Commencez par broyer 10 milligrammes de Mycobacterium paratuberculosis lyophilisé en une poudre fine à l’aide d’un mortier et d’un pilon. Ajouter cinq millilitres d’adjuvant de Freund incomplet pour obtenir une solution mère de 10 milligrammes par millilitre. Conservez le stock à moins quatre degrés Celsius.
Avant l’immunisation, diluer la solution mère. Ensuite, diluez le peptide MOG 35-55 à deux milligrammes par millilitre et stockez-le à moins 20 degrés Celsius. Mélanger des volumes égaux du MOG 35-55 avec l’adjuvant dans un tube de cinq millilitres avec un homogénéisateur jusqu’à formation d’une émulsion épaisse.
Toutes les 10 secondes de mélange, placez la solution sur de la glace pendant 20 secondes et faites tourner le tube pour récupérer toute la solution. Transférez l’émulsion dans une seringue d’un millilitre, en vous assurant qu’elle est exempte de bulles d’air. Ensuite, ajustez-le avec une aiguille de calibre 27.
Par voie sous-cutanée, injectez 200 microlitres de l’émulsion dans le bas du dos d’une souris anesthésiée. Ensuite, injectez par voie intrapéritonéale une dose de toxine anticoquelucheuse le jour zéro et le deuxième jour après la vaccination. Toutes les souris ont manifesté une maladie monophasique aiguë, caractérisée par un seul pic d’incapacité observé à 14 à 17 jours, suivi d’une récupération partielle des symptômes au cours des 10 jours suivants.
Les souris immunisées avec M. paratuberculosis ont montré une apparition plus précoce après l’immunisation et une plus grande gravité dans la phase aiguë. Les deux groupes ont démontré des poids corporels similaires. Le test de prolifération avec incorporation de thymidine titrée effectué sur les cellules de rate de souris EAE a montré une forte réponse proliférative au peptide MOG 35-55, mais pas à l’ovalbumine.
L’analyse cytofluorométrique a montré une augmentation des lymphocytes T, des cellules dendritiques et des monocytes dans la rate des souris EAE immunisées contre M. paratuberculosis, par rapport aux souris immunisées par le CFA. L’analyse des tissus d’hématoxyline et d’éosine a révélé une infiltration inflammatoire mononucléaire paravasculaire et méningée typique dans le cerveau et la moelle épinière.
