peuvent être retirées (5 x 8 cm). Utilisez deux cages grillagées (diamètre : 7 cm, hauteur : 15 cm ; avec couvercles (vides ou contenant des souris étrangères). La cage est surélevée et entourée de barres lisses en acier inoxydable (diamètre des barres : 3 mm, espacement des barres : 7 mm). N’incluez pas le temps d’interaction entre le fait de s’asseoir sur le dessus des cages.
   1. Si des souris mâles et femelles sont toutes deux incluses dans l’expérience, étiquetez chaque cage métallique pour sa fonction dédiée afin de minimiser la contamination croisée.
4. Installez des caméras aériennes ou frontales sur des trépieds pour les enregistrements vidéo. Assurez-vous que les caméras sont complètement chargées et qu’elles disposent d’un espace de stockage suffisant.
5. Entre chaque expérience sur la souris de test, nettoyez soigneusement la configuration à trois chambres et les cages grillagées avec un agent de nettoyage inodore (ici, Versa-Clean). Diluez l’agent de nettoyage dans l’eau du robinet dans un rapport de 1:40, appliquez-le sur la surface souillée et séchez les surfaces avec une serviette en papier avant le prochain test pour minimiser l’odeur résiduelle de la souris précédente.
   REMARQUE : L’alcool éthylique (70 %) ou d’autres désinfectants odorants ne doivent pas être utilisés pour nettoyer l’appareil pendant les tests d’interaction sociale, car ils peuvent avoir un impact sur le comportement social des rongeurs.
6. Utilisez des stores d’intimité, tels que des panneaux en plastique blanc, qui peuvent être placés autour de l’appareil pour éliminer les repères extérieurs de la pièce.
7. Préparez un petit tableau blanc et un marqueur. Enregistrez les informations essentielles sur le tableau blanc, notamment le numéro de souris, le titre de l’expérience, la date et l’heure de l’expérience.
   REMARQUE : Le tableau blanc est présenté à la caméra à la fin de l’enregistrement pour empêcher la personne qui marque les points de connaître le numéro de la souris avant d’évaluer le comportement de celle-ci. L’étude a permis de s’assurer que le comportement de notation individuel restait aveugle aux groupes expérimentaux afin de minimiser les biais potentiels.

3. Manipulation

1. Effectuer des procédures de manipulation pendant trois jours consécutifs avant le début des expériences comportementales.
2. Effectuez des séances de manipulation dans la même salle de test à une heure constante, idéalement le matin lorsque les souris sont plus actives.
3. Chacun des 3 jours, amenez les souris dans la salle de test et laissez-les tranquilles pendant 30 minutes dans une pénombre pour s’acclimater.
4. Après une période d’acclimatation de 30 minutes, ouvrez la cage et introduisez une main gantée dans la cage. Laissez les souris explorer la main pendant 1 min.
5. Placez doucement les souris sur la main (ou utilisez un petit tube en carton pour les ramasser), en les tenant sans serrer. Laissez les souris explorer la main et le poignet pendant 1 à 2 min. Dans les cas où une souris est nerveuse ou agressive, placez-la sur la grille et laissez-la se calmer.
6. Continuez à manipuler jusqu’à ce que la souris devienne confortable en restant sur la main. Changez toujours les gants avant d’introduire les mains dans la cage suivante.
7. Après avoir manipulé chaque cage de souris, placez-les doucement dans leur cage domestique, puis répétez la procédure.
8. Mettez de nouveaux gants et manipulez les souris étrangères lorsque toutes les souris expérimentales et témoins ont été manipulées pour éviter d’affecter les souris testeuses avec des messages parfumés.
9. Manipulez les souris étrangères de la même manière.
10. Facultatif : Habituez les souris étrangères à la cage grillagée et à l’appareil à trois chambres pendant 10 à 15 min.
    REMARQUE : Cette séance d’accoutumance aide à réduire l’agitation et les comportements aberrants chez les souris étrangères pendant le test à trois chambres. Cependant, pour le test à trois chambres, cette étude ne prend en compte que le comportement d’approche sociale (reniflement) de la cage initié par la souris test, qu’une souris étrangère soit présente ou non. Le reniflement réciproque par la souris étrangère n’est pas observable de manière fiable dans cet essai et, par conséquent, n’est pas compté. En raison de cette limitation de l’essai à trois chambres et pour minimiser la contamination croisée des signaux chimiques (tels que les odeurs), dans ce cas, les souris étrangères n’avaient pas d’expérience préalable avec la cage métallique et l’appareil avant le début de l’expérience.

4. Méthode 1 : Auto-toilettage pour les comportements répétitifs (Figure 1A)

1. Effectuez toutes les expériences comportementales entre 7h00 et 15h00.
2. Allumez les lumières tamisées, comme décrit ci-dessus. Nettoyez la table et installez la pièce.
3. Préparez chaque cage d’essai avec une fine couche de litière fraîche (comme décrit à l’étape 2.2).
4. Placez 1 à 2 cages sur la table, séparées les unes des autres et de l’environnement de la pièce par des œillères en plastique blanc.
5. Placez une caméra devant chaque cage pour capturer la souris de test.
6. Transférez toutes les souris dans la pièce et couvrez les cages d’une feuille de tissu pendant le processus de transfert pour éviter le stress.
7. Retirez la feuille une fois que les souris sont placées dans la salle d’essai, en les laissant dans la pièce pendant au moins 30 minutes avec des lumières tamisées avant le début de l’expérience.
8. Au début du test, notez le numéro d’identification de la souris et les informations de test sur un tableau blanc (comme décrit à l’étape 2.7).
9. Démarrez l’enregistrement et placez la souris de test dans la cage de test.
10. Quittez la salle pendant la session d’enregistrement de 20 minutes.
11. Pour chaque test, considérez les 10 premières minutes comme une accoutumance. Utilisez les 10 minutes suivantes pour observer et noter le comportement de toilettage (voir rubrique 6).
12. Après 20 min, retournez dans la chambre. Présentez le tableau blanc à la caméra et arrêtez l’enregistrement.
13. Remettez doucement la souris de test dans la cage domestique et répétez l’expérience.
    REMARQUE : Contrebalancer l’ordre des tests entre les groupes expérimentaux et les groupes témoins afin de réduire les diverses influences extérieures.
14. Une fois les expériences terminées, renvoyez les souris dans leur salle d’hébergement.

5. Méthode 2 : Test d’interaction sociale à trois chambres (Figure 2A)

1. Effectuez toutes les expériences entre 7h00 et 15h00.
2. Nettoyez la table et allumez les lumières (lumières tamisées).
3. Placez l’instrument en plexiglas à trois chambres sur la table entourée de stores d’intimité.
4. Placez une caméra au-dessus de votre tête, en vous assurant que les trois chambres sont dans le cadre d’enregistrement de la caméra.
5. Transférez les souris de test et les souris étrangères dans la pièce. Couvrez les cages avec une feuille de tissu pendant le processus de transfert et retirez la feuille une fois dans la pièce.
6. Laissez les souris dans la pièce pendant au moins 30 minutes avec un éclairage tamisé avant le début de l’expérience.
7. Accoutumance
   1. Gardez les trois chambres vides pendant la phase d’habituation.
   2. Pour commencer, sélectionnez une souris de test et écrivez le numéro d’identification sur le tableau blanc.
   3. Ensuite, placez doucement la souris de test dans le compartiment central pendant que les portes coulissantes sont encore fermées.
   4. Commencez l’enregistrement et ouvrez les portes pour permettre à la souris de test d’explorer les trois chambres vides.
   5. Sortez de la pièce et laissez la souris de test s’habituer à l’appareil pendant 10 min.
   6. Après 10 minutes d’accoutumance, retournez dans la chambre. Guidez doucement la souris de test vers le compartiment central et fermez les portes coulissantes.
   7. Affichez le tableau blanc et arrêtez l’appareil photo.
8. Approche sociale (nouvel objet en cage métallique contre nouvelle souris inconnue 1)
   1. Positionnez deux cages grillagées dans les chambres gauche et droite. Placez ces cages en diagonale l’une en face de l’autre dans les coins de chaque chambre, en assurant un dégagement de 5 cm du mur, permettant à la souris de test de courir autour des cages. De plus, assurez-vous que les cages ne font pas directement face aux portes de la chambre.
   2. Choisissez une souris inconnue et introduisez-la dans l’une des cages grillagées, alors qu’aucune souris n’est présente dans l’autre cage grillagée.
   3. Pour démarrer le test, appuyez sur enregistrer et retirez les deux portes coulissantes. Quittez la pièce.
   4. Laissez la souris d’essai explorer une cage grillagée vide dans une chambre et une cage contenant une souris inconnue (nouvelle souris inconnue 1 ou S1) dans l’autre chambre pendant 10 min.
   5. Après 10 min, retournez dans la chambre. Affichez le tableau blanc à la caméra et terminez l’enregistrement.
   6. Réintroduisez la souris dans le compartiment central et fermez les portes interconnectées.
      REMARQUE : Ne retirez pas les cages métalliques de la configuration après avoir terminé le test d’approche sociale afin qu’elles restent dans la même position pendant toute la tâche.
9. Préférence pour la nouveauté sociale (roman souris inconnue 2 contre souris roman 1)
   1. Placez une nouvelle souris jamais rencontrée dans la cage grillagée précédemment vide (novel stranger mouse 2 ou S2).
      REMARQUE : S2 doit provenir d’une cage domestique différente de celle de S1.
   2. Démarrez l’enregistrement et ouvrez les portes interconnectées pour permettre à la souris de test d’explorer l’appareil pendant 10 min.
   3. Quittez la pièce. La souris de test explorera deux cages grillagées : l’une avec la souris S1 précédemment rencontrée au stade de l’approche sociale et l’autre avec la souris S2 nouvellement introduite.
   4. Après 10 min, retournez dans la chambre. Affichez le tableau blanc à la caméra et terminez l’enregistrement.
   5. Renvoyez toutes les souris (souris de test et souris inconnues) dans leurs cages domestiques.
   6. Nettoyez soigneusement les chambres et les cages grillagées avec un désinfectant sans odeur. Assurez-vous que l’appareil est sec avant de l’utiliser pour la prochaine expérience.
   7. Répétez l’expérience pour toutes les souris de test restantes.
      REMARQUE : Alternez le placement des cages avec des souris S1 et S2 entre les chambres gauche et droite pour les différentes souris de test. Le contrepoids empêche une préférence biaisée vers une chambre particulière de l’appareil.
   8. Après le test, renvoyez les souris dans le logement.
   9. Entre chaque partie du test, arrêtez et redémarrez la caméra, ce qui donne 3 fois des vidéos de 10 minutes par souris de test.

6. Scoring et analyse statistique

1. Equipement nécessaire
   1. Utilisez deux chronomètres et un ordinateur ou un ordinateur portable avec les logiciels suivants : Microsoft Excel, GraphPad Prism et d’autres programmes statistiques tels que SPSS pour la notation, le traçage des graphiques et l’analyse statistique.
2. Notation de l’auto-toilettage
   REMARQUE : Lorsqu’une souris est placée dans un environnement confortable, un comportement d’auto-toilettage spontané à faible stress peut être observé. En règle générale, les souris initient le toilettage en se léchant les pattes autour du nez et des moustaches (stade I). Cela peut être suivi par les stades II et III, où la souris procède à l’essuyage de tout son visage et de sa tête avec ses pattes. Au stade IV, la souris continue de se toiletter le corps et de se lécher la queue¹⁴. Étant donné la rareté du toilettage des oreilles (stade III) et de la queue (stade IV) au cours d’une période de test de 10 minutes, et dans le but d’améliorer la clarté de l’analyse manuelle, le comportement d’auto-toilettage a été classé en deux types principaux : le toilettage rostal et le toilettage caudal. Le toilettage rostral implique des activités telles que le léchage des pattes, le toilettage du nez et le lavage minutieux du visage, des oreilles et de la tête. Le toilettage caudal consiste à lécher la partie du corps couvrant des zones telles que le ventre, le dos, les membres postérieurs et la région génitale, ainsi que la queue.
   1. Observez attentivement le comportement de toilettage et notez les épisodes. Une séance de toilettage individuel se produit lorsque la souris s’engage dans un seul cas d’auto-toilettage. Envisagez une séance de toilettage à partir du moment où elle commence jusqu’à ce qu’elle s’arrête, quels que soient les comportements de toilettage spécifiques impliqués.
   2. Si la souris de test interrompt son toilettage pendant quelques secondes sans changer de position, comptez-la comme faisant partie du même combat. Cependant, si la souris arrête de se toiletter et commence à explorer, considérez que le toilettage est terminé.
   3. De plus, n’enregistrez une séance de toilettage complète que lorsque la souris toilette continuellement de l’avant vers l’arrière (du stade I au stade IV).
   4. Documentez le temps total de toilettage, le nombre de séances de toilettage et le nombre de séances de toilettage complet observées au cours de la période de test de 10 minutes, en marquant les observations à des intervalles de 2 minutes, 5 minutes et 10 minutes.
3. Test d’interaction sociale à trois chambres
   L’analyse détermine le moment et la fréquence de l’interaction de reniflage avec chaque souris (roman S1 et cage vide pour l’approche sociale, et S1 et roman S2 pour la préférence pour la nouveauté sociale).
   1. Utilisez deux minuteries pour enregistrer le temps d’interaction avec la souris dans chaque cage et le temps total passé dans chaque chambre. Pour chaque partie du test (approche sociale et préférence pour la nouveauté sociale), notez le nombre de fois où la souris test entre dans chaque chambre (nombre total d’entrées).
   2. Déterminer le temps en compartiment(s) par la présence du corps de la souris testeuse à l’intérieur d’une des chambres (quatre pattes doivent y entrer).
   3. Notez le temps d’interaction (s) lorsque la souris de test renifle la nouvelle souris inconnue (contact direct avec le visage ou reniflement de la queue de la souris étrangère) ou renifle la cage vide. Ne considérez pas le fait de s’asseoir sur le dessus de la cage comme une interaction.
   4. Enregistrez à 2 min, 5 min et 10 min. Faites une analyse en fonction du temps.
   5. Comparez l’indice de discrimination de sociabilité (ID) au sein des groupes.
      REMARQUE : L’ID est calculé comme suit : DI = (temps d’interaction avec la souris S1 - temps d’interaction avec la cage vide)/temps d’interaction total x 100. Pendant la partie nouveauté sociale, les souris témoins interagiront davantage avec S2 (souris inconnue) qu’avec S1 (souris familière). L’ID de nouveauté sociale (mémoire sociale) est calculée : ID = (temps d’interaction avec la souris S2 - temps d’interaction avec la souris familière (S1))/ temps total d’interaction x 100.
4. Analyse statistique
   1. Utilisez un test T d’étudiant non apparié à deux queues pour calculer les valeurs p avec un niveau significatif fixé à p < 0,05 pour le temps d’auto-toilettage, les périodes et les périodes complètes, où il n’y a que deux groupes.
   2. Pour le test à trois chambres, utilisez le test T d’un élève pour calculer la signification statistique du total des entrées entre deux groupes. Lorsque l’hypothèse de la variance égale des données entre les groupes n’est pas vérifiée (test de Levene p < 0,05), effectuez un test T de Welch pour ajuster l’écart et comparer les moyennes des groupes indépendants.
      REMARQUE : La mesure du nombre total d’entrées permet d’évaluer l’activité globale des souris. Des préoccupations potentielles peuvent survenir (liées à une déficience motrice et à des niveaux d’anxiété élevés chez les souris) si le groupe expérimental explore l’appareil à trois chambres beaucoup moins que le groupe témoin. Pour y remédier, envisagez d’évaluer la fonction motrice et le comportement anxieux à l’aide de tests comportementaux de type dépressif, car une exploration diminuée pourrait être attribuée à ces conditions⁴².
   3. Utilisez une ANOVA à facteurs mixtes pour comparer le temps passé dans chaque chambre et le temps d’interaction pour chaque test. En fonction du nombre de groupes et de facteurs, utilisez une ANOVA mixte à deux facteurs (2 facteurs : génotype et côté de la chambre, ou interaction avec la cage vide et S1, ou S1 et S2), ou une ANOVA mixte à trois facteurs (3 facteurs : génotype, traitement et côté de la chambre, ou interaction avec vide et S1, ou S1 et S2). Cette analyse est particulièrement utile pour révéler l’interaction sociale statistiquement significative des souris entre divers facteurs.
      REMARQUE : Ces facteurs comprennent l’effet principal du génotype (impact de différents antécédents génétiques sur les comportements sociaux), l’effet principal de l’interaction avec la cage (reniflement et préférence pour une nouvelle souris étrangère par rapport à une cage vide ou une souris précédemment rencontrée), l’effet principal du traitement (impact de divers traitements médicamenteux sur les comportements sociaux des souris) et l’interaction génotype x traitement (révéler comment le traitement appliqué affecte le génotype).
   4. Par la suite, utilisez le test post hoc de Bonferroni (niveau α fixé à 0,05) pour évaluer davantage la comparaison entre différents groupes.

Résultats

La cible de la rapamycine chez les mammifères (mTOR) joue un rôle crucial dans le système nerveux central (SNC) en régulant la synthèse de novo des protéines et en réprimant l’autophagie⁴³. Une dérégulation de la voie mTOR et de la synthèse des protéines synaptiques a été impliquée dans l’ASD²⁸. Des études à l’échelle du génome sur des patients atteints de TSA ont identifié diverses mutations génétiques a...

Discussion

La plupart des causes étiologiques, des changements pathologiques et des marqueurs biologiques des TSA ne sont pas connus ou disponibles. Le diagnostic des TSA est principalement basé sur deux ensembles établis de symptômes cliniques : des déficits persistants dans la communication sociale et des comportements répétitifs excessifs 18,19,55. Étant donné que les TSA sont un trouble du spe...

matériels

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1/4'' Teklad Corncob Bedding	Harlan, TEKLAD	7092-7097	The raw stock for corncob bedding products  is 100% corncob. No other components or additives are used.
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Nitrile Powder Free Examination Gloves	Aurelia, Transform	ASTM D6319-00	Tested for use with Chemotherapy drugs per ASTM D6978
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TÅGARP floor lamp and bulbs	IEKA	604.640.49	Bulbs are 23 W 120 V.
Ugo Basile Sociability Apparatus	Stoelting	60450	The Sociability Apparatus (3-chambered social test) is a valuable tool to study social behaviour in mice.
Versa-Clean	Fisherbrand	PVCLN04	Cleaning agent
Whiteboard and  Low Odor Dry Erase Marker	EXPO	NA	Dry erase markers in bold black